HER2在人肺腺癌A549细胞培美曲塞继发性耐药中的作用研究

目的:通过体外诱导耐药建立肺腺癌A549细胞系的培美曲塞耐药细胞株,并进一步研究其耐药性发生与HER2/neu之间的关系.方法:通过高浓度反复间歇诱导法建立A549的培美曲塞耐药细胞系.CCK8法检测耐药性、绘制生长曲线,计算倍增时间;流式细胞术法检测细胞周期分布及细胞凋亡水平;RT-PCR法检测耐药株及亲本株HER2/neu的mRNA表达.结果:历经6个月建立了耐药指数为6.7倍的A549/PEM细胞系,其较亲本株的倍增时间延长(33.5± 1.71hvs27.1± 1.15h);流式细胞术检测结果显示:与亲本株比较,A549/PEM处于G1期的细胞比例增加(66.03± 1.61％vs57.92± 1.73％),S期细胞比例降低(30.05± 1.25％vs 37.51±1.31％),差别均有统计学意义(P＜0.05);在PEM作用24h后,A549与A549/PEM细胞凋亡率分别为23.52％和10.99％,差别有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测结果示:A549/PEM较亲本株HER2/neu基因的mRNA表达水平增高(P＜0.05).结论:A549/PEM与亲本株的生物学特性有差别;肺腺癌培美曲塞继发性耐药的产生可能与HER2/neu表达上调有关.     

实时荧光定量RT-PCR对胃癌组织中hMLH1 mRNA的检测及其临床意义

目的:探讨DNA错配修复基因hMLH1在胃癌组织中的表达水平及其临床意义.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对40例胃癌患者的癌组织、40例癌旁胃炎组织及21例慢性胃炎患者的慢性胃炎组织中hMLH1 mRNA进行定量检测,以三磷酸甘油醛脱氢酶基因(hGAPDH)为内参照.结果:胃癌组织、癌旁胃炎组织、慢性胃炎组织中hMLH1 mRNA的相对含量分别是7.23±1:11.91,3.80±5.13,2.01±1.25,三组相比差异有统计学意义(F=3.272,P=0.042),胃癌组织中hMLH1mRNA含量明显高于其他两组,癌旁胃炎组织中含量明显高于非胃癌惠者慢性胃炎组织中的含量(P＜0.05);除hMLH1 mRNA含量在有、无淋巴结转移的胃癌组织中有显著差异(P＜0.05)外,hMLH1 mRNA在胃癌组织中含量受肿瘤直径、浸润深度影响不大(P＞0.05).结论:胃癌组织和癌旁慢性胃炎组织与慢性胃炎组织相比存在hMLH1 mRNA转录差异,这种基因的转录差异可能与胃癌的发生有关,而与胃癌的发展关系不显著.     

体外与非体外循环冠状动脉旁路移植术再血管化率的系统评价

目的：系统评价采用体外循环与非体外循环下冠状动脉旁路移植术比较,治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的再血管化率。方法：计算机检索MEDLINE（1966～2010.3）、EMbase（1984～2010.3）、Cochrane临床对照试验资料库（2010年第2期）和中国生物医学文献数据库（1979～2010.3）,同时手工检索所有纳入试验的参考文献,质量评价后用RevMan 5.0软件进行Meta分析。结果：共纳入2个随机对照试验,包括2276例患者。Meta分析结果显示：体外循环组的再血管化率高于单用非体外循环组,其差异有统计学意义P〈0.00001[OR=1.78,95%C（I1.40,2.26）]。结论：当前的证据表明,体外循环下冠状动脉旁路移植术在治疗冠心病时,再血管化率比非体外循环高;评价患者长期预后有一定指导意义。由于纳入研究随访时间较短,上述结论尚需要高质量、大样本、长时间的随机双盲对照试验进一步证实。     

B细胞性非霍奇金淋巴瘤中CHFR mRNA的表达与其临床病理特征关系的研究

目的:探讨CHFR(checkpoint with FHA and ring finger)基因在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)中的表达水平及其与临床病理特征之间的关系.方法:采用荧光定量PCR方法检测81例B细胞非霍奇金淋巴瘤组织和38例淋巴结反应性增生组织(RH)CHFR mRNA的表达水平.结果:①81例B-NHL组织中低水平表达CHFR mRNA,其中2例表达缺失;而在淋巴结反应性增生组中该基因全部表达,差异有统计学意义(P＜0.05).②B-NHL患者中Ⅰ+Ⅱ期组和Ⅲ+Ⅳ期组CHFR mRNA表达存在差异,Ⅲ+Ⅳ期表达水平低于Ⅰ+Ⅱ期,差异有统计学意义(P＜0.05);B-NHL组按IPI评分分0-1分组和2-5分组,高评分组CHFR mRNA表达量低于低评分组,差异具有统计学意义(P＜0.05);而CHFR mRNA表达量与年龄、性别、有无症状、LDH水平及ECOG评分无相关性.结论:CHFR表达水平的降低在非霍奇金淋巴瘤的发生过程中具有一定作用,并与其恶性程度及进展相关.     

应用实时荧光定量RT-PCR检测宫颈癌及其外周血中VEGF表达的研究

目的:研究血管内皮生长因子在宫颈癌患者癌和癌旁组织及外周血循环细胞中的表达情况,分析其在肿瘤生长与转移中的作用。方法:采用基于TaqMan探针技术的实时荧光定量RT-PCR法检测了50例宫颈癌患者癌及癌旁组织和40例正常宫颈组织标本中VEGF mRNA的表达情况及其对应的外周血中的VEGF mRNA表达,分析其与临床病理参数之间的关系。结果:宫颈癌组织及癌旁组织中VEGF mRNA的表达水平无明显差异,但均与正常宫颈组织的表达水平差异有显著性;宫颈癌组织中VEGF mRNA的表达与肿瘤的组织学类型无明显的相关性;而与肿瘤的临床病理分期、病理分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径、深肌层浸润间均呈显著的正相关。宫颈癌患者外周血中VEGF的表达明显高于对照组水平,与淋巴结是否转移密切相关,但与其他临床病理参数无关。结论:实时荧光定量RT-PCR可以敏感且特异性的检测出宫颈癌组织及外周血中VEGF mRNA的表达,且方法准确可靠,操作方便,在肿瘤的微转移的诊断监测方面有一定的应用价值。VEGF有可能成为治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。     

刺梨多糖提取物对小鼠Ⅱ型糖尿病的干预研究

为探究刺梨多糖(Rosa roxbunghii Tratt. polysaccharide, RRTP)与刺梨不溶性膳食纤维(Rosa roxbunghii Tratt. insoluble dietary fiber, RTIDF)在降血糖功能上是否存在协同作用,该研究对RRTP和RTIDF进行提取、分离和纯化,通过体外实验与体内小鼠Ⅱ型糖尿病的干预实验,测定其抗氧化、降血糖活性,分析体内降血糖功能与小鼠肠道菌群结构关系。结果表明:(1)体外实验发现,RRTP有较好的自由基清除力,能对α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶起显著抑制作用,IC₅₀值分别为0.293、4.251 mg·mL^-1,而RTIDF仅表现对α-淀粉酶活性具有一定的抑制作用。(2)刺梨多糖提取物干预模型小鼠后,逆转了肥胖小鼠继续消瘦的趋势,与CK组(生理盐水)相比,RTIDF和RRTP+RTIDF干预的小鼠的血糖水平显著下调,血清中过氧化氢酶活力明显增强,RRTP+RTIDF优于RTIDF。(3)RRTP和RTIDF干预可降低肝脏的炎症因子,缓解细胞肿胀程度,增加盲肠的吸收细胞数目,恢复肠壁黏膜层。(4)分析肠道菌群发现,RTIDF、RRTP可降低拟杆菌门与厚壁菌门的比例,增加醋酸杆菌等有益菌的种群丰度,RTIDF对于种群的调节作用更加显著。综上所述,RRTP与RTIDF在糖尿病小鼠的血糖干预中具有一定的协同作用,或可共同作为改善Ⅱ型糖尿病的干预剂。     

兔脑皮质静脉闭塞后脑组织Caspase-3活性的变化

目的观察兔脑皮质静脉闭塞后Caspase-3活性的变化。方法采用电凝法制作兔脑皮质引流静脉急性闭塞模型,琼脂糖凝胶电泳、荧光实时定量PCR和Western印迹检测Caspase-3表达。结果脑皮质静脉闭塞后8hCaspase-3活性已升高,24h达高峰,48h明显下降。结论细胞凋亡是脑缺血后脑损伤发生机制,Caspase-3蛋白参与了皮质静脉闭塞后脑缺血后神经元损伤的病理过程。