Fe-Co杂化血红蛋白E11-Val甲基质子~1H NMR谱峰归属及蛋白溶液构象的研究

在500MHz~1H NMR仪上对HbA,CoHb和对称与不对称的Fe-Co杂化血红蛋白在去氧和一氧化碳配位时环形电流效应对蛋白Ell-Val甲基共振峰的影响进行了研究,将-1.0ppm峰归属于β(Co)的二个甲基质子,-1.55ppm和-2.35ppm的峰归属于α(Co)γ_1CH_3和γ_2CH_3,-1.15ppm与-2.05ppm的峰归属为α(Fe-Co)的γ_1CH_3与α_2CH_3共振峰,-1.52ppm与-2.15ppm的峰指定为β(Fe-Co)的γ_1CH_3与γ_2CH_3.根据归属对蛋白在去氧和一氧化碳配位时其溶液构象变化进行了研究,发现CO配位于β(Fe)比配位于α(Fe)使E11-Val甲基质子化学位移发生更大改变.     

胰蛋白酶的制备及其在细胞培养中的应用研究

无菌采集健康牛胰脏,用0.125 mol/L的硫酸对牛胰脏进行预处理和保存,并对原材料的细菌、真菌、内毒素、支原体、噬菌体和一些病毒外源因子进行检测,筛选合格原料.通过盐析、CM-Sepharose-FF层析、超滤等方法对胰蛋白酶进行提取和纯化.结果表明:经筛选原料提纯的胰蛋白酶通过细胞传代实验240 h后,细胞生长良好,形态正常,而未经筛选直接提取的胰蛋白酶通过细胞传代实验144 h后,细胞出现拉丝、病变等异常情况.     

Fe-Co杂化血红蛋白E11-Val甲基质子~1H NMR谱峰归属及蛋白溶液构象的研究

在500MHz~1H NMR仪上对HbA,CoHb和对称与不对称的Fe-Co杂化血红蛋白在去氧和一氧化碳配位时环形电流效应对蛋白Ell-Val甲基共振峰的影响进行了研究,将-1.0ppm峰归属于β(Co)的二个甲基质子,-1.55ppm和-2.35ppm的峰归属于α(Co)γ_1CH_3和γ_2CH_3,-1.15ppm与-2.05ppm的峰归属为α(Fe-Co)的γ_1CH_3与α_2CH_3共振峰,-1.52ppm与-2.15ppm的峰指定为β(Fe-Co)的γ_1CH_3与γ_2CH_3.根据归属对蛋白在去氧和一氧化碳配位时其溶液构象变化进行了研究,发现CO配位于β(Fe)比配位于α(Fe)使E11-Val甲基质子化学位移发生更大改变.     

动物肠道菌群结构分析方法进展

动物肠道菌群形成一个庞大而复杂的微生态平衡系统,在维持胃肠道健康方面起着重要作用,具有营养、屏障和免疫等功能,其科研价值极大。本文就分析动物肠道菌群结构所采用的传统纯培养法、ERIC-PCR分子杂交技术、16SrDNA分子测序技术、荧光原位杂交技术及宏基因组学技术进展进行综述。为进一步对动物肠道微生物研究选择有效合理的分析方法,研究各种动物肠道菌群的组成分布、结构功能、影响因素及其与疾病的关系等提供可行性理论指导。     

微载体结合长效胰岛素在Ⅱ型糖尿病大鼠模型中的应用研究

目的:探讨微载体结合长效胰岛素在Ⅱ型糖尿病大鼠模型中的应用。方法:以Ⅱ型糖尿病大鼠模型为研究对象,变性胶原微载体结合长效胰岛素(最终达到10u/ml),腹腔注射结合后微载体,测查大鼠血糖水平的变化情况。结果:微载体与长效胰岛素结合延长长效胰岛素作用时间4h,并且注射剂量为5u/只时,试验组与对照组比较表现为差异极显著(P0.01)。结论:微载体与长效胰岛素结合对Ⅱ型糖尿病大鼠模型能够起到延缓长效胰岛素释放的功效。     

酶解大豆蛋白的制备工艺研究及其在细胞培养中的应用研究

采用两种非动物源性蛋白酶水解大豆蛋白,以水解度为指标,对不同比例4种酶两两组合测试其水解度,选出水解最佳用酶;在单因素试验基础上,采用正交试验对酶解大豆蛋白的工艺条件进行优化,并将产物进行动物细胞的生长进行检测。结果表明:复合蛋白酶与碱性蛋白酶以等比例进行混合,其水解效果最佳;水解最佳工艺为:温度60℃、p H值7. 0和酶/底物(E/S)=1∶4(质量比),水解时间为4 h,其水解度为43. 7%。将酶解产物培养BHK-21细胞,并与Hypep1510进行对比,细胞生长状态良好,其细胞密度在120 h时最大,为3. 96×10~5cells/mL,与Hypep1510相比,最大细胞密度并无明显差异,其倍增时间为26. 2 h,高于阴性对照组与阳性对照组,且细胞形态基本未发生改变,表明酶解大豆蛋白所的产物能够缩短细胞倍增的时间,且具有一定的促细胞生长作用,为其在动物细胞大规模培养中的应用提供了理论依据。     

羽叶三七根茎的三萜皂甙成分及其化学分类学意义

羽叶三七(Panax japonicus C. A. Meyer var. bipinnalifidus (Scem.) Wu et Feng)又称疙瘩七,产我国西北部至西南部山区,是人参届植物中分布海拔和纬度均较高的一个种类。在陕西省秦岭地区主要产于南北坡海拔2100—2900米的针叶林下阴湿处。民间以其根茎入药,具有清热解毒、顺气健胃、活血祛瘀、滋补强壮之效。作为国产人参属植物皂甙成分系统研究的一个部分,本文报告秦岭产羽叶三七根茎的皂甙成分,并讨论其化学分类学意义。     

β-β交联的Fe(Ⅱ)-Co(Ⅱ)杂化血红蛋白玻尔(Bohr)效应的研究

本文使用500MHz ~1H NMR谱仪研究了β—β交联的β_1 82Lys—β_2 82Lys不对称Fe(Ⅱ)Co(Ⅱ)杂化血红蛋白在去氧状态下其四级结构与溶液 pH的相互关系.实验结果证明,溶液中H~+浓度的减少,有利于血红蛋白从束缚态(T态)向松弛态(R态)方向转化.在可交换质子区(9.0—15.0PPm)由pH的改变所引起的[2(Co)β(Fe)]_A[α(Co)β(Co)]_cXL的~1H NMR谱峰的变化比[α(Fe)β(Co)]_A[α(Co)β(Co)]_cXL的~1H NMR谱峰的变化大.这为研究血红蛋白四个亚基的构象随pH改变而变化的先后次序提供了一定的依据,可以认为,当溶液中H~+浓度减少时,首先使蛋白构象发生改变的应在α—亚基上,而不在β—亚基上.此外,从它们的~1H NMR谱图随pH的变化可推测,溶液中除了 T态和R态之外,还存在着一些中间过渡态.o     

水解乳蛋白的制备及在细胞培养中的初步应用

采用正交法优化复合酶(胰酶和中性蛋白酶)水解凝乳酶干酪素制备水解乳蛋白(lacto-protein hydrolysate,LPH)的制备工艺,通过BHK和Vero细胞的培养效果检测水解乳蛋白的促细胞生长作用。结果显示水解乳蛋白的最佳制备工艺为:胰酶∶中性蛋白酶=2∶1(质量比),40℃,pH 7.0,酶/底物(E/S)=1∶5(质量比)水解6 h。所得产物氨基氮含量3.21 g/L,多肽含量35.63 g/L,游离氨基酸含量14.17 mg/mL,收率达40.20%。BHK和Vero细胞培养24 h,细胞密度均为各自空白的2.0倍,分别为Hyclone产品的1.0倍和0.86倍;培养48h,分别为各自空白的5.0倍和4.0倍,均为Hyclone产品的0.88倍。因此,该工艺简单,耗时短,制备得水解乳蛋白对BHK和Vero细胞生长有明显的促进作用。