琥珀酸弧菌L-天门冬酰胺酶基因的初级克隆和表达

本文以表达型噬菌体λgtll为载体,以及¹²⁵I标记的放射免疫抗体为探针,从EcDR I酶切的琥珀酸弧菌(Vyibrto succinogenes)染色体DNA片段中克隆得到携带天门冬酰胺酶基因的目的片段,在宿主菌E．Coil Y 1090 中得到表达。经酶解和凝胶电泳分析表明该插入DNA片段的分子量为5．8kb．重组DNA感染另一宿主菌E．ColiYl089后所产生的酶蛋白具有L-天门冬酰胺酶活力。用重组DNA(λgt11-AS8)为探针进行southern DNA杂交,琥珀酸弧菌染色体DNA的Ec0R I酶切片段中,出现一条位置在5．8kb处的杂交带,证明我们克隆到的携带L-天门冬酰胺酶基因的目的片段来自琥珀酸弧菌。     

乙烯产生、离区纤维素酶活力与菜豆叶柄脱落的关系

IAA处理菜豆叶柄外植体的远端或近端均显著刺激乙烯产生,但对离区纤维素酶活力和叶柄脱落的影响不同,处理远端时抑制而处理近端时促进纤维素酶的活力和脱落。GA_3处理远端或近端刺激乙烯产生的作用虽没有IAA强,但对离区纤维素酶活力和叶柄脱落却都起促进作用。 1000ppm CoCl_2明显抑制了脱落,而对乙烯产生的抑制作用不很明显;16 ppm AVG已显著抑制了乙烯的产生,但对脱落几乎没有抑制效应,二者对由GA_3所诱导增加的离区纤维素酶活力和脱落均没有明显的抑制作用。     

玉米籽和土壤中伏草隆残留量分析

本文报导伏草隆在玉米籽和土壤中残留量的提取、分离、纯化和半微量分析等方法。此方法要求设备简单、且灵敏度高和专一性强,检测伏草隆的最低剂量为0.3微克,定量可测范围为0.5～40微克。并应用此法对从施用伏草隆除草的田块所收获的玉米籽实中除草剂的残留量进行了分析,证明玉米籽类中伏草隆的含量低于0.5微克。     

植物调节物质的生物测定法—(Ⅰ)黄瓜幼苗形态法

生物测定在植物激素的研究中起着极其重要的作用。尤其在合成生长物质的筛选及其化学结构与生物活性的关系的研究方面。早在1938年Koepfli等就借豌豆试法(Went和Thimann 1937)对50余种物质的测定提出了具有生物活性的生长物质的五点基本化学结构要求(Koepfli等1938)。接着很多植物激素学家     

基因工程菌合成哺乳动物蛋白的下游加工问题

70年代兴起的基因工程,使人们很快地看到这一新技术的巨大潜力,迄今为止,通过多种高效大肠杆菌载体系统的构建和应用,使许多原核和真核蛋白,特别是哺乳动物蛋白都可在大肠杆菌中成功地生产。这些蛋白高水平的表达是由于通过克隆该蛋白的编码顺序到多拷贝质粒上的强启动子,和核糖体的结合部位之后,从而构成重组表达质粒。运用这种技术所克隆的基因在大肠杆菌中表达时,蛋白的积累可高达大肠杆菌体总蛋白的50％。     

乙烯利对菜豆叶枕外植体脱落和离区纤维素酶合成的影响

以乙烯利处理菜豆叶枕外植体,能显著提高对抗的脱落及其离区纤维酶的活力。蛋白质和核酸合成的抑创剂环己酰亚胺和放线菌素Ｄ,对乙烯利促进的脱落与离区纤维素酶活力不仅有明显的抑制作用,而且具有严格的时间顺序。提示乙烯利促进脱落的生理效应与其诱导高区纤维素酶合成时基因表达的转录和翻译过程有密切关系。此外,外植体经乙烯利处理后再分别不同时间加ＩＡＡ,并根据测定其抑制乙烯利诱导的纤维素酶活力变化,与不同时间加放线菌素Ｄ的实验结果相同,推断ＩＡＡ对乙烯利促进脱落的拮抗作用可能是在乙烯利诱导纤维素酶合成的转录过程。     

GL－7－ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

本文报道了利用BamHⅠ酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps．130染色体DNA片段构建重组质粒,并用³²P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经¹²⁵Ⅰ标记的抗体／抗原放射免疫反应、GL－7－ACA酰化酶活力测定以及酶反应产物的纸谱色层分析,由上述7株阳性株中鉴定出3株能在大肠杆菌中表达酰化酶活力的基因克隆株。对该3株菌的重组质粒——pMR 5、pMR 6和pMR-7-DNA的初步凝胶电泳分析表明,pMR 5和pMR 7质粒中插入片段的分子量为6．8kb,质粒pMR 6则带有5．7kb的外源片段。实验还比较了重组质粒pMR 5在8株不同的大肠杆菌宿主菌中,GL－7－ACA酰化酶的表达水平。     

弗氏痢疾杆菌和大肠杆菌多重抗药因子的接合转移和抗药因子的消除

病原菌多重抗药性的研究在医学上有重要意义。发生抗药性突变的频率一般比较低,而通过抗药因子接合转移获得抗药性的频率较高,而且常常是多重抗药因子同时转移。这种转移可在种间和属间进行。抗药性的遗传因子是由染色体外的质体携带的。我们用痢疾杆菌的抗药性菌株进行了多重抗药因子接合转移和抗药因子消除的试验,结     

脱落酸对离体水稻叶片衰老的效应

离体水稻叶片在脱落酸的作用下,叶绿素含量目渐降低,蛋白质分解加速。同时,核糖核酸水解酶、纤维素酶和酸性磷酸酯酶的活力显著上升,比对照高达3～5倍。可能由于这些水解酶活力的升高,加速了细胞内结构的解体,使衰老加速。     

转座子Tn233(CH)分子量的测定

转座子Tn233(CH)带有str sul抗性基因,最早是在痢疾杆菌的抗药质粒DR233(Tc~r Cm~r Sm~r Su~r)中发现的。现在通过菌株间的配对,将插入了Tn233(CH)转座子的质粒R144drd3::Tn233(CH)转移到E·coli C600/pBR322(Ap~r、Tc~r)细胞中,组成两种质粒共存的菌株。从此菌株中提取出质粒DNA,用转化方法使它转移到E.coli C600菌株,再从所得到的转化子中用复印方法筛选出Tn233(CH)转座到pBR322质粒的转化子E.coli C600/pBR322::Tn233(CH),然后提出此质粒DNA,经限制性内切酶BamHⅠ、EcoRⅠ、PstⅠ、HindⅢ与PvuⅡ等酶切后,在琼脂糖凝胶平板与聚丙烯酰胺凝胶柱上进行电泳分析,分别以BamHⅠ与EcoRⅠ双重酶解的λDNA、HindⅢ酶解的T5DNA、HaeⅢ酶解的M13 DNA与HaeⅢ酶解的pBR322 DNA作为泳动的标记,计算出质粒酶解片段的分子量,用此方法算出各片段分子量的总和为15.93×10~6道尔顿,此即为所求的pBR322::Tn233(CH)分子量,将此值减去pBR322的分子置2.87×10~6道尔顿,得到Tn233(CH)的分子量为13.06×10~6道尔顿。电泳结果还表明在Tn233(CH)DNA分子上,BamHⅠ、EcoRⅠ、PstⅠ、HindⅢ与PvuⅡ分别有5、9、1、6、2个切点数。