耐热甜味蛋白Brazzein的特性和化学修饰

ＭｉｎｇａｎｄＨｅｌｌｅｋａｎｔ（１９９４）从西非洲热带野生植物ＰｅｎｔａｄｉｐｌａｎｄｒａｂｒａｚｚｅａｎａＢａｉｌｌ的果实中,分离出一种甜味蛋白质,命名为ｂｒａｚｚｅｉｎ,它是由５４个氨基酸残基组成的单链多肽;甜度是蔗糖的２０００倍。本实验测得Ｂｒａｚｚｅｉｎ分子量为６．５ｋＤ,等电点为５。Ｂｒａｚｚｅｉｎ含有８个半胱氨酸,构成分子内的双硫键;其水溶液经８０℃４ｈ处理,甜味和电泳行为不变,虽然     

多肽向叶绿体的输入

绝大部分的叶绿体蛋白组份是在细胞器外合成后输入叶绿体的。它们是以含氨基端延长肽的前体形式合成的。近来的实验已证明,外源多肽与这些氨基端延长肽融合后也能被输入到叶绿体内,从而为利用遗传操作的方法改良重要的经济植物提供了令人兴奋的可能途径。 和线粒体一样,叶绿体也含有自己的遗传信息并足以进行蛋白质合成,但大多数的叶绿体蛋白是核DNA编码并在叶绿体外的细胞质核糖体上合成的(见参考文献1的综述)。实际上,叶细胞质蛋白合成的主要产物是叶绿体蛋白质的两种多肽组份即核糖-1,5-二磷酸羧化酶(rbe S)的小亚基和光捕获叶绿素a/b蛋白复合体(CAB)的组成多肽。在本篇综述中,我们将讨论目前已知的关于细胞质合成多肽输入叶绿体的机理以及最近一些证明外源多肽输入叶绿体的实验;另外还将讨论这种使外源多肽输入叶绿体能力的可能应用。     

耐热甜味蛋白brazzein的溶液NMR结构研究——二级结构和分子骨架

brazzein是从非洲西部野生植物PentadiplandrabrazzeanaBaillon的果实中提取的一种甜味蛋白 .在所有已知的甜味蛋白质中 ,brazzein的分子量最小 ,水溶性最好 ,并且具有很好的热稳定性 .利用二维核磁共振 ( 2DNMR)技术研究brazzein的溶液三维结构 ,完成了包括主链和侧链在内的所有质子共振峰的序列归属 .brazzein的二级结构包含一段α螺旋 ( 2 1～ 2 9) ,一段较短的 310 螺旋 ( 1 4～ 1 7)和两股反平行 β折叠 ( 34～ 39,44～ 5 0 ) ,分子N端可能形成了第 3股 β链 ( 5～ 7) .比较研究发现 ,该甜味分子骨架CSαβ与蝎毒、昆虫防卫素和植物抗菌蛋白γ 硫素的分子支架基本相同 .以此为基础 ,讨论了这种多功能分子支架的意义 ,可能的甜味活性中心及其热稳定性的结构基础 .     

Studies on solution NMR structure of brazzein——Secondary structure and molecular scaffold

Brazzein is a sweet-tasting protein isolated from the fruit of West African plant Pentadiplandra brazzeana Baillon. It is the smallest and the most water-soluble sweet protein discovered so far and is highly thermostable. The proton NMR study of brazzein at 600 MHz (pH 3.5, 300 K) is presented. The complete sequence specific assignments of the individual backbone and sideehain proton resonances were achieved using through-bond and through-space eonneetivities obtained from standard two-dimensional NMR techniques. The secondary structure of brazzein contains one α-helix (residues 21—29), one short 3_(10)-helix (residues 14—17), two strands of antiparallel β-sheet (residues 34—39, 44—50) and probably a third strand (residues 5—7) near the N-terminus. A comparative analysis found that brazzein shares a so-called 'eysteine-stabilized alpha-beta' (CSαβ) motif with scorpion neurotoxins, insect defensins and plant γ-thionins. The significance of this multi-function motif, the possible active sites an     

马槟榔甜味蛋白的研究 Ⅳ.稳定性和变性

通过对马槟榔甜昧蛋白Ⅰ和Ⅱ热变性试验,发现MaⅠ在80℃水浴中很快失甜味;圆二色谱证明其主链构象中的α螺旋几乎全部消失了。但Ma Ⅱ却能经受长时间保温而不失去甜味;电泳行为亦不发生改变。 在盐酸胍和尿素变性试验中发现,随变性剂浓度加大,蛋白质荧光发射光谱中色氨酸峰发生红移,直至蛋白质发生完全变性为止。以此为指标发现在酸性条件下,马槟榔甜蛋白更稳定;一般情况下3—5M的盐酸胍就足以使它变性;但即使是8M的尿素也不能使它完全变性。此和横向变性剂梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果是一致的。当脱掉8M尿素或—6M盐酸胍-MaⅠ溶液中的变性剂后,MaⅠ的甜味可恢复,其二级结构及电泳行为只发生微小的变化。 MaⅠ在SDS聚丙烯酰胺电泳分析中出现了一条双分子聚合体带,但将MaⅠ热变性、还原变性或羧甲基化等后,随MaⅠ甜味的消失,这条聚合体带也消失了。MaⅡ在任何情况下均不出现上述现象,因此认为这条带的形成与MaⅠ本身和甜味相关的一种特殊结构有关。     

B超检查对腹水病人的诊断价值探讨

目的探讨B超检查对腹水病人的诊断价值。方法对我院2004年7月至2011年7月期间,被B超检查出腹水的358例患者临床资料及其声像图表现进行回顾性分析。结果肝硬化腹水244例、结核性腹水38例、癌性腹水66例、心源性少量腹水10例。结论超声检查能及时准确地为各种腹水患者做出诊断或提供诊断依据,提高了术前诊断符合率,超声检查已成为各种腹水患者必不可少的检查手段。     

融合表达载体的研究进展

基因工程的实施,主要包括DNA克隆、外源基因的表达及其重组产物的纯化。基因表达是指一个外源基因在表达系统中,既能高效表达又具有原来的生物学活性。目前有三个表达系统,即大肠杆菌、酵母菌和哺乳动物细胞。其中大肠杆菌最早研究应用,但表达质粒转人受体菌（宿主）后,并不都能获得理想的结果,它涉及到许多因素：诸如基因结构的特点、mRNA的转录效率、蛋白质的折叠、宿生蛋白酶对重组产物的水解作用、外源基因和E·COlt基因间所存在的差异以及表达产物对宿主细胞的毒性等;此外,在高效表达的同时,为了更好地获得人们所需要的重…