自噬在肝脏蛋白质和脂质代谢中的作用

自噬是一个通过降解细胞组分如细胞器和蛋白质等以维持细胞存活和功能的重要的溶酶体途径。肝脏作为新陈代谢的中枢器官,肝脏高度依赖于自噬以发挥正常功能并防止疾病发展。肝细胞自噬的改变参与肝损伤,脂肪肝等肝病的病理变化,以自噬为靶点寻求治疗各种肝病的方法已成为热点研究领域,但自噬在肝脏蛋白质和脂质代谢中的作用极其机制尚不清楚。本文对自噬在肝脏蛋白质和脂质代谢中的作用的最新进展进行综述。     

AFP蛋白芯片技术的检测流程优化

目的:通过优化现有的蛋白芯片检测过程,在保证检测准确性的同时缩短甲胎蛋白(Alpha Fetal protein,AFP)的检测时间,提高检测效率,为原发性肝癌的筛查提供经济、便捷、省时、有效的检测方法。方法:本研究在传统蛋白芯片检测流程(1-1.5小时)的基础上,通过优化检测流程将检测时间缩短至18分钟,并且通过和传统方法进行比较,评价该优化方法的检测效能。结果:与传统蛋白芯片检测方法相比,本优化方法的检测时间缩短至18分钟。重复检测同一样本,传统方法 AFP水平为16.50±1.172ng/m L,优化方法 AFP水平为18.33±1.029 ng/m L,结果无明显统计学差异(P=0.251)。结论:本研究成功地优化了AFP的蛋白芯片检测流程,在缩短检测时间的同时,保证了检测的准确率,是一种经济省时易操作的AFP检测方法。     

甲胎蛋白异质体分离方法的优化

目的:优化现有的甲胎蛋白异质体(AFP-L3)分离和检测方法,找到一个最有效的AFP-L3的提取方法,为今后的AFP-L3研究奠定前期基础。方法:应用北京热景生物技术公司的甲胎蛋白异质体(AFP-L3)亲和吸附离心管,通过改变亲和介质使用量和洗脱液体积的配伍梯度变化来优化实验流程,排除提取AFP-L3的影响因素,分离血清中的AFP-L3,并用罗氏公司的甲胎蛋白检测试剂盒检测分离的效果。结果:发现在不改变亲和介质体积的情况下,随着洗脱液体积的减少AFP-L3回收浓度逐渐增加,且在75 ul洗脱液时能够获得最高AFP-L3回收浓度。结论:成功地优化了北京热景生物技术公司的甲胎蛋白异质体(AFP-L3)亲和吸附离心管及其配套试剂的使用方法。     

肝癌血清标志物研究进展

肝癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,多数患者确诊时已属中晚期。5年以上长期生存率仅为10%左右。肝癌的早期诊断成为提高患者长期生存率的最佳有效途径。近年来,血清肿瘤分子标志物已经成为肝癌早期诊断研究领域的研究热点之一血清甲胎蛋白(AFP)检测是当前诊断肝癌常用而又重要的方法。对肝癌的确诊、预后推测、疗效判断及复发转移的监测具有良好的临床价值。甲胎蛋白异质体(AFP-L3)和脱α-羧基凝血酶原(DCP)在预测肝癌预后方面可能优于AFP。磷脂酰基醇蛋白聚糖3(GPC-3)和α-L岩藻糖苷酶(AFU)作为AFP的补充,能够大幅提高肝癌诊断的正确率。血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)和高尔基Ⅱ型跨膜蛋白(GP-73)过表达发生在肝癌早期,有可能成为肝癌早期诊断指标。凋亡早期蛋白(M30)可以作为监测癌细胞凋亡的重要生物标记。细胞质胸苷激酶(TK1)、肝细胞生长因子(HGF)和CD147抗原分子在多种癌组织包括肝癌中显著高表达。本文对国外近几十年来肝癌血清标志物研究的一些成果进行了总结和评价,以期为国内学者进行此类研究提供一定的借鉴。     

乙型肝炎病毒核心抗体IgM的蛋白芯片检测法研究

目的:探索蛋白芯片技术检测乙型肝炎病毒(HBV)抗HBc-IgM的可行性。方法:应用Nano-Plotter TM-压电式微量喷墨点阵制备系统自制的核心抗原蛋白芯片在经10%山羊血清封闭后加入待测血清37℃孵育,PBST清洗晾干后后再次加入检测抗体即HRP-抗人Ig M抗体,芯片用伯乐成像仪检测有无信号。结果:24份HBs Ag和抗HBc阳性血清中经蛋白芯片检测抗HBc-IgM阳性率为83.3%(20/24);24份健康志愿者血清中经蛋白芯片检测抗HBc-IgM阳性率为4.1%(1/24)。乙肝血清与健康志愿者血清化学发光信号差异明显。结论:蛋白芯片技术可较好地应用于定性检测HBV抗HBc-IgM,为临床快速判断是否存在HBV感染和监测慢性肝炎HBV活动性提供新的辅助诊断方法。     

化学发光蛋白芯片用于检测肝癌患者血清CA19-9水平的方法研究

目的:探讨一种简单、有效、低成本、低耗时的化学发光蛋白芯片方法用于检测血清中的糖链抗原19-9(Carbohydrate Antigen19-9,CA19-9),以有助于对原发性肝癌的早期辅助诊断。方法:预先在醛基芯片上包被鼠源CA19-9单克隆抗体,建立CA19-9抗体蛋白芯片,共筛选出46份肝癌血清和32份正常健康人血清,然后用蛋白芯片方法进行检测,并以化学发光成像对检测结果进行判定。结果:24份肝癌血清的CA19-9水平高于37 U/m L,22份肝癌血清的CA19-9水平低于37 U/m L;30份正常人血清CA19-9含量低于37 U/m L,2份正常人血清的CA19-9含量为37 U/m L;灵敏度为52.17%,特异性为93.75%,ROC曲线下面积0.688[95%CI:0.566,0.811]。结论:本研究成功的建立了血清CA19-9的化学发光蛋白芯片检测方法。     

细胞间粘附分子5（ICAM-5）在HIV相关神经损伤中的保护性作用

为探究细胞间粘附分子5 (intercellular adhesion molecule 5,ICAM-5)在HIV相关神经认知损伤中的作用,用ELISA法测定HIV感染者脑脊液样本和体外动物神经细胞培养体系中可溶性细胞间粘附分子5(ICAM-5s)的含量|蛋白印迹法检测ICAM-5蛋白表达|免疫荧光法观察神经细胞形态学变化|用CytoTox 96非放射性细胞毒性实验检测神经细胞死亡率.抗ICAM-5单克隆抗体Cy3标记的免疫荧光染色结果显示,ICAM-5可在神经元细胞的胞体和突起表达,且经HIV神经毒性蛋白gp120 500pmol/L处理的神经细胞平均突起长度显著小于无gp120处理的对照组|体外神经细胞培养体系中,gp120+基质金属蛋白酶3（MMP3）实验组的ICAM-5s含量显著高于gp120组,且前者神经元细胞的死亡率高于后者|在 HIV感染者中,HIV相关神经认知障碍（HIV associated neurocognitive disorder,HAND）患者脑脊液中ICAM 5s的水平显著高于认知功能正常的患者.结果表明,ICAM-5可能具有标记神经细胞突起的潜能,但其确切性有待进一步实验验证|ICAM-5与HIV相关神经认知功能损伤相关,具有潜在的神经元细胞保护作用.     

脱-R-羧基凝血酶原的Ba- 蛋白芯片法的建立和应用

目的：研发建立一种快速、特异性高、低成本的检测血清中脱-r- 羧基凝血酶原（DCP）的蛋白芯片,并通过检测DCP 阳性肝 细胞肝癌（HCC）血清临床样本对其进行评价。方法：首先采用柠檬酸钡吸附沉淀法去除血清中正常凝血酶原,然后通过双抗体夹 心法蛋白芯片检测血清中DCP 含量。通过Ba- 蛋白芯片法检测41 例DCP阳性HCC患者血清和66 例健康人血清,进行盲法验 证。结果：通过Ecarin- 显色多肽底物法证实柠檬酸钡吸附沉淀法能够完全除血清中正常凝血酶原,根据" 平均数+3× 标准差" 公式设置蛋白芯片的Cut-off值作为阳性判定标准,Ba-蛋白芯片法检测DCP阳性HCC血清的灵敏度为95.1 %（39/41）,特异度 为100 %（66/66）。结论：成功建立检测血清中DCP浓度的Ba- 蛋白芯片法,为多种标志物联合检测HCC 的蛋白芯片的研发提供 候选血清标志物。     

柯萨奇病毒A组16型衣壳蛋白VP1的原核表达及初步活性测定

目的:原核表达柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1,以便于研制血清学检测试剂。方法:在基因库中钓取CVA16-VP1的全长序列,采用PCR逐步合成法合成其全长基因,测序正确后克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a(+)/VP1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化;建立捕获免疫酶联法检测IgM抗体,检测20份手足口病阳性血清和30份阴性血清,评价重组抗原的灵敏度和特异性;采用CVA16全病毒免疫的抗小鼠血清进行Western印迹。结果:重组CVA16-VP1蛋白在大肠杆菌中获得高效表达;用重组蛋白抗原检测,20份手足口病患儿阳性血清中有4份阳性,其中1份同时为肠道病毒71型(EV71)VP1阳性,30份阴性血清无反应。结论:实现了CVA16-VP1的高效表达,初步结果显示重组蛋白具有较好的抗原性,为柯萨奇病毒A组16型诊断试剂的研究奠定了基础。     

胶体金渗滤方法检测乙肝患者血清中乙肝核心抗体的研究

目的:建立胶体金免疫渗滤法检测乙肝患者血清中乙肝核心抗体(anti-HBc Ig M)抗体的方法,评价其灵敏度、特异性和重复性。方法:预先在硝酸纤维素膜上包被乙肝核心抗原HBc Ag,将血清或者血浆加在硝酸纤维素膜上,血清或者血浆中的anti-HBc Ig M与HBc Ag结合。洗涤去掉非特异结合,加入胶体金标记的抗人-Ig M,洗涤去掉没有结合的抗人Ig M抗体。硝酸纤维素膜上的抗原-Ig M-抗人Ig M形成的"三明治"复合物呈现红色圆点,证实实验有效。结果:102份乙肝患者血清,anti-HBc Ig M阳性标本99份。检出率97%。50份正常血清中,有一份检测结果弱阳性,特异性98%。结论:胶体金免疫渗滤法检测anti-HBc Ig M敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要特殊的仪器设备,在anti-HBc Ig M快速检测上有广阔的应用前景。