植物组织培养中液体生根培养基的研究与应用

采用液体生根培养基（不加琼脂）对蚊净香草（Pelargoniumgraveolens）进行生根培养，并已应用于非洲菊的生根培养，得到了很好的效果。现介绍如下。     

非洲菊亲环素家族基因GCyP的克隆与生物信息学分析

亲环素(Cyclophilins,CyPs)具有肽脯氨酰顺反异构酶活性,催化蛋白质折叠过程,并且起着分子伴侣的作用,同时参与mRNA加工和信号转导等生物学过程.本研究在抑制性消减杂交获得表达序列标签(EST)的基础上,通过生物信息学方法获得了非洲菊亲环素家族基因GCyP的cDNA.进而设计特异引物,以非洲菊舌状花为材料,通过RT-PCR扩增并经T-A克隆后测序,获得一条长度为732 bp的序列.该序列经生物信息学分析确认其为GCyP,编码的GCyP含172个氨基酸残基,属于单结构域胞质型亲环素.GCyP序列提交GenBank后接收,登录号为EU1269167.     

非洲菊植株再生和基因工程育种的研究进展

对近几年来非洲菊植株再生和基因工程育种的研究进展和成果进行了总结,同时对非洲菊不同外植体材料和培养基配方的进展进行了探讨.近年来,不断发展的基因工程技术已经成为花卉育种研究的热点,解决了一些传统育种工作中不能突破的问题,它为非洲菊性状改良提供了全新的思路,主要介绍了这一技术在非洲菊花色、花型和增加抗性等方面的应用概况.     

非洲菊组培快繁技术的优化

6个品系非洲菊的快繁技术优化试验结果表明,花托是最好的外植体,其起始培养需要高浓度的6-BA,基因型对其离体培养响应有明显影响。经优化的花托快繁条件为:起始4周,1/2MS+BA10+NAA0.2(mg.L~(-1)下同);愈伤组织出苗4周、小苗增殖3周,MS+BA3.0+NAA0.2;生根3周,1/2MS+IAA1.0。花托的4周直接成芽率71％,花托愈伤组织的4周成芽率97％,小苗增殖倍数10倍以上,生根率99％,平均每苗7.4条根、根长30mm。     

非洲菊花瓣总RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒（RNeasy Plant Mini Kit）提取非洲菊（Gerbera hybrida）花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步法提取总RNA,在RNA沉淀后,再次加入适量变性液,冻融2次,再加热至45 ℃使RNA完全溶解;试剂盒提取时,适当延长各提取步骤的离心时间,并增加DEPC H2O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。     

非洲菊盘状花雄蕊发育与舌状花生长着色的对应关系

非洲菊(Gerbern hybrida)头状花序由外轮舌状花和内轮盘状花构成。通过观察内轮盘状花雄蕊花粉囊和花粉粒的形态结构与发育顺序,和测定外轮舌状花花瓣的长度、宽度、花色素苷含量等,对它们之间的对应关系进行了研究。花序外轮舌状花花瓣开始着色时为P3期,此时第1轮盘状花出现成熟花粉粒。研究明确了内轮盘状花花粉粒发育与外轮舌状花生长时期和花色素苷积累的对应关系。     

多效唑和三唑酮对非洲菊微繁的效应

培养基中加入多效唑0．2,0．4,0．6mg／L,可使非洲菊组培苗健壮、矮化,提高增殖系数,促进继代后生根;在生根培养基中加入0．2～1．0mg／L多效唑,可增加生根量,促进根的增粗,提高移栽成活率。0．1mg／L三唑酮可降低植株高度,提高增殖率。     

盆栽非洲菊基因枪介导法转化体系的建立

以非洲菊盆栽品种为材料,研究了BA和NAA不同浓度组合对不定芽诱导增殖的影响;基因枪介导法转化的不同轰击距离对转化率影响。结果表明：1．5mg／LBA的培养基上增殖倍数最高,高达8．96倍;9cm的目标轰击距离转化效率最高,达到10．9％。建立了非洲菊盆栽品种的再生和转基因体系,为非洲菊基因工程育种打下基础。     

农杆菌介导的Pr基因对非洲菊遗传转化的研究

采用农杆菌介导法将Pr基因转入非洲菊(Gerbera hybrida),建立适合于农杆菌介导的基因遗传转化受体系统,获得再生植株。经PCR和GUS染色检测,Pr基因成功转入非洲菊幼苗。     

非洲菊基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增模板浓度优化

以改良的CTAB法为基础,对非洲菊基因组DNA提取进行了下述优化：在第二次用氯仿,异戊醇抽提时,加入“PCN”溶液(0.0675g PVP,45μl 10％ CTAB 4％NaCl),可明显去除多糖;在材料研磨时加入化学物质M(0.1000g Na2SO3,0.0500g Vc)及N(0.0200gVE,0.1000gNa2B4O7,0.0200gPVP,200μlB-巯基乙醇),都可去除酚类物质,明显提高DNA及ISSR-PCR扩增的质量,但N的效果稍优于M;同时加入M、N及“PCN”,具有明显的优化效果,所提5个样品DNA,平均A260/A280、A260/A230分别为1.81、2.02,浓度为0.649μg/μl,片段大小约为49kb,ISSR扩增带多且清晰、明亮、稳定性及多态性高,表明DNA纯度很高。对扩增反应的最佳模板浓度进行研究表明,所提DNA模板必须稀释30倍(浓度为15～30μg/μl时),才能扩增出清晰的谱带。