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原核细胞表达的肾综合征出血热病毒核蛋白免疫原性及免疫保护作用的研究 总被引:3,自引:1,他引:2
对原核细胞表达的肾综合征出血热病毒核蛋白的免疫原性及免疫保护作用进行了研究,结果发现表达的核蛋白具有很强的免疫原性,免疫小白鼠血清中抗肾综合征出血热病毒荧光抗体滴度达1:12800;用免疫小鼠脾细胞和血情做被动免疫保护实验,结果显示脾细胞对部分乳鼠肾综合征出血热病毒的致死感染有保护作用,保护率可达38%,而血清不具有免疫保护作用;同时也未观察到核蛋白免疫血清具有促感染乳鼠早死作用。表明核蛋白能诱导细胞免疫保护但不诱导抗体介导的免疫保护,同时也不引起抗体介导的早死,这就为肾综合征出血热病毒核蛋白作为该病毒基因工程疫苗的成分提供了一定的理论基础。 相似文献
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南海南沙海域沉积物中可培养微生物及其多样性分析 总被引:10,自引:0,他引:10
【目的】为了从南沙海域中分离获得微生物菌种资源,【方法】本文通过沉积物采样、可培养菌分离及16S rRNA鉴定,【结果】从22个站点的沉积物样品中获得349株细菌,分属于87个种。发现产芽孢细菌分布最广,并在10个站点的分离株中占多数;它们是Bacillus,Halobacillus,Brevibacillus,Paenibacillus,Pontibacillus和Thalassobacillus。其中芽孢杆菌(Bacillus)无论在数量上还是种类上都最多,分别属于34种,其中有8个可能的新种。此外,g-Proteobacteria是分离率较高的另一亚群;其中,假单胞菌(Pseudomonas),海杆菌(Marinobacter),食烷菌(Alcanivorax)属的细菌最多。统计还发现,在深度750~2000 m之间,低GC含量的细菌最丰富,而深度2000 m以下,分离株则全部为g-Proteobacteria。【结论】南沙沉积物可培养微生物中产芽孢细菌及 g-Proteobacteria比较丰富;其中,产芽孢细菌的多样性最高,具有进一步研究开发价值。 相似文献
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汉滩病毒西安分离株84FLi的L片段核苷酸序列测定以及分析 总被引:1,自引:0,他引:1
采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),分节段扩增汉滩病毒 84FLi株的L基因片段cDNA,纯化的PCR产物片段直接用于序列测定或克隆入pND18-T载体中 进行测序.结果表明,84FLi株的L片段cDNA由6533个核苷酸组成,四种核苷酸的比例分别为A33.39%,C16.43%,G20. 74%,T29.44%.GC含量为37.17%,AT含量为62.83%.推导出的最大开放读码框架为从38到649 3 ,共编码2151个氨基酸.序列同源性分析表明,84FLi株核苷酸与HTN型国际标准毒株76-11 8的同源性为83.7%,差异性为18.8%;而与中国株A9的同源性高达97.6%,差异性仅为2.4%. 与SEO型代表Seoul80-39的同源性为75.2%,66.1%~66.5%.L片段的氨基酸比较分析表明, L 片段与HTN型间的同源性为97.5%~98.0%,而与SEO型的同源性为83.5%~85.5%.与PUC、TUL 、SN和AND等其它型汉滩病毒的同源性仅为68.6%~69.6%.结果表明84FLi株属于HTN型,并与分离自国内的HTN型病毒高度同源. 相似文献
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本文为建立分型检测方法,探讨了汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)核蛋白羧基端多肽的抗原性。首先,分别构建编码HTNV核蛋白及其羧基端多肽的原核表达载体pRSETA—S、pRSETA—S—C;然后,将其转化入表达菌BL21(DE3)pLySs诱导表达,采用SDS—PAGE、Westem—blot进行鉴定。我们成功构建了pRSET A—S及pRSETA—S—C原核表达载体。SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达,呈不溶状态,Westem—blot显现目的蛋白具有良好的抗原性。为大量制备分型用核蛋白多肽抗原创造了条件。 相似文献
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本文为建立分型检测方法,探讨了汉滩病毒(Hantaan virus, HTNV)核蛋白羧基端多肽的抗原性.首先,分别构建编码HTNV核蛋白及其羧基端多肽的原核表达载体pRSET A-S、pRSET A-S-C;然后,将其转化入表达菌BL21(DE3)pLySs诱导表达,采用SDS-PAGE、Western-blot进行鉴定.我们成功构建了pRSET A-S及pRSET A-S-C原核表达载体.SDS-PAGE显示目的蛋白大量表达,呈不溶状态,Western-blot显现目的蛋白具有良好的抗原性.为大量制备分型用核蛋白多肽抗原创造了条件. 相似文献
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用体外培养的昆明小鼠胚胎脑皮质神经元,感染汉滩病毒后,检测原癌基因FOS的表达,加入HFRS病人恢复期血清,观察其对神经元的保护作用.将病毒感染的神经元经免疫组化染色,检测原癌基因FOS的快速表达;在病毒感染的神经元内加入HFRS病人恢复期血清,使用MTT比色试验检测神经元存活情况.病毒感染的神经元FOS表达明显增高,与对照组相比有显著性差异(P<0.001);HFRS病人恢复期血清保护病毒感染的神经元组与感染对照组神经元活性明显不同,有显著性差异(P<0.001).HTNV感染体外培养的神经元,会使细胞内产生FOS的快速表达,HFRS病人恢复期血清对病毒感染的神经元有一定的保护作用. 相似文献
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The coding region of S genome segment of Hantaan virus (76/118 strain) was inserted into the eukarytic expression plasmidpVR1012. The recombinant expression plasmid pVRS22 was constructed. Vero-E6 cells were transiently transfected in vitro with pVRS22 plasmid. The transient expression of Hantaan virus nucleocapsid proteins in Vero-E6 cells was detected by indirect immunofluorescence assay (IFA) with monoclonal antibody 5H5 against Hantaan virus. 相似文献
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红树林沉积物中天然多聚有机物厌氧降解菌多样性与细菌新类群分离 总被引:4,自引:1,他引:3
[目的]红树林沉积物中有机物丰富,通过研究认识参与难降解天然有机多聚物的微生物降解过程及其环境作用,并获得新颖的难培养厌氧微生物。[方法]对漳州九龙江河口红树林沉积物中降解纤维素、几丁质和木质素的厌氧细菌定向富集和平板分离纯化,并对其多样性进行分析。[结果]共筛选分离获得202株厌氧细菌(82株专性厌氧细菌,120株兼性厌氧细菌),包括4个疑似新属(Lachnotalea sp.MCCC 1A16036、Varunaivibrio sp.MCCC 1A15903、Clostridium sp.MCCC 1A15884、Caminicella sp.MCCC 1A17445)和4个疑似新种(Sunxiuqinia sp.MCCC 1A15904、Pseudodesulfovibrio sp.MCCC 1A16040、Pseudodesulfovibrio sp.MCCC 1A16038、Mangrovibacterium lignilyticum MCCC1A15882)。不同天然有机多聚物富集菌群分离到的优势可培养细菌主要属于变形菌门、拟杆菌门和厚壁菌门,但种群略有差异。在纤维素和几丁质富集菌群中,变形菌门和拟杆菌门菌株是纤维素和几丁质富集菌群的优势菌群,拟杆菌门的Prolixiacer bellariivorans、Mangrovibacterium lignilyticum和变形菌门的Desulfovibrio salexigenes、Vibrio alginolyticus分别在纤维素和几丁质富集菌群可培养细菌中占绝对优势。但降解实验表明,放线菌门细菌Demequina salsinemoris MCCC 1A15890和Brevibacterium celere MCCC 1A17451对纤维素降解活性最高。梭杆菌门细菌Propionigenium maris MCCC 1A15874和Ilyobacter polytropus MCCC 1A15889对几丁质降解活性最高。在木质素富集菌群中,拟杆菌门的Mangrovibacterium lignilyticum和厚壁菌门的Clostridium amygdalinum都具有较高的相对丰度。变形菌门细菌Desulfomicrobium apsheronum MCCC 1A15932和拟杆菌门细菌Mangrovibacterium lignilyticum MCCC 1A15882对木质素降解效果显著。[结论]红树林沉积物中存在丰富多样且新颖的厌氧难培养细菌,且多数具有纤维素、几丁质或木质素厌氧降解能力。该研究结果为探究红树林沉积物原位环境天然有机多聚物碳的生物地球化学循环机制提供了相关理论基础和纯培养微生物资源。 相似文献
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利用PCR方法扩增了汉滩病毒76-118株囊膜糖蛋白G1和G2的编码区基因,并将PCR产物克隆到T-载体中,用限制性内切酶将G1和G2的编码区基因切下,并克隆到表达载体pBV220中构建G1和G2的表达质粒。诱导表达后在SDS-PAGE凝胶中未见表达产物带,表达的G1和G2能与部分抗G1和G2的单克隆抗体发生反应,但用Western-blot方法不能检测到表达产物。用表达的G1和G2免疫小白鼠能刺激小白鼠产生特异性抗汉摊病毒的抗体,间接免疫荧光抗体的滴度可分别达到1:160和1:320。 相似文献