我国生产工具酶的情况

1983年3月22日至3月28日中国科学院生物学部召开了生化试剂会议,着重检查了“1980年-1985年中国科学院遗传工程及分子遗传学工具酶研制、生产规划”。     

地衣芽孢杆菌H-1的鉴定及其产木聚糖酶性质的研究

本实验室分离到一株木聚糖酶高产菌,经形态、生理以及生化鉴定,确认为地衣穿孢杆菌,定名为H-1。对H-1的胞外木聚糖酶进行初步的研究。从碳源利用方面,认为 H-1的木聚糖酶为组成型合成。木聚糖和纤维二糖对它有诱导作用,而木糖和葡萄糖对酶的产生有阻抑作用。对酶解产物分析表明,有小分子糖产生、但并非都是单糖。H-1胞外木聚糖酶经60％硫酸铵沉淀,过DEAE-50柱,以及超过滤,得到了部分纯化酶。该酶作用的最适pH为7.6,在pH4～5范围较为稳定;最适温度为50℃; 70℃25min则完全失活。米氏常数为10.42×10~(-3)g/ml,最大反应速度为0.345μmol/min。2mM Ag~+使酶活增加了1.5倍,2mM EDTA抑制了 22％的酶活性,而2mM Cu~(++)则使酶完全失活。     

枯草杆菌Ki-2-132株运载体质粒pKC1的构建和特性

pc194质粒在枯草杆菌(Bacillus subtilis)Ki-2-132株中的稳定性比在168株中的稳定性高。在EcoRI位点将质粒pUB110(Km~c)和pTP-4(Cm~r)重组,获得重组质粒pKC1(km~c Cm~c)。电镜照片表明pKC1 DNA是一环状分子。它可转化Ki-2-132获得同时抗Km和Cm的转化体,其稳定性介于二亲代质粒之间,但更接近于较稳定的pUB110。pKC1在Km~c基因内有单一的BglⅡ切点,在该位点上克隆Ki-2染色体无选择记号的BglⅡ、BamHI或BglⅡ-BamHI片段,获得插入失活的Km~s Cm~r转化体,其中一个(pK15)插入DNA片段的分子量约为1.5Md。pK15稳定性比pKC1低,但还可相当稳定地保持在Ki-2-132中。结果表明,Ki-2-132和pKG1是一个克隆外源DNA的系统。     

枯草杆菌和大肠杆菌融合转移双复制功能杂种质粒pTZ22的研究

在大肠杆菌C600(pTZ22)(Km~rTc~rAp~r)和枯草杆菌Ki-2-132(Sm~rIle~-Thr~-Val~-)(简称A系统)以及在枯草杆菌Ki-2-132(pTZ22)(Km~r)和大肠杆菌C600(简称B系统)菌株之间,通过细胞融合,从两个方向转移pTZ22。A系统获得一批抗Km Sm融合子,B系统获得一批抗Km Ap和Tc的融合子,融合频率为10~(-4)—10~(-6)。融合子的抗性是稳定的,并且革兰氏染色、产酶和产孢匦与不带质粒的亲本相同。DNA的电泳图证明,除了不带质粒的亲本无质粒带外,其它菌株都有质粒带,A系的电泳相同,B系的则不同,原因尚不清楚。用融合子的质粒DNA转化ki-2-132和C600都获得了转化体,其转化频率因实验条件不同而有差异。以上结果表明,大肠杜菌和枯草杄菌细胞之间能够相互融合,通过融合能从A、B两个方向转移质粒pTZ22,枯草杆菌的蛋白酶不阻碍细胞融合和质粒转移。     

从Staphylococcus aureus 307株分离的三个质粒在Bacillus subtilis Ki-2和168株中的表达和特性

Staphylococcus aureus 307株是临床分离的一多重耐药株,其中包括抗氯霉素(Cm~R),抗卡那霉素(Km~R)和抗四环素(Tc~R)。实验结果表明,这三种抗药性是分别为三个质粒所决定的。我们把它们分别称为pC307、pK307和pT307。通过转化把三个质粒引入Bacillus subtilis Ki-2和168株,获得Cm~R Km~R Tc~R转化体。本文研究了这些质粒所携带的抗药基因在Ki-2和168株中的表达,以及质粒在新宿主中的相容性和稳定性。     

遗传工程

生物科学的飞速发展,特别是分子生物学和分子遗传学的新进展,使人们对控制生物体系有了前所未有的突破,从而导致生物工程学的蓬勃发展;而生物工程学利用遗传工程、细胞学、酶学及发酵工艺等方面的新技术,又对工、农、医及能源利用、环境卫生等重大问题的解决开辟了崭新的途径和前景,故此被喻为第二次工业革命。为了便于广大读者对新兴学科的了解,本刊特设生物工程专栏,拟刊登一系列文章,反映这一重大发展,以供参考。     

第十号探究报告:“关于在生命科学中研究和发展开拓技术与基础技术的基本计划”

像重组DNA技术和细胞融合技术这样的基因和细胞技术,正获得快速的进展。这种进展为先进的基础研究创造着一个强有力的手段,而这种基础研究关系到与致癌有关的基因的结构分析,与高血压有关的一些基因的结构分析和乙酰胆碱受体基因碱基顺序的测定。这种进展也为发展如胰岛素,生长激素和干扰素这样有价值的药物的先进研究     

外源基因表达

体外重组DNA技术,在很多方面已经被用来导入外源遗传物质到一个新的细胞里,其目的常常是分离以及在结构上研究一个特定的DNA片段。可是,主要目的是在新的寄主细胞中获得外源基因的表达。 到达新寄主的某些外源基因,其表型至少在定性上与在原寄主中是一样的(表一)。     

通过枯草杆菌原生质体融合转移pUB110质粒的研究

在脱氧核糖核酸酶(DNase)存在的情况下,用聚乙二醇(PEG)方法,将枯草杆菌BD366(pUB110)(Thr~- Try~- Az~- Km~r Sm~s)的原生质体与枯草杆菌Ki-2-132(Thr~- Val~- Ile~- Km~sSm~r)的原生质体进行融合,在再生培养基上再生细胞壁,获得同时抗Km和Sm的融合体。融合频率在10~(-4)—10~(-7)之间。经测定,融合体的遗传性稳定。从融合体中挑出菌落形态与Ki-2-132相同的融合体A18、B20和B7,其质粒DNA带有Km~r基因,而且其琼脂糖凝胶电泳图与pUB110质粒DNA相同。因而确认pUB110质粒通过原生质体融合而进行转移。     

抗氧化型枯草杆菌碱性蛋白酶高产工程菌的构建——Ⅰ.抗氧化型碱性蛋白酶的提纯及其主要性质的研究

枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)B135工程菌能产生抗氧化型碱性蛋白酶,粗酶经硫酸铵分级沉淀,CM-52层析,Sephadex G-100层析,得到凝胶电泳均一样品,比活达到1700U/mg,是粗酶比活的7.69倍.该酶在60℃时酶活力最高,最适pH为10.2,在50℃时,温浴10min后,酶活降低到原来的50%.该酶受1M H_2O_2作用20min后,仍保持96%的酶活