鹤顶兰胚囊发育过程中Ca~（2＋）分布的超微细胞化学定位（英文）

用焦锑酸盐沉淀法对鹤顶兰（Phaius tankervilliae）胚囊发育过程中的Ca2＋状态进行超微细胞化学定位。观察结果发现：功能大孢子时期,珠孔端的胚囊壁上开始出现小颗粒的Ca2＋沉淀,但功能大孢子细胞内未见明显的Ca2＋标记;四核胚囊时期胚囊壁上的Ca2＋沉淀明显增多,液泡膜上有Ca2＋沉淀出现,珠孔处的Ca2＋沉淀颗粒较大;成熟胚囊时期,胚囊壁上的Ca2＋沉淀进一步增多,且胚囊内Ca2＋分布明显增多,且极性明显,珠孔端助细胞、卵细胞比合点端反足细胞有更多的Ca2＋沉淀。鹤顶兰成熟胚囊内Ca2＋积累的来源有：（1）在胚囊成熟前主要由珠被细胞、珠细胞通过胞间连丝向胚囊运输;（2）以沉淀有大量Ca2＋的小泡形式跨过胚囊壁进入胚囊。     

野油菜黄单胞菌分泌组双向电泳样品制备方法的建立

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是十字花科植物黑腐病的病原细菌。我们建立了Xcc的蛋白质组学研究平台,用于分离、鉴定该菌的致病相关蛋白。为了减少胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)对蛋白材料质量的影响,我们构建了EPS缺陷的Xcc8004ΔgumB突变体。本研究以Xcc8004ΔgumB出发菌株,用诱导培养液培养,取细胞上清通过超滤浓缩得到蛋白质粗提物,分别采用丙酮沉淀法、试剂盒纯化法和丙酮沉淀-试剂盒联用法来纯化蛋白质粗提物,通过比较双向电泳的结果优选最佳的样品制备方法。结果证明丙酮沉淀-试剂盒联用法较为理想,所得双向电泳图片清晰,分辨率高。因此,此方法可以用于制备野油菜黄单胞菌分泌组双向电泳样品,并可以满足进一步研究的需要。     

用异丙醇沉淀法快速提取质粒DNA

质粒 (plasmid)是 1种染色体外的稳定遗传因子 ,大小在 1～ 2 0 0 kb之间 ,具有双链闭合环状的 DNA分子 ,主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。它可将有用的外源基因通过基因工程的手段送入细胞中进行繁殖和表达 ,是分子生物学实验中常用的工具。制备质粒 DNA的方法有许多 ,但大多需要苯酚、氯仿抽提以除去蛋白 ,而饱和酚的配制及氯仿等有机溶剂的挥发性气味给以学生为主体的教学实验带来了诸多不便。我们经过实验 ,提出了一种快速提取质粒的方法 ,该方法避免了上述不便并可提取足够量的较纯的质粒 ,在限制性内切酶酶切、DNA转接中可以…     

聚乙二醇沉淀剂有效分离尿外泌体

尿外泌体是病毒大小的胞外囊泡,是非侵入性获得肾及泌尿生殖道细胞生理病理信息的重要靶标。聚乙二醇沉淀 剂可经济高效地分离富集血清等外泌体,但未见用于尿外泌体富集的详细报道。本研究采用聚乙二醇沉淀剂分离鉴定尿外泌体,并对其RNA组分进行检测,以期建立一个经济、高效、简便的尿外泌体分离富集方法。采集10例健康志愿者晨尿20 mL,聚乙二醇沉淀剂分离尿外泌体。透射电镜观察到直径30～100 nm双层膜包绕的囊性小泡,中央有直径5～15 nm高电子密度区。Western印迹检测到外泌体标记蛋白CD63、CD9、TSG101、ADAM10和内标蛋白β-肌动蛋白的表达。纳米粒径仪测定粒子直径介于30～130 nm,并可见25.37 nm和95.07 nm二个粒子峰。qRT-PCR扩增得到β-肌动蛋白和RNU6 RNA产物带。上述结果表明,聚乙二醇沉淀剂可分离富集尿外泌体,该法简单、高效,不需要超速离心机等昂贵设备,且采用该法富集到的外泌体可用于后续蛋白质与核酸分析。该方法可望加速液体活检应用,尤其是肾及泌尿生殖道病变的无创检测。     

线粒体DNA提取方法的比较

目的：将提取线粒体DNA的碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法加以比较,以得到最方便快速提取线粒体DNA的方法。方法：分离Wistar大鼠小肠上皮细胞,用3种方法提取线粒体DNA,紫外分光光度法定量。用琼脂糖凝胶电泳和线粒体ATPase 8亚基基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA。结果：改进高盐沉淀法线粒体DNA量最多,Triton法最少。OD260／OD280均在1．78-l.85间。将改进高盐沉淀法提取线粒体DNA用于PCR扩增,测定出了线粒体DNA ATPase 8亚基基因序列。结论：改进高盐沉淀法提取线粒体DNA具有操作简单,产量多的优点,该法所提取mtDNA可用于mtDNA测序。     

一种构建重组杆状病毒的简易方法

对传统构建重组杆状病毒的方法作了如下改进：先用磷酸钙共沉淀法单独将质粒DNA转进昆虫Sf细胞中,其中重组质粒采用聚乙二醇沉淀法纯化,12～24h后再用低剂量的病毒攻击细胞．改进后的方法简便、省时、经济、重组率高,适于一般实验室使用．     

双向电泳比较两种方法获得的水稻叶片蛋白

水稻是研究单子叶植物遗传和分子生物学的模式植物,是研究植物基因组学和蛋白质组学的一个重要的生物材料。双向电泳作为蛋白质组学中蛋白分离的主要方法,其关键步骤在于蛋白质的提取。为了比较不同蛋白提取方法,采用TCA/丙酮沉淀法和Mg/NP-40提取法分别提取水稻叶片总蛋白,用双向凝胶电泳分离两种方法获得的蛋白。结果表明,在双向图谱中,Mg/NP-40提取法分离的蛋白点数较多,RuBisCO大亚基的含量较低,适于分离等电点在5～7范围内、分子量在14～20kD和高于67kD的水稻叶片蛋白质;TCA/丙酮沉淀法分离的蛋白点数较少,适于分离等电点在4～5范围内、分子量在31～67kD内的水稻叶片蛋白质。     

用改进的Mg^＋＋沉淀多聚核糖体法分离胞质mRNA

本文报道一种用改进的Palmiter的方法分离纯化胞质mRNA。即利用镁离子沉淀核糖体,提取细胞质总RNA,进而纯化胞质mRNA的方法。该方法得到的mRNA是正在翻译的成熟的胞质mRNA。所得mRNA得率和质量都优于其他方法,便于常规检测,并可用于cDNA的合成和PCR扩增。     

测定糖尿病患者血清LDL-C水平的方法学比较

目的：比较不同方法检测糖尿病患者血清LDL-C水平,为临床诊疗提供准确可行的检验方法。方法：采用沉淀法、匀相法、电泳法及超速离心法对233例糖尿病患者和102例健康人群的血清LDL-C水平进行测定,比较各方法之间的相关性,同时分析导致结果差异的因素。结果：四种方法检测健康人群LDL-C水平,结果间无统计学差异（P〉0.05）;糖尿病组,当TG≤2.26mmol/L时,四种方法检测LDL-C结果间相关性良好。高胆红素、血红蛋白、高TG及乳糜等干扰因素存在时,与其他方法相比,电泳法和超速离心法检测血清LDL-C结果受影响较小（P〉0.05）。结论：超速离心法虽耗时、价格贵,但仍为检测LDL-C的经典方法,电泳法受高胆红素、血红蛋白、高三酰甘油等干扰因素的影响相对较小,适用于糖尿病合并高血脂患者血清LDL-C水平检测。