黄连ISSR反应条件优化的研究

以黄连(味连,Coptis Chinensis Franch.)基因组DNA为模板,通过单因子、双因子实验研究了ISSR反应体系中主要成分（Mg²⁺、dNTP、引物、模板、Taq DNA聚合酶）以及热循环参数（退火温度、循环数、变性时间、退火时间、延伸时间）对扩增结果的影响,并找出各自的最适条件,建立了适合黄连ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在25μL反应体系中,内含1×PCR buffer、1.5mmol·L^-1 Mg²⁺、200μmol·L^-1 dNTP、0.3 μmol·L^-1引物、40 ng模板、1 U TaqDNA聚合酶。扩增程序为94℃预变性5 min,然后进行35个循环：94℃变性30 s,（据不同引物的退火温度）复性1 min,72℃延伸1.5 min,循环结束后72℃延伸7 min,-4℃保存。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术进行黄连鉴定及种质遗传多样性分析提供了一个标准化程序。     

日本三角涡虫Caspase-7基因的克隆及功能研究

本文以日本三角涡虫Dugesia japonica为研究对象,通过c DNA末端快速扩增技术首次克隆得到了涡虫Caspase-7基因,全长935 bp,编码251个氨基酸,5'-UTR和3'-UTR长度分别为86 bp和93 bp。涡虫Caspase-7具有Caspase家族保守而关键的LSHG与QAC(Q/R) G两大结构域。此外,基于SWISS-MODEL同源建模对涡虫Caspase-7蛋白三维结构的预测和分析,发现其包含2个催化单位,且潜在催化位点由4个表面环构成。进化分析也显示,涡虫Caspase-7基因未与扁形动物门Platyhelminthes物种聚为一支,而与刺胞动物门Cnidaria水螅Hydra vulgaris有较近的亲缘关系,说明Caspase-7基因可能发生了趋同进化。本文通过实时荧光定量PCR检测了Caspase-7基因在涡虫再生不同时间段的表达变化,发现在涡虫切后再生6 h和3 d,Caspase-7基因表达量升高,这2个时间点是涡虫切后凋亡发生的2个高峰期。此外,通过喂食ds RNA干扰涡虫体内Caspase-7基因的表达,结果发现,干扰Caspase-7基因并不影响涡虫的再生,但再生完成后或未切割的成体涡虫在饥饿环境下,受Caspase-7基因干扰,虫体逐渐溶解直至死亡,而Djclg-3及PCNA基因的表达量也显著降低,说明干扰Caspase-7基因表达可能引起涡虫细胞凋亡与增殖减少,涡虫组织重塑失衡,导致虫体溶解并死亡。该结果揭示Caspase-7基因可能在涡虫组织重塑中起关键作用。     

环境条件对南方大斑蝥成虫取食行为的影响

南方大斑蝥的主要药效成分斑蝥素及其衍生物对肝癌、食道癌等20余种癌症有显著疗效,但斑蝥素不能大规模人工合成,仅依赖于产斑蝥素的昆虫。南方大斑蝥是斑蝥素的重要来源,其野生资源已不能满足市场需求,人工养殖是解决南方大斑蝥资源紧缺的必然选择,而取食是人工养殖中影响其生长繁殖的重要因子之一。本研究在恒温培养箱内对南方大斑蝥成虫的最大取食量、觅食规律、光照、最佳觅食的温度和食物含水量等方面进行了研究,明确了南方大斑蝥成虫的取食条件和规律,为南方大斑蝥成虫的人工养殖提供技术参考。结果显示,南方大斑蝥成虫每天连续取食时,日平均取食量为身体重量的0. 797±0. 062倍,而饥饿24 h后的日平均取食量为体重的1. 712±0. 110倍,两者间取食量差异显著(P 0. 05)。根据其取食日变化规律,上午7∶00为南方大斑蝥成虫的取食高峰期,在不需觅食的基础上有无光照对平均取食量无显著的影响(P 0. 05)。当温度为30℃-33℃、食物含水量40%-60%时南方大斑蝥成虫的平均取食量最大,呈显著水平(P 0. 05)。根据研究结果可知,在南方大斑蝥成虫的人工养殖中,应于每天的上午7∶00前投放食物,食物量为成虫重量的0. 8倍左右,食物含水量控制在40%-60%,环境温度30℃-33℃。     

miR-223在结肠癌组织中的表达及促进结肠癌细胞迁移侵袭的机制研究

目的:探讨微小RNA-223 (mi R-223)在结肠癌组织中的表达及对结肠癌HT-29细胞侵袭、迁移能力的影响及机制。方法:检测mi R-223在结肠癌组织与癌旁组织中的表达。通过脂质体转染法将mi R-223模拟物(mi R-223 mimics,mi R-223 mimics组)及microRNA无关序列(mi R-223 NC,NC组)转染入结肠癌HT-29细胞。采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R-223和TWIST的表达,Western blot检测TWIST的蛋白表达,Tranwell检测细胞的迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告基因检测mi R-223对TWIST基因启动子活性的影响。采用Transwell迁移与侵袭实验检测mi R-223 mimic及Twist si RNA共转染后人结肠癌细胞系HT-29迁移与侵袭能力的变化。结果:与癌旁结肠组织比较,mi R-223在结肠癌组织中呈现明显高表达(P0.05);与空白对照组和mi R-223 NC组比较,转染mi R-223 mimics后的HT-29细胞中的mi R-223表达显著增加(P0.05)。与阴性对照组和空载转染组相比较,mi R-223 mimics转染组穿透的细胞数目明显增加(P0.05),且mi R-223 mimics转染组的细胞侵袭能力显著增强(P0.05)。与mi R-223 NC组和空白对照组比较,转染mi R-223 mimics的HT-29细胞的TWIST基因m RNA和蛋白表达均显著增加(P0.05)。双荧光素酶检验结果显示TWIST为mi R-223的下游靶基因。共转染TWIST si RNA和mi R-223 mimics的结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭能力较单独转染mi R-223 mimics的HT-29细胞显著减弱(P0.05)。结论:mi R-223可能通过上调下游靶基因TWIST水平促进结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭。     

施肥水平对金钱草产量和质量的影响

本文在大田实验中采用随机区组方式,探讨了不同氮肥、磷肥、钾肥和有机肥的施肥水平对金钱草产量和质量的影响。研究结果显示,在施用磷肥和钾肥一致的基础上,施用氮肥为60 g/6 m~2时金钱草产量达6.67±0.31 kg,与对照(4.09±0.43 kg)呈显著水平。在施用氮肥和磷肥一致的基础上,施用钾肥为30 g/6 m~2时金钱草的产量(9.28±0.42 kg)与对照(7.10±0.50 kg)比较呈显著性差异。随着有机肥施用量的增加,金钱草的产量有减产趋势,在1.8 kg/6 m~2时与对照比较呈显著差异;磷肥对金钱草产量无显著影响。施用氮肥、磷肥、钾肥和有机肥均对金钱草山奈酚和槲皮素含量无显著影响。     

降解吡啶复合菌系MD1的筛选、降解特性及代谢途径

【目的】为筛选吡啶高效降解复合菌系，促进高浓度吡啶废水的降解。本研究围绕吡啶降解复合菌系的筛选、降解特性及代谢途径，旨在获得吡啶高效降解复合菌系，为高浓度吡啶废水微生物降解及完全矿化提供理论依据和技术支撑。【方法】以吡啶为唯一碳氮源从某农药废水处理系统好氧活性污泥中筛选得到一个吡啶高效降解复合菌系MD1。采用16S rRNA高通量测序技术探究了MD1的群落结构及多样性，通过单因素实验考察了MD1的降解特性，利用气相色谱-质谱联用仪对MD1降解吡啶的代谢产物进行了初步检测与鉴定，推测吡啶可能的降解途径。【结果】结果显示，在温度30 ℃、pH 8.0、NaCl浓度0.1%的最佳条件下培养72 h，MD1对初始浓度1 400 mg/L的吡啶降解率为98.44%±0.27%。在属水平上，MD1主要由副球菌属(Paracoccus sp.)、布鲁氏菌属(unclassified_Brucellaceae)、无色杆菌属(Achromobacter sp.)等组成。由代谢产物检测结果初步推测MD1对吡啶的代谢途径为吡啶→烟酸→6-羟基烟酸→2,5-二羟基吡啶→N-甲酰基马来酰胺酸→马来酰胺酸→马来酸→CO₂+H₂O。【结论】研究筛选得到一个可高效降解吡啶、降解性能稳定的复合菌系MD1。解析了MD1的微生物组成多样性和群落结构，推测了MD1可能的代谢途径，研究结果丰富了吡啶降解微生物资源。     

家猪长链非编码RNA的组织特异性表达及其对肉质的影响

长链非编码RNA(lncRNA)是一类无法编码蛋白且长度大于200 nt的RNA,lncRNA可参与生物体内多种调控与代谢过程，且在多种生物体内呈现出组织特异性的表达模式。然而，lncRNA在家猪Sus scrofa domestica体内的组织特异性表达模式和功能机制尚不明确。肌肉内脂肪（IMF）是影响猪肉品质的重要因素之一，IMF的沉积受多种机制的调控，而lncRNA对IMF的影响还有待深入研究。本研究利用GEO数据库中家猪RNA-seq数据，通过生物信息学方法共筛选23 678个lncRNA，包括14 309个新鉴定的lncRNA，其中1 218个被鉴定为组织特异性lncRNA(TS lncRNA)。与mRNA相比，lncRNA具有长度较短、表达量更低和外显子数量更少等特点。通过顺式作用与反式作用分别预测了TS lncRNA的潜在作用位点，并通过GO和KEGG分析进行功能注释，发现TS lncRNA的功能总体上与其所属组织或器官的功能相关。此外，发现了潜在影响家猪IMF含量的lncRNA MSTRG. 7256.5，并对其进行了RNA干扰与过表达实验，结果表明MSTRG. 725...