量子点应用于人骨肉瘤HOS细胞系研究的生物毒性评价

目的:将合成的两种量子点应用于研究人骨肉瘤HOS细胞系,初步检测其生物毒性,以确定本研究所制备量子点可否应用于骨肉瘤的基础研究。方法:将生长良好的HOS细胞与制备的两种量子点分别共培养,使用MTT试剂盒检测不同时间点细胞活性,实验进行三次,取其平均值,分析所得数据,并绘制出量子点浓度-细胞活性曲线,分析得出两者之间的量效关系。结果:1.4μM的CdTe/ZnS QDs和0.275μM的Cd Te/Cd S QDs分别是本实验中对HOS细胞的最高毒性浓度。较短时间(30 min)的暴露分别导致了48.6±0.9%和31.9±0.8%的细胞死亡,3 h后分别有33.7±2.3%和49.4±1.1%的细胞存活。而在孵育了18 h之后,只有28.0±1.6%和15.3±1.6%的细胞存活。我们可以观察到均为典型的时间/浓度曲线。结论:选用适宜浓度以及共培养时间,本实验制备的量子点完全可以满足纳米量子点粒子使用于HOS细胞研究的基本生物学条件,可以进行人骨肉瘤HOS细胞测温等的一些列实验操作。由于量子点自身优越的光学性能以及可接受的生物安全性,在肿瘤研究领域具有很大的潜力,将会成为肿瘤示踪、检测、以及靶向治疗新的有力工具。     

癌基因Src在骨肉瘤细胞侵袭伪足形成中的作用

目的:探讨癌基因Src在体外培养骨肉瘤细胞侵袭伪足形成中的作用。方法:构建Src sh RNA慢病毒表达载体,在HEK293T细胞中包装慢病毒,感染HT-1080骨肉瘤细胞,经嘌呤霉素加压筛选,获得稳定沉默Src基因的骨肉瘤细胞系HT-1080-sh Src;实时定量PCR和Western Blot法检测基因沉默效率;采用原位明胶酶谱法检测侵袭伪足形成;采用侵袭小室实验检测下调Src基因表达对HT-1080细胞侵袭力的影响。结果:成功构建稳定沉默Src基因的骨肉瘤细胞系HT-1080-sh Src及对照细胞系HT-1080-shluc,经实时定量PCR和Western Blot检测,与对照细胞系相比,HT-1080-sh Src细胞中Src基因表达下调3倍以上;下调HT-1080细胞中Src基因表达能显著抑制HT-1080细胞侵袭伪足形成及其对细胞外基质的降解能力;下调Src基因表达能显著抑制骨肉瘤细胞侵袭力。结论:癌基因Src参与调节骨肉瘤细胞HT-1080侵袭伪足形成,促进肿瘤侵袭、转移。     

14-3-3theta 蛋白在人骨肉瘤中的表达和临床意义

目的：研究14-3-3theta蛋白在人骨肉瘤中的表达和临床意义。方法：在62 例人骨肉瘤和正常骨组织样本中,通过免疫组化 的方法检测14-3-3theta 蛋白的表达情况,并分析其表达与骨肉瘤临床病理学特征间的关系。结果：在62 例骨肉瘤和正常骨组织 中,14-3-3theta 蛋白表达的阳性率分别为80.6%和17.7%。统计学分析表明,14-3-3theta 蛋白的表达与骨肉瘤肿瘤大小（P=0.016）、 高组织学类型（P=0.001）、高Enneking分级（P=0.047）具有显著相关性,而与骨肉瘤患者的年龄（P=0.901）、性别（P=0.691）、肿瘤部 位（P=0.802）、碱性磷酸酶（P=0.884）、血清白蛋白（P=0.822）、血沉（P=0.836）等均无关。Spearman 相关性分析检测发现,14-3-3theta 蛋白高表达与肿瘤大小（r = -0.34, P = 0.034）、高组织学分级（r = -0.27, P = 0.031）、高Enneking 分级（r = -0.05, P = 0.025）呈正相 关,而与骨肉瘤患者的年龄、性别、肿瘤部位、碱性磷酸酶和血沉等均无相关性（P > 0.05）。结论：在骨肉瘤组织中,14-3-3theta 作为 癌基因表达增加,与骨肉瘤的疾病进展密切相关,14-3-3theta 可以作为骨肉瘤疾病监测的一种分子指标。     

miR-15a 和miR-16-1 模拟物对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607 凋亡 和增殖的影响

目的:探讨miR-15a和miR-16-1模拟物对于人骨肉瘤细胞系SOSP-9607凋亡和增殖的影响。方法:将SOSP-9607细胞分为实验组和对照组。实验组分为miR-15a组、miR-16-1组、miR-15a+miR-16-1组。以miR-15a组为例,采用miR-15a模拟物(hsa-miR-15a mimics)上调SOSP-9607细胞内的miR-15a表达量。对照组分为阴性对照组和空白对照组。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖,并计算细胞增殖效率。结果:通过统计学分析,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高(P<0.05);实验组的细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05)。结论:上调SOSP-9607细胞内miR-15a和miR-16-1的表达量可促进SOSP-9607细胞的凋亡并抑制其增殖。     

光敏剂HMME对人骨肉瘤细胞U-2OS的光动力作用及其作用机制的初步研究

目的：探讨光敏剂（HMME）介导的光动力疗法对人骨肉瘤细胞U-2OS的杀伤效应及机制研究。方法：使用不同浓度（0、10、20、30、40μg.ml-1）的光敏剂,采用不同光照能量（0、3、6、9 J.cm-2）照射人骨肉瘤细胞,与空白对照组、药物对照组（无光照但加光敏剂）和光照对照组（不加光敏剂但加光照）进行比较,MTT法检测细胞的存活率,选择半数有效量药物浓度和光照能量,作为实验组。以空白对照组为对照,采用Hoechst33342染色法,观察细胞凋亡情况。用western blot方法检测细胞凋亡蛋白caspase-7、caspase-9和PARP-1。结果：MTT结果显示,空白对照组、药物对照组和光照对照组对细胞存活率在96.7%和100%之间,药物的半数有效量为40.1μg.ml-（16 J.cm-2）和25.0μg.ml-（19 J.cm-2）。Hoechst33342染色法观察到实验组细胞明显凋亡。westen blotting检测结果,实验组与对照组相比,caspase-7、caspase-9和PARP-1表达明显增高。结论：HMME-PDT对人骨肉瘤细胞U-2OS有显著的杀伤效应,且呈光敏剂浓度和光照强度依赖性,其杀伤效应与caspase途径相关。     

CyclinE和p27蛋白在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的探讨CyclinE和p27在骨肉瘤中表达及临床意义。方法检测108例骨肉瘤石蜡包埋组织中CyclinE和p27蛋白表达水平,统计分析其与患者临床病理因素和预后之间的关系。结果骨肉瘤组织中CyclinE的阳性率为68．52％,p27的阳性率为26．85％;CyclinE和p27蛋白表达水平与骨肉瘤病理分级、软组织浸润、远处转移、Enneking分期及患者整体生存期有关（P〈0．05）;CyclinE蛋白阳性组骨肉瘤患者5年存活率显著低于阴性组;而p27蛋白阳性组患者5年存活率显著高于阴性组（P〈0．05）。Cox多因素分析提示软组织浸润及远处转移状态、病理分级、Enneking外科分期、CyclinE和p27蛋白表达水平是影响骨肉瘤患者预后的独立危险因素（P〈0．05）。结论CyclinE和p27蛋白表达水平是判断骨肉瘤患者预后的新指标,联合检测CyclinE和p27蛋白表达水平对骨肉瘤的进展、预后判断有重要意义。     

新辅助化疗联合人工膝关节置换治疗膝关节附近骨肉瘤

目的:评价新辅助化疗联合人工膝关节置换治疗膝关节附近骨肉瘤的临床疗效。方法:38例膝关节附近骨肉瘤采用新辅助化疗和人工膝关节置换,所有病例均进行肿瘤细胞坏死率、5年内肿瘤局部复发率、5年生存率和膝关节功能评估。结果:38例患者新辅助化疗后肿瘤细胞坏死率平均95.8%;随访6-9年,38例患者中5年内肿瘤局部复发12例(31.6%),5年后生存31例(81.6%),膝关节功能优良率92.1%。结论:新辅助化疗联合人工膝关节置换治疗膝关节附近骨肉瘤可有效提高骨肉瘤5年生存率,保存患肢功能,是骨肉瘤保肢治疗的一种较好的方法。     

circ_0001461靶向抑制miR-30a-5p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

摘要 目的：探讨circ_0001461对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及调控机制。方法：采用实时荧光定量聚合酶反应（qRT-PCR）检测检测circ_0001461在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平。在U2OS和HOS细胞中转染sh-NC和sh-circ_0001461后,采用CCK8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测增殖相关分子Ki-67 mRNA的表达水平,Western Blot检测凋亡相关分子Cleaved-caspase-3蛋白的表达水平。采用双荧光素酶报告基因检测circ_0001461和miR-30a-5p的结合情况。结果：circ_0001461在骨肉瘤组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织（P<0.05）,circ_0001461在骨肉瘤细胞U2OS和HOS中的表达水平均明显高于成骨细胞NHOst（P<0.05）。低表达circ_0001461能够抑制骨肉瘤细胞U2OS和HOS的增殖和增殖相关分子Ki-67的表达（P<0.05）;促进骨肉瘤细胞U2OS和HOS的凋亡和凋亡相关分子Cleaved-caspase-3蛋白的表达（P<0.05）。双荧光素酶结果显示circ_0001461能够靶向结合miR-30a-5p。低表达circ_0001461能够促进miR-30a-5p的表达（P<0.05）,circ_0001461和miR-30a-5p在骨肉瘤组织中的表达呈负相关（P<0.05）。在U2OS细胞中共转染sh-circ_0001461和miR-30a-5p mimics后能够进一步加强单独转染sh-circ_0001461对U2OS细胞增殖和凋亡的影响（P<0.05）;在HOS细胞中共转染sh-circ_0001461和miR-30a-5p inhibitors后能够逆转单独转染sh-circ_0001461对U2OS细胞增殖和凋亡的影响（P>0.05）。结论：circ_0001461在骨肉瘤组织和细胞中明显高表达,低表达circ_0001461能够靶向促进miR-30a-5p的表达进而抑制骨肉瘤细胞增殖和促进细胞凋亡。     

康莱特联合阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究康莱特对骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用及其相关机制,探寻骨肉瘤的中西医结合化疗方案.方法免疫组化及RT-PCR方法检测不同浓度康莱特作用下骨肉瘤细胞的Fas表达,并将康莱特与阿霉素单独及联合应用于骨肉瘤细胞,采用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜、荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变.结果康莱特可上调骨肉瘤细胞的Fas表达并诱导凋亡,康莱特浓度达到10μl/ml时,细胞抑制率不再明显改变,但如与1μlg/ml阿霉素合用将使细胞抑制率进一步提升(P<0.01).细胞形态观察及凋亡率测定也显示,康莱特与阿霉素联用可诱导更多骨肉瘤细胞凋亡.结论康莱特可通过上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡,康莱特与阿霉素合用可提高杀伤骨肉瘤细胞.