减蛋综合症病毒纤维蛋白C-末端的分泌表达及抗原性分析(英文)

目的:在大肠杆菌中分泌表达重组纤维蛋白的C-末端序列,并检测其抗原性。方法:采用PCR技术扩增了减蛋综合症病毒(EDSV)纤维蛋白C-末端的编码基因,并将其克隆到组成型分泌表达载体pUC18ompAcat上构建pUC18ompA-EDS。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株构建工程菌,培养工程菌以表达目的蛋白。结果:SDS-PAGE分析表明,纤维蛋白C-末端在大肠杆菌中成功实现了表达,且部分重组蛋白分泌到了周质空间和胞外的培养基中,Ni2+-NTA树脂分离纯化后,Western blotting对其免疫原性的分析表明,重组蛋白可与鸡抗EDSV血清发生特异反应。结论:说明获得的纤维蛋白的C-末端具有明显的抗原性,该研究对于开发预防EDSV的基因工程疫苗的研究具有一定参考作用。     

冬瓜蛋白酶的分离纯化及其部分性质研究(英文)

冬瓜的果肉中发现了丰富的蛋白水解酶.用硫酸铵将冬瓜果肉汁分级盐析,得到粗酶液.再经DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Superdex-75柱层析等步骤得到一种电泳纯的冬瓜蛋白酶.SDS-PAGE测得其分子量为64 kDa.以酪蛋白做底物时,该酶的最适反应温度为70℃,最适作用pH为6.5,在pH 4.5～10.5,40～70℃范围内较稳定.PMSF强烈抑制该蛋白酶的活性.另外,Hg~(2+)对该酶有强烈的抑制作用,Mn~(2+)离子对其有保护作用,Zn~(2+)、Ca~(2+)和Cu~(2+)等离子对其活性没有影响.     

重组沙蚕激酶的诱导表达和分离纯化

将已构建好的表达载体pGEX-4T-2SAK 转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合的沙蚕激酶蛋白,通过GST树脂亲和吸附和凝血酶酶切及冷冻干燥等步骤进行分离纯化,用SDS-PAGE分析要重组的目的蛋白及纯化后的蛋白.纯化后的沙蚕激酶经纤维平板法测定具有溶栓活性.冷冻干燥品经SDS-PAGE分析表明达到电泳纯.     

松材线虫携带一株荧光假单胞菌分泌毒素的初步研究

本文研究了离体情况下松材线虫携带的致病菌一株荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens GcM5-1A)在LB、NB和PD三种培养基中的毒性, 以及产生的毒素对黑松(Pinus thunbergii)切根苗和悬浮细胞的效应。结果显示, 菌体在LB和NB 培养液的毒性较高, 其中 LB培养液的毒性最高, 且培养液的pH值为7时比pH值为5时毒性高, 而该菌在PD培养基中几乎不产毒。细菌培养液经硫酸铵分级沉淀, 得到了主要含有50 kDa蛋白的蛋白组分, 该蛋白组分对黑松悬浮细胞和切根苗均有较高的毒性, 并能改变黑松悬浮细胞细胞膜的透性, 导致胞内可溶性糖和游离氨基酸外渗。     

一种崂山百合的离体快速繁殖技术

以崂山百合的鳞茎为外植体,通过植物组织培养技术成功获得了再生植株,建立了该植物的快速无性繁殖体系。整个组织培养过程分为芽的诱导、根的诱导和移栽三个阶段。适合芽诱导的最佳外植体是:鳞茎基部,最适培养基是:1/2 MS+0.5 mg/LNAA+0.8 mg/L KT+3%蔗糖。用于生根的最佳培养基是:1/2 MS+0.4 mg/L IBA+3%蔗糖。最适培养温度为25℃.不同基质对组培苗移栽的成活率有一定影响,其中在珍珠岩上的移栽成活率为98%。     

中国中生代鞘翅目化石研究现状

1923年A.W.Grabau通过对山东省莱阳盆地莱阳组早白垩世昆虫化石的研究,命名了我国第1种鞘翅目化石昆虫(Proteroscarabaeus yeni).此后,中国昆虫化石分类学者先后发表了40余篇关于我国中生代鞘翅目化石昆虫的分类论著,共描述鉴定了182种,涉及35科,137属.这些化石分布于12个省,其中三叠纪11个种,侏罗纪68个种,白垩纪103个种.本文通过图表列举出我国已发现的中生代鞘翅目化石昆虫名录以及它们的分布和年代,总结了国内中生代甲虫化石当前的研究状况,并初步分析了研究中存在的一些问题.另外本文还介绍了国外学者对于中国古昆虫学者所建立的4个新科提出的不同意见.     

浮霉菌门严格厌氧产氢细菌(Thermopirellula anaerolimosa)的分离及其生理特性

[目的]厌氧颗粒污泥中含有大量未知微生物资源,利用低浓度底物及添加抗生素的培养基进行厌氧发酵细菌的筛选,并对分离菌株进行生理生化特性研究.[方法]利用系列稀释法及亨盖特厌氧滚管技术从制糖废水厌氧处理反应器的颗粒污泥中分离到一株高温厌氧产氢细菌VM20-7T,通过16S rRNA基因序列同源性确定其系统发育地位.[结果]菌株VM20-7T为高温、严格厌氧、革兰氏阴性梨形细菌,细胞大小为(0.7-2.0)μm×(0.7-2.0) μm,不运动,不产芽胞.其生长温度范围为35℃-50℃(最适温度45℃),pH范围为6.0-8.3(最适pH7.0-7.5),NaCl耐受范围为0％-0.5％(w/v,最适浓度0％).菌株VM20-7T可利用葡萄糖、麦芽糖、核糖等多种糖类为唯一碳源生长,葡萄糖发酵终产物是乙酸和H2.该菌株不利用硝酸盐、硫酸盐等作为电子受体生长.G+C含量为60.9 mol％,16S rRNA基因序列同源性显示菌株属于浮霉菌门,但与已培养菌株的同源性较低,与梨形菌属一红小梨形菌属-芽殖小小梨形菌属(Pirellula-Rhodopirellul -Blastopirellula,PRB)分支的亲缘关系最近,但序列相似性也仅为82.7％-84.3％.[结论]利用低浓度糖类并添加抗生素分离厌氧颗粒污泥中的微生物,获得了浮霉菌门首例严格厌氧细菌VM20-7T.生理生化特性和系统发育分析显示,菌株VM20-7T为浮霉菌目的新属新种,命名为Thermopirellula anaerolimosa.该菌株的菌种保藏号为CGMCC 1.5169T=JCM 17478T=DSM 24165T.     

菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinesis）血浆中防卫素的纯化及其抑菌功能

经硫酸铵沉淀、凝胶排阻层析和离子交换层析 ,自菲律宾蛤仔 (Ruditapesphilippinnesis)血浆中分离纯化得到一种新的蛋白质———防卫素RPD 1(Ruditapesphilippinesisdefensin 1)。经SDS PAGE分析 ,其估计分子量为 2 4 .8kD ;经ABI4 73蛋白质自动测序仪测定 ,其N端部分氨基酸序列为AVPDVAFNAYG。在NCBI和EBI EMBL两个蛋白质数据库中未发现任何与该蛋白质有同源性的已知蛋白质。该蛋白质对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广谱抗性。对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)、枯草杆菌 (Bacillussubtilis)、四联微球菌 (Micrococcustetragenus)、大肠杆菌 (Escherichiacoli)、副溶血弧菌 (Vibrioparahaemolyticus)和鳗弧菌 (Vibrioanguillarum)的最小抑菌浓度分别为 9.6mg L、76 .8mg L、38.4mg L、76 .8mg L、19.2mg L和 19.2mg L。实验结果证明RPD 1为一种新的防卫素蛋白质。     

松材线虫携带一株荧光假单胞菌分泌毒素的初步研究

本文研究了离体情况下松材线虫携带的致病菌一株荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens GcM5-1A）在LB、NB和PD三种培养基中的毒性,以及产生的毒素对黑松（Pinus thunbergii）切根苗和悬浮细胞的效应。结果显示,菌体在LB和NB培养液的毒性较高,其中LB培养液的毒性最高,且培养液的pH值为7时比pH值为5时毒性高,而该菌EPD培养基中几乎不产毒。细菌培养液经硫酸铵分级沉淀,得到了主要含有50kDa蛋白的蛋白组分,该蛋白组分对黑松悬浮细胞和切根苗均有较高的毒性,并能改变黑松悬浮细胞细胞膜的透性,导致胞内可溶性糖和游离氨基酸外渗。     

微生物工程实验教学中培养学生综合素质的实践

介绍在微生物工程学实验过程中,采取多种手段,积极培养学生理论联系实际能力、独立性、自主性、创造性、责任心和团队合作精神等,为培养和提高学生综合素质和创新能力所做的一些改革与工作尝试。