Cloning, sequencing and mutational analysis of the cytochrome c552 gene (cycB) from Bradyrhizobium japonicum strain 110

We report the cloning and nucleotide sequence analysis of the cytochrome c552 gene (cycB) of Bradyrhizobium japonicum strain 110. The gene was identified with help of an oligonucleotide that was designed on the basis of the amino acid sequence determined for purified cytochrome c552 of B. japonicum strain CC705. The cycB gene product has an N-terminal 23-amino acid signal peptide that is missing in the mature cytochrome c552 protein. A B. japonicum cycB insertion mutant was constructed which had no observable phenotypic defects in denitrification and symbiotic nitrogen fixation. Thus, the function of c552 remains unknown.     

抗日本血吸虫pVAX1／SjHGPRT·SDISP多价疫苗的构建方法探讨

目的：探讨抗日本血吸虫生殖产卵编码基因多价疫苗pVAX1／SjHGPRT·SDISP的构建方法并从基因与蛋白水平验证该构建方法是否成功。方法：分别以pcDNA3．0／SjHGPRT、pcDNA3．0／SjSDISP为模板,设计引物扩增SjHGPRT、sjSDISP,采用overlap方法扩增全长SjHGPRT·SDISP。将纯化后的产物sjHGPRT·SDISP以及pVaxl质粒采用KpnI和XbaI双酶切,1％低熔点胶回收目的DNA片段以及酶切后Pvaxl载体片段双胶连。连接产物转化至DH5a细胞。挑选阳性克隆采用双酶切以及测序方法从基因水平鉴定是否构建成功。将构建产物免疫观察动物,采用免疫组化方法从蛋白水平鉴定疫苗pVAX1／SjHGPRT·SDISP是否构建成功。结果：酶切方法以及测序结果均显示重组质粒的插入序列分别与目的基因完全一致,昆明小鼠肌肉组织酶免疫组织化学染色显示免疫组小鼠肌细胞中呈现较强的棕黄色颗粒,而阴性对照组肌细胞呈阴性。结论：真核重组质粒pVAX1／SjHG—PRT·SDISP构建成功,且在昆明鼠肌肉细胞内能够获得良好的表达。     

抗日本血吸虫pVAX1／SjHGPRT-SDISP多价疫苗对昆明小鼠的保护作用及其机制探讨

目的：探讨抗日本血吸虫生殖产卵编码基因多价疫苗pVAX1／sjHGPRToSDISP对昆明小鼠的保护作用及其机制。方法：选取昆明小鼠30只,分别使用pVAX1／sjHGPRToSDISP、pVAX1以及生理盐水,每只小鼠100ug或等量经左腿股四头肌注射。处理2周后,采集动物模型血样检测IgG、IL-2,IL-4,IL-10以及INF-Y表达量。处理4周后,以20±1条尾蚴贴腹感染,感染6周后检测减虫率、减卵率。结果：尾蚴攻击动物后6周,pVAX1／sjHGPRToSDISP免疫组的肝脏减虫率为42．2％,子宫与肝脏减卵率分别为68．04％以及72．96％。与对照组比较,差异有显著性。pVAX1／sjHGPRToSDISP免疫组虫体内IgG、IL-4以及INF．V表达量明显升高．与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论：pVAX1／sjHGPRToSDISP多价疫苗具有较好的免疫保护作用,且该类作用的机制与IgG、IL-4以及INF—v的表达升高存在关联。     

连香树生理生化物质随海拔的变化及其适应性研究

通过分析四川甘洛马鞍山自然保护区内不同海拔(A1:1874m,A2:1996m,A3:2160m,A4:2290m)梯度连香树的分布状况以及生理指标含量的变化,探讨了连香树对不同环境的适应能力。结果表明:随着海拔的升高,样方内连香树的总数、株高、幼树数量及树冠投影面积值均呈降低趋势,且海拔越高,其它物种抢占的空间资源越多以及环境变恶劣,连香树的适应能力下降;各种生理指标的变化为:叶绿素a、叶绿素b、叶绿素(a+b)和类胡萝卜素含量在A1处均高于A2、A3、A4处。A4与A1相比,叶绿素b、叶绿素(a+b)分别下降了42.42%和33.96%,差异显著。超氧化物歧化酶(SOD)活性、可溶性糖含量均随着海拔升高呈下降趋势,A4与A1相比,分别下降了52.74%、66.17%,差异显著;丙二醛(MDA)和游离脯氨酸(Pro)含量均随着海拔升高呈上升趋势,A4与A1相比,分别升高了3.98倍、4.43倍,差异显著;可溶性蛋白含量呈先降后升趋势,A1、A3、A4处均高于A2处。综合本次研究表明:A1处最适合连香树的生长、A4处连香树生长最差。     

不同温度下稻螟赤眼蜂在黏虫卵上的种群生命表

稻螟赤眼蜂Trichogramma japonicum Ashmead是水稻二化螟Chilo suppressalis(Walker)的优势卵寄生蜂。本文构建了以黏虫卵为中间寄主,稻螟赤眼蜂在20℃、25℃、30℃、33℃四个温度条件下的生命表。研究结果表明利用黏虫卵繁育稻螟赤眼蜂时,不同温度下其生长发育和繁殖均存在显著差异,雌蜂平均寿命随温度的升高呈下降趋势,在20℃条件下,雌蜂平均寿命为1.44 d,显著长于其它温度,当温度为30~33℃时,雌蜂寿命最短,平均为0.59 d。在温度为20℃和25℃时,稻螟赤眼蜂的羽化率显著高于温度较高的30℃和33℃,平均为94.73%。在25℃条件下,黏虫卵繁育的稻螟赤眼蜂的净生殖力(R 0)最大,达到31.9176,单雌寄生卵数最多,为32.88个,表现出最强的繁殖能力,而在30℃条件下,瞬时增长率r m和周限增长率λ达到最大值。综合生命表参数、单雌寄生黏虫卵数、寿命、羽化率等指标,利用黏虫卵工厂化繁殖稻螟赤眼蜂的最佳温度为25℃。本研究为利用黏虫卵大量繁殖稻螟赤眼蜂提供了有价值的参考。     

不同释放密度和高度对稻螟赤眼蜂防控两种水稻螟虫效果的影响

稻螟赤眼蜂Trichogramma japonicum Ashmead是二化螟Chilo suppressalis(Walker)和稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis(Guenée)的优势卵寄生蜂。为优化稻螟赤眼蜂田间释放技术,作者分别在安徽、福建和贵州进行了稻螟赤眼蜂不同释放高度和密度对防控两种水稻螟虫效果影响的田间试验。结果表明,对于防控稻纵卷叶螟,释放量一定时,赤眼蜂在稻株顶部以上5 cm高度、8点/0.07 hm 2释放密度的防治效果优于其他释放密度和高度的处理。而对于防控二化螟,不同释放高度对赤眼蜂防治效果差异不显著。     

珍稀植物连香树在其中国分布区北缘的种子性状及幼苗更新限制

连香树(Cercidiphyllum japonicum)是第三纪孑遗植物, 存在严重的幼苗更新限制。为验证生活史早期(种子萌发)限制中国分布区北缘连香树种群幼苗更新, 并探讨其主要成因, 本研究在秦岭和太行山脉采集不同种源地的种子, 测定其形态性状、营养元素含量和质量、不同贮存时间的活力及不同温度条件下的萌发性状, 通过方差分析、相关分析等方法对不同种源地的种子性状进行分析。结果表明: 在中国分布区北缘, 其种子长度(P < 0.001)、萌发率(P < 0.001)、平均萌发时间(P < 0.001)、氮(P < 0.05)和磷含量(P < 0.001)在不同种源间存在显著差异; 而在区域尺度上(秦岭与太行山), 仅种子碳含量存在显著差异(P < 0.01)。天水种群的种子萌发率最高(21.77%), 平均萌发时间最长(11.12 d); 栾川的萌发率最低(1.38%), 平均萌发时间最短(3.47 d)。在25℃条件下, 济源种群的种子萌发率显著高于10℃、15℃和20℃条件下(P < 0.05), 而其他种源地的萌发率在不同温度条件下无显著差异。在4个温度条件下, 栾川种群种子的初始萌发时间无显著差异, 而其他4个种源地的初始萌发时间都随温度升高而缩短。相关分析结果表明, 种子萌发率与种子活力密切相关, 而种子活力与种子质量、种子的氮和磷含量显著相关。在中国分布区北缘, 连香树种子的自身属性(质量、氮和磷含量)通过影响种子活力间接影响萌发率; 且种子萌发对温度的响应主要表现在萌发时间上。本研究证实种子萌发是限制连香树种群幼苗更新的关键阶段, 主要原因如下: (1)连香树种子在9月成熟后, 10月的温度仍适宜种子萌发, 但较短生长期的幼苗在冬季低温下不能存活; (2)连香树种子萌发率低(14.4%); (3)第二年春天种子活力骤降。     

海金沙提取物体外抑菌性能研究

用M／C和纸片法考查了海金沙提取物对藤黄球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌的抑菌性能。结果表明：海金沙对4种受试菌株都有抑菌活性;37℃时,醇提物对乙型溶血性链球菌的抑菌效果最好,最大抑菌圈为8．5mm;42℃时,对藤黄球菌、金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑菌效果最好,最大抑菌圈分别为21、13．2和6．5mm。pH值为7．6时,海金沙醇提物在对藤黄球菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和乙型溶血性链球菌的最大抑菌圈分别为9．1、8．2、9mm和11．3mm。海金沙水提物和醇提物对藤黄球菌、乙型溶血性链球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑菌质量分数分别为25％、12．5％、12．5％、25％和3．12％、1．56％、6．25％、3．12％．     

日本血吸虫中国株次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的克隆、表达及其免疫保护性研究

根据基因库中日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT) EST (BU803192) 以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjHGPRT基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接,获得SjHGPRT全长cDNA (1 270 bp),经序列分析,推断该片段含有编码SjHGPRT基因的完整阅读框,其编码基因与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (SmHGPRT) 全长编码基因碱基一致性为82%,其理论推导的氨基酸组成与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的一致性约为83%. 将其编码基因克隆到表达载体pQE30上,在大肠杆菌M15中获得准确、高效表达,表达产物分子质量约为28 ku. 用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对表达产物进行蛋白质印迹检测,在预测位置上出现明显的识别条带. 重组蛋白动物免疫保护性结果显示：在虫荷、每克肝卵、每克粪卵和雌子宫内卵数方面,疫苗组与对照组比较差异均具有显著性 (P < 0.05,P < 0.01). 结果表明,日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (SjHGPRT) 全长cDNA成功克隆并在大肠菌中得到表达,表达产物具有良好的抗原性和动物免疫保护效果,是一种潜在的具有部分免疫保护性的抗血吸虫病疫苗候选分子.