胃癌乙酰肝素酶和NF-κB表达及与临床病理特征和血管形成的关系

目的探讨胃癌乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和激活的NF-κB表达及与胃癌临床病理特征和血管形成的关系。方法免疫组织化学(IHC)分别检测了138例胃癌、138例配对癌旁胃粘膜(距癌2cm)和138例配对远离胃癌的手术切缘正常胃粘膜组织(距癌5cm以上)HPA蛋白的表达;138例胃癌组织NF-κB、血管内皮生长因子(VEGF)和CD34蛋白的表达,CD34抗体进行血管内皮染色,用于计数胃癌组织微血管密度(MVD);人胃癌细胞系SGC-7901和MGC803中HPA蛋白的表达。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了40例胃癌、40例癌旁胃粘膜(距癌2cm)和40例远离胃癌的手术切缘正常胃粘膜组织(距癌5cm以上)以及人胃癌细胞系SGC-7901和MGC803 HPA mRNA的表达结果胃癌HPA蛋白和mRNA阳性表达率(71.0%,72.5%)明显高于癌旁胃粘膜(32.6%,35.0%)和正常胃粘膜(10.0%,8.8%)(P均<0.01),癌旁胃粘膜明显高于正常胃粘膜(P<0.01)。HPA蛋白和mRNA在人胃癌细胞系SGC-7901均为阳性,而在人胃癌细胞系MGC803均为阴性。胃癌HPA和激活的NF-κB蛋白阳性表达率,侵袭至浆膜外、有脉管内瘤栓、有淋巴结转移、有远端转移和临床分期Ⅲ-Ⅳ期者明显高于侵袭至浆膜、无脉管内瘤栓、无淋巴结转移、无远端转移和临床分期I-Ⅱ者(P均<0.05)。胃癌HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达成正相关(rs=0.223,P=0.009)HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达阳性胃癌的MVD明显高于HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达阴性胃癌的MVD(P均<0.01)。胃癌HPA蛋白表达和激活的NF-κB蛋白表达均与VEGF蛋白表达成正相关(rs=0.275,P=0.001;rs=0.527,P=0.000)。结论HPA和激活的NF-κB蛋白表达在胃癌的发展及血管形成中起重要作用;胃癌HPA蛋白表达与激活的NF-κB蛋白表达有关。     

食管癌前细胞DNA、端粒酶含量及多基因表达产物的定量检测

为探讨食管癌高发区人群食管上皮癌变过程中的早期分子改变及早期癌变机理.应用流式细胞术和免疫荧光技术及碘化丙啶DNA荧光染色方法,对食管上皮癌前细胞的DNA含量、端粒酶含量和多个基因p53、p16、cyclin D1蛋白质表达进行了定量检测.检测结果发现,DNA含量在癌变形成时明显增加,异倍体率为87.9%;p53蛋白积聚发生在癌变早期,在癌细胞组的阳性率为100%（5/5）;抑癌基因p16在癌变早期有明显缺失;癌基因cyclin D1及端粒酶阳性率在癌细胞组都为100%（分别为6/6,7/7）.研究结果表明：在癌变早期,DNA含量及异倍体率增加,癌基因cyclin D1表达增高,抑癌基因p16缺失及p53蛋白积聚,端粒酶含量也明显增高,在癌形成时已有多个分子事件发生.     

细胞凋亡调控因子基因在食管上皮癌变过程中的表达及其意义

目的研究细胞凋亡调控因子Fas、Fasl、Fadd和Caspase 8基因在食管上皮癌变过程中的表达及其意义。方法应用免疫组化S-P法检测食管黏膜中Fas、Fasl、Fadd和Caspase 8的蛋白表达。应用碘化丙啶染色和间接免疫荧光标记方法,采用流式细胞仪对食管黏膜组织进行定量检测。结果从食管正常黏膜组织到不典型增生组织和食管癌组织,Fas、Fadd和Caspase 8蛋白表达率呈逐渐下降的趋势,Fasl蛋白表达率呈逐渐上升的趋势,在食管癌和正常组织之间差异有统计学意义,x^2分别为5．659,7．73,6．32,5．65,P〈0．05或P〈0．01。Fas、Fasl和Caspase 8蛋白高中分化鳞癌中蛋白阳性表达率显著高于低分化鳞癌,两者差异有统计学意义,x^2分别为4．88,7．79,4．68,P〈0．05。与正常黏膜组织和不典型增生组织相比,癌组织中DNA含量明显增高,异倍体细胞显著增加;Fas、Fadd和Caspase 8蛋白表达水平明显降低,t值分别为8．131,7．39,5．44,Fasl基因蛋白表达水平升高,t值为6．671。结论Fas与Fasl的表达失衡与食管癌的发生、发展有密切关系,并与食管癌的分化和免疫逃避有关。Fadd与Caspase8基因表达异常在食管癌的发生发展中可能起着重要作用。食管上皮癌变过程中,DNA含量及异倍体率增加。     

流式细胞术检测胃癌前病变DNA及p21，p53含量

应用流式细胞术和免疫荧光技术,对80例胃癌前病变细胞中DNA含量,rasp21和p53蛋白进行定量检测,探讨其在胃癌前病变中,作为癌变早期标志物的临床意义.检测结果发现,胃癌前病变的DNA异倍体率随不典型增生病变的分级增高而增加, rasp21和p53蛋白的表达量亦随胃癌前病变不典型增生程度的加重而增高.DNA异倍体和rasp21表达阳性的胃癌前病变出现的癌变率显著增高,提示可能是癌变早期的分子标志物.     

胃癌和非癌病变ras P21表达的定量研究

应用流式细胞术对胃癌和胃粘膜的非癌病变组织细胞ras癌基因蛋白产物P²¹表达进行了定量研究,并探讨了ras P²¹表达与DNA倍体与增殖指数的关系.结果表明,胃癌P²¹表达量明显高于非癌病变组织的表达量.胃粘膜非癌病变组织中,胃癌前病变组织P²¹表达量明显高于慢性萎缩性胃炎组织的表达量,并发现P²¹蛋白的表达量与胃癌和癌前病变组织学分级、DNA倍体、增殖指数密切相关.     

影响流式细胞术定量分析细胞DNA荧光强度的几个因素

本文对影响流或细胞术定量分析细胞DNA荧光强度的四种因素进行了研究,结果表明,(1)醛类固定剂对细胞DNA荧光有显著影响,乙醇是较好的固定剂。(2)样品之间细胞数相差3倍以上对荧光测定有影响。(3)细胞在乙醇中固定的时间长短对荧光影响不明显,但CV值增大。(4)EB为10—20μg/ml、PI为50μg/ml是最佳荧光染色浓度。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇抑制体外培养人外周血单个核细胞低分子量蛋白酶体-2表达

探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人外周血单个核细胞参与抗原呈递的低分子量蛋白酶体-2(LMP-2)表达的影响。采用流式细胞术(FCM)和半定量RT-PCR方法从蛋白质和mRNA水平分析了不同剂量DON对体外培养人外周血单个核细胞LMP-2分子表达的影响及其量效关系。FCM定量检测结果表明,不同浓度DON处理均可一定程度抑制人外周血单个核细胞LMP-2的表达,50ng/mlDON组、100ng/mlDON组、1000ng/mlDON组和2000ng/mlDON组LMP-2平均荧光强度分别为6.99±0.72、6.21±0.55、5.34±0.56和5.03±0.43,在50～2000ng/mL范围内随着DON浓度增加,外周血单个核细胞LMP-2表达降低,与DON浓度呈显著负相关(r=0.824,P<0.01)。半定量RT-PCR结果显示,不同浓度DON处理均可抑制人外周血单个核细胞LMP-2mRNA表达。DON在蛋白质和mRNA水平可剂量依赖地抑制体外培养的人外周血单个核细胞LMP-2的表达。     

应用流式细胞仪检测网织红细胞

网织红细胞内含有比成熟红细胞更多的RNA。它可与荧光染料派若宁γ特异性结合发出荧光。应用流式细胞仪进行荧光强度的测定,可得出网织红细胞在人体末梢血中占红细胞的百分率。本实验与常规的煌焦油蓝法比较、重复性好,变异程度小,且与常规法呈高度相关。     

伏马菌素B1对人外周血单个核细胞抗原加工相关转运子表达的影响

探讨伏马菌素B1(FB1)对体外培养的人外周血单个核细胞(hPBMC)抗原加工相关转运子(TAP-1)表达的影响。采用流式细胞定量检测(FCM)、免疫印迹(Western印迹)及半定量RT-PCR方法,研究不同浓度FB1(0,10和50μmol/L)处理后人外周血单个核细胞TAP-1在mRNA和蛋白质水平表达的影响。RT-PCR检测结果表明,10和50μmol/L FB1处理24h后,处理组细胞TAP-1mRNA明显低于对照组。在蛋白质水平,FCM定量分析表明,两个处理组细胞表面TAP1的平均荧光强度均较对照组降低,以50μmol/LFB1处理组降低显著(P<0.05)。免疫印迹结果亦表明,FB1处理组TAP-1的表达均较对照组降低。10和50μmol/LFB1可抑制体外培养的hPBMCTAP-1mRNA和蛋白质表达。     

细菌防护液对照射小鼠脾脏细胞生物学效应的影响

目的:探讨细菌防护液(BPL)与受照小鼠脾脏细胞生物学效应的关系。方法:应用流式细胞仪((FCM)检测细胞的凋亡指数和免疫参数(CD 4、CD 8、NK)。结果:BPL能够降低细胞凋亡率(P<0.01),同时能够提高细胞的增殖率(P<0.05)。其作用机制可能与提高NK细胞活性和CD 4、CD 8数量有关。结论:本研究进一步证实,BPL对辐射损伤细胞有一定的保护作用,为临床应用提供科学数据。