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1.
构建协同激活分子CBP(CREB(cAMP response element binding)binding protein)的诱饵表达质粒pGBKT7-CBP并检测其蛋白表达、毒性和自激活作用.PCR扩增小鼠CBP的基因编码序列(CDS(coding sequence)序列)并克隆入诱饵表达载体pGBKT7中,通过酶切和测序鉴定后,把构建好的诱饵表达质粒pGBKT7-CBP转化到酵母AH109细胞中,Western blot检测诱饵蛋白表达情况,同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用.结果成功扩增了小鼠CBP基因的CDS序列,并成功克隆到酵母诱饵表达载体pGBKT7中,测序结果正确.诱饵表达质粒成功转化到酵母AH109细胞中,Western blot分析结果证实酵母细胞高表达诱饵蛋白CBP,但诱饵蛋白有自激活作用.提示pGBKT7-CBP不能用于酵母双杂交或三杂交系统检测CBP与其他蛋白质或小分子的相互作用,对其他研究CBP生物学功能试验的方法选取具有一定的借鉴意义.  相似文献   
2.
探究布地奈德(budesonide,BUD)对人气道上皮9HTEo-细胞增殖的影响及机制,利用CCK-8法检测BUD对9HTEo-细胞增殖的影响,荧光显微镜观察经BUD处理后9HTEo-细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞周期分布变化,Western blot检测p27kip1蛋白表达.CCK-8法结果显示3~10 μmol/L BUD对细胞具有显著的抑制作用(P<0.01);荧光显微镜下,1~10 μmol/L BUD处理后细胞可见明显的增殖受抑、凋亡形态;流式细胞术检测G0/G1期细胞随着BUD浓度的增加而增多,S期细胞逐渐减少;Western blot检测结果提示BUD能使p27kip1表达增加.由此可见,BUD对人气道上皮细胞株9HTEo-具有显著增殖抑制作用,其作用与提高p27kip1蛋白的表达,将细胞阻滞在G0/G1期有关.  相似文献   
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