一次PCR扩增单纯疱疹和巨细胞病毒基因的检测方法

宫内感染是影响优生优育质量的一个重要因素,由病毒引起的宫内感染主要有以下四类病原：ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＴＯＸＯ和风疹病毒（ＲＶ）,其中ＨＳＶ和ＣＭＶ的感染率较高。孕期这两种病原的感染会影响胎儿的正常发育,严重的可导致流产甚至胎儿畸形。目前已有针对这两种病...     

血清CD163、AFU、miR202在原发性肝癌诊断中的作用及在介入治疗前后的变化

摘要 目的：探讨血清CD163、α-L-岩藻糖苷酶（AFU）、微小核糖核酸202（miR202）在原发性肝癌诊断中的作用及在介入治疗前后的变化。方法：选择本院2018年5月~2020年6月收治的106例原发性肝癌患者，均予以肝动脉化疗栓塞术（TACE）治疗，同期选择本院收治的94例肝硬化患者纳入疾病对照组，门诊健康体检者113例纳入健康对照组。对比三组血清CD163、AFU、miR202，原发性肝癌患者治疗前后CD163、AFU、miR202。结果：原发性肝癌组血清CD163、AFU高于疾病对照组及健康对照组，差异有统计学意义（P<0.05），miR202低于对照组及健康对照组（P<0.05）；疾病对照组血清CD163、AFU高于健康对照组（P<0.05），miR202低于健康对照组（P<0.05）。原发性肝癌患者治疗后血清CD163、AFU低于治疗前，差异有统计学意义（P<0.05）；miR202高于治疗前，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前及治疗后，好转组血清CD163、AFU水平均低于无效组，差异有统计学意义（P<0.05），miR202高于无效组，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后，好转组血清CD163、AFU水平低于治疗前（P<0.05），miR202高于治疗前（P<0.05），无效组治疗前后血清CD163、AFU、miR202差异无统计学意义（P>0.05）。结论：血清CD163、AFU、miR202能够辅助原发性肝癌的诊断，又可为TACE的疗效评价提供参考依据。     

神农架地区川金丝猴栖息地四种树生地衣的氮敏感性

为了解氮沉降对神农架地区川金丝猴栖息地地衣多样性的潜在影响,本文以最大光合效率Fv/Fm、地衣细胞膜完整性(RE)和叶绿素OD435/OD415为指标,以神农架地区生物量较大、可能被川金丝猴取食的4种树生地衣(长松萝Usnea longissima、桦树松萝Usnea betulina、杯树花日本变种Ramalina calicaris var.japonica和裸缘衣Parmotrema hypoleucinum)为对象,以去离子水和不同浓度的KNO3、NH4NO3和(NH4)2SO4的溶液浸泡处理,采用MiniPAM荧光仪在氮处理前和处理后的0、24、48和72 h分别测定地衣的Fv/Fm值,在72 h后测定地衣浸出液电导率RE和叶绿素OD435/OD415值,研究4种地衣的氮敏感性。结果表明,4种地衣对72 h的高氮处理均表现出敏感性,但敏感的氮素类型和指示指标存在种间差异。其中,(1)以Fv/Fm为指标,长松萝和桦树松萝对KNO3最敏感,杯树花日本变种和裸缘衣则对(NH4)2SO4较为敏感;(2)以RE为指标时,长松萝和桦树松萝对(NH4)2SO4最敏感,而杯树花日本变种在KNO3、NH4NO3和(NH4)2SO4间无差异,裸缘衣则对(NH4)2SO4较为敏感;(3)以OD435/OD415为指标时,长松萝和裸缘衣对(NH4)2SO4较为敏感,桦树松萝对KNO3和(NH4)2SO4均敏感,杯树花日本变种则对KNO3、NH4NO3和(NH4)2SO4均敏感。上述研究结果不仅证明川金丝猴栖息地树生地衣面临氮沉降的现实威胁,还说明其氮敏感性具有种特异性和及其作用机制的复杂性。因此,进一步开展川金丝猴栖息地氮沉降特征及其对川金丝猴主食地衣影响的研究,对川金丝猴保育具有重要的意义。     

碱基编辑系统研究最新进展及应用

CRISPR系统能够在基因组DNA中完成精准编辑,但依赖于细胞内的同源重组(Homologydirected recombination,HDR)修复途径,且效率极低。基于CRISPR/Cas9系统开发的碱基编辑技术(Base editing)通过将失去切割活性的核酸酶与不同碱基脱氨基酶融合,构建了两套碱基编辑系统(Baseeditors,BE):胞嘧啶碱基编辑器(Cytosine base editor,CBE)和腺嘌呤碱基编辑器(Adenine base editor,ABE)。这两类编辑器分别能够在不产生DNA双链断裂的前提下在基因靶位点完成CT (GA)或AG (TC)的替换,最终实现精准的碱基编辑。目前碱基编辑技术已经广泛应用于基因治疗、动物模型构建、精准动物育种和基因功能分析等领域,为基础和应用研究提供了强大的技术工具。文中概括了碱基编辑技术的研发过程、技术优势、应用现状、存在问题及改进策略,以期为相关领域的科研人员了解和使用碱基编辑系统提供参考。     

一种白细胞介素2基因变构体的高效表达与纯化工艺

利用定点诱变技术构建表达质粒pET15b-MhIL-2并将其在大肠杆菌中进行表达发酵的优化研究,高效表达出可溶性的MhIL-2重组蛋白。蛋白经过亲和层析、Thrombin酶切、离子交换层析和凝胶过滤层析纯化,MhIL-2纯度达95%,且MhIL-2比hIL-2具有更强的促进T细胞增殖生物活性。     

羊BLG基因5′和3′调控区克隆及其调控GFP基因在乳腺细胞的表达

乳球蛋白 (ＢＬＧ)是反刍家畜的一种主要乳清蛋白质。将外源基因置于ＢＬＧ 5′调控区下游 ,能够控制外源基因在动物乳腺的组织特异性表达。现已清楚在ＢＬＧ 5′端有多个乳核因子 1(ＮＦ1)和转录因子Ｓｔａｔ5的识别位点 ,此外还存在多个激素作用位点[1 ] 。具有这些调控成分的ＢＬＧ 5′翼端 (5′ｆｌａｎｋｉｎｇ)能够控制外源基因在乳腺的表达 ,但受整合位点、外源基因结构以及转基因拷贝数及其排列方式的影响[2 ] 。研究结果表明 ,仅含有 5′调控区的乳腺表达构件 ,还不能使外源基因的表达达到内源性ＢＬＧ的表达水平 ,因为在 5′远端(…     

生物素标记寡核苷酸探针检测B群轮状病毒

用５′端接氨基标记法,用生物素对Ｂ群轮状病毒（ＧＢＲＶ）ＩＤＩＲ株具有群特异性的３片段基因上２３ｂｐ寡核苷酸序列进行标记,经高效薄层层析板（ＨＰＴＬＣ）纯化,制备了Ｂ群轮状病毒生物素寡核苷酸探针,探针显色灵敏度达１０Ｐｇ,与ＧＢＲＶ、ＫＢ６３株基因杂交可检测到１００ｐｇ靶序列,而与Ａ群和Ｃ群轮状病毒及无关基因均不产生杂交信号,该探针可用于Ｂ群轮状病毒的检测、鉴定,以及同群不同毒株间基因相关性研究。     

绵羊Follistatin基因表达及其结构域的功能分析

为研究羊Follistatin基因的功能,提取了绵羊卵巢总RNA,通过RT-PCR方法获得羊Follistatin cDNA的完整开放阅读框 (1 038 bp)。去除信号肽序列后与原核表达载体pET41a连接,构建重组表达质粒pFSsig?,经大肠杆菌诱导表达获得FS sig?蛋白 (66 kDa)。通过RT-PCR克隆了包含N端和结构域1的Follistatin突变体 (FS N+D1),将FS N+D1片段插入慢病毒载体 (pLEX-MCS) 构建了pFS-N+D1慢病毒重组表达质粒。在293T细胞中进行慢病毒的包装,再感染绵羊肌肉原代细胞,得到稳定表达FS N+D1的肌肉细胞系,通过细胞生长曲线结果显示稳定表达FS N+D1的肌肉细胞明显比正常肌肉细胞增殖快,且差异极显著 (P＜0.01),表明绵羊FS N+D1结构域有促进肌肉细胞生长的功能。