CDC6靶向RNA干扰质粒载体的构建及生物活性鉴定

目的:构建小鼠CDC6基因的RNAi真核表达载体PGCsilencer TM u6/Neo/GFP/RNAi,观察其转染小鼠肝细胞前后CDC6的表达变化。方法:根据GenBank中CDC6的序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至PGCsilencer U6/Neo/GFP质粒中,通过测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至正常小鼠肝细胞中,用RT-PCR检测CDC6的mRNA的表达及用Western blot方法检测CDC6蛋白水平的表达,并比较转染前后其表达水平的变化。结果:经测序,模板序列与设计序列完全正确,经过RT-PCR及Western blot方法检测,转染干扰质粒后,小鼠肝细胞中CDC6表达在mRNA及蛋白水平都有明显的下降。结论:成功构建了CDC6基因的RNAi真核表达载体并转染至小鼠肝细胞中,为下一步探讨CDC6在肝再生的作用奠定了基础。     

肽-半乳糖苷-阿霉素脂质体在肝细胞癌靶向治疗中作用

目的:获得一种对肝细胞癌具有特异靶向的药物传递系统载体-聚乙二醇修饰的MMP-2底物肽-半乳糖苷-阿霉素脂质体(PEG-PD-Gal-ADM-liposomes),为临床肝癌的靶向治疗提供实验依据.方法:将二棕榈磷脂酰基乙醇胺(DOPE)与聚乙二醇化的MMP-2底物肽连接(Gly-Pro-Lcu-Gly-Ile-Ala-Gly-Gin),即获得可被MMP-2切割的聚乙二醇-底物肽-DOPE,再与半乳糖苷脂质体(Gal-liposomes)、阿霉素(ADM)耦合,最终获得聚乙二醇修饰的MMP-2底物肽-半乳糖苷-阿霉素脂质体(PEG-PD-Gal-ADM-liposomes),体外观察其对人肝癌细胞株HepG2的效应.结果:MTT法显示PEG-PD-Gal-ADM脂质体对人肝癌细胞株HepG2的毒性作用弱于半乳糖苷-阿霉素脂质体(PEG-Gai-ADM)的作用(P＜0.05),对人结肠癌细胞株SW480的毒性作用二者之间无显著差异;用MMP-2(5μg/ml)预处理后,PEG-PD-GaI-ADM脂质体对人肝癌细胞株HepG2的毒性作用与Gal-ADM脂质体的作用相近,无显著差异(P＞0.05);加入过量的半乳糖封闭半乳糖受体后,二者的毒性作用均有下降,无显著性差异(P＞0.05).结论:PEG-PD-Gal-ADM脂质体是一种新型的HCC特异靶向治疗药物传递载体,可能是将来HCC靶向治疗的重要手段.     

大鼠肝部分切除术后mTOR信号通路对肝再生的作用

目的:探讨mTOR信号通路对大鼠肝部分切除术后肝细胞蛋白质合成功能及肝细胞大小的影响。方法:采用Sprague-Dawley雄性大鼠70％肝切除模型和肝细胞分离与培养方法,在术后不同的时相点分离残肝的肝细胞,进行培养。实验分组:分离的残肝肝细胞分两组:对照组(Control组、C组)、雷帕霉素组(Rapamycin组、R组)。采用Western blot方法检测磷酸化mTOR蛋白在不同时相点的变化;采用3H-亮氨酸(3H-Leucine)掺入法测定肝细胞蛋白质合成;扫描电镜(AMRAY 1000B,US)获取肝细胞图像,病理图像分析系统(北航CM2000B)测定细胞面积。结果:1)C组中,磷酸化mTOR蛋白的含量由0h开始升高,6h达到高峰,以后即降低,而R组明显较C组含量降低;2)在术后的各时相点,C组的肝细胞的蛋白质合成率较R组显著升高(P<0．05),而且随时间点的延长,蛋白质合成率呈上升趋势;3)在2h和6h时相点C组肝细胞面积较R组显著增大(P<0．05)。但是,在C组肝细胞24h时相点面积较2h和6h减小(P<0．05)。结论:体外实验证实,肝部分切除术后mTOR信号通路即活化,促进肝细胞的蛋白质合成和细胞生长。因此,我们推测mTOR信号通路在肝再生过程中发挥重要作用。     

SOCS1与肿瘤发生、发展和治疗的研究进展

SOCS1是细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)蛋白家族的重要成员,近年来随着对SOCS1研究的深入,它的各种功能逐渐被发现。SOCS1的作用机制复杂,可以被体内多种细胞因子诱导,然后抑制下游的细胞因子和生长因子受体信号活化。SOCS1参与了体内多种急慢性炎症反应、先天性及获得性免疫反应、激素的调节以及多种肿瘤的生成和发展等,尤其是它与肿瘤的关系成为近期研究的热点。SOCS1基因目前被认为是一种新的抑癌基因,研究表明SOCS1基因甲基化、突变以及缺失导致的SOCS1表达减少在肿瘤的形成、发展过程中起重要作用。近年来对于恢复SOCS1的表达可以用来治疗肿瘤方面的研究逐渐增多,有些方法已经应用于临床,而且取得了一定的成果。本文就近年来SOCS1在肿瘤领域中的研究进展进行了综述。     

生长抑素联合常规化疗对晚期胰腺癌的疗效评估

目的:观察生长抑素联合常规化疗对晚期胰腺癌的临床疗效并评估其安全性.方法:收集2007年3月至2009年3月不能行手术切除的晚期胰腺癌55例,随机分成两组,即常规化疗对照组与生长抑素联合常规化疗组,检测治疗前后CA19-9、CEA水平、肝肾功能及血常规;分析和比较治疗有效率:治疗对肿瘤大小(实体瘤的疗效评价,RECIST标准),无进展生存期(ProgressFree Survival,PFS)、生存期和行体力状况评分的影响以及安全性评估.结果:治疗后生长抑素联合常规化疗治疗组血清CA19-9水平明显低于常规化疗对照组(P＜0.05),但CEA水平没有差异;疗程结束后联合治疗组客观有效率(OR)为60％,临床获益率(CR+PR+SD)为90％;常规组客观有效率(OR)为36％,临床获益率(CR+PR+SD)为76％;联合组客观有效率和临床获益率均明显高于常规组(P＜0.05).Karnofsky评分显示联合组提高率为36.67％(11/30);而常规组提高率为24.0 ％(6/25),联合组Karnofsky评分的提高率明显高于优于对照组(P＜0.05);联合化疗治疗组平均生存期、中位生存期分别为372.96± 34.20天、345.00± 30.50天,常规化疗对照组平均生存期、中位生存期分别为307.32±29.19天、290.00± 28.11天.结论:生长抑素联合化疗能明显降低CA19-9的水平;同时可提高临床疗效及患者术后生活质量及生存期,能够明显提高化疗药物的抗肿瘤活性,对于改善晚期胰腺癌的预后具有重要的临床价值.     

关于肝癌肿瘤标志物的最新研究进展

肝癌肿瘤标志物的研究有利于提高肝癌的早期诊断和预后的评估。到目前为止,已发现的肝癌肿瘤标志物很多,但其特异性和敏感性不足,限制了其在临床上的应用。本文就其近期出现的新的肿瘤标志物和一些潜在的肿瘤标志物作一综述。     

胆道镜结合微爆破碎石治疗复杂性胆道结石

目的：探讨微爆破碎石用于治疗复杂胆道结石的治疗体会。方法：在胆道镜直视下,分别在术中和术后对158例复杂的胆道结石患者进行微爆破碎石,然后用取石网取出碎石,泥沙状结石随液体流出或让其自行流入肠道。结果：158例患者156例取石成功。取石成功率98.73%。明显提高了胆道取石的成功率。无1例出现胆道穿孔、瘘道穿孔及胆道出血等严重并发症。结论：在胆道镜下,采用微爆破碎石术治疗复杂的胆道结石是一种安全、可靠、高效的方法,可以明显提高结石的取净率。     

腹腔镜胆囊切除术致医源性胆道损伤诊治体会（附4 例报告）

目的:探讨引起腹腔镜胆囊切除术所致的医源性胆道损伤的原因并探讨预防和处理措施。方法:回顾性分析2005年6月-2011年5月在我科收治的4例腹腔镜胆囊切除术致医源性胆道损伤患者的临床资料,并结合国内外文献进行讨论。结果:4例医源性胆道损伤患者经积极处理后,进行随访和结果评价,评价优良占75%。结论:引起腹腔镜胆囊切除术所致的医源性胆道损伤主要有医生主观因素和病人、医治条件的客观因素,积极预防和妥善处理能降低其发生率、改善预后。     

慢病毒介导的大鼠肝BRL-3A 细胞Tmub1 基因沉默及稳定感染细胞 系的建立

目的:构建Tmub1基因慢病毒干扰载体,建立稳定转染细胞系,检测大鼠肝BRL-3A细胞中Tmub1基因表达的干扰效果。方法:设计并构建4对针对大鼠Tmub1基因的特异性shRNA干扰质粒,酶切鉴定、DNA测序所得质粒。将由pRSV-Rev、pMDLg-pRRE、pMD2G和pll3.7干扰质粒组成的包装系统共转染293T细胞,产生慢病毒。所得慢病毒感染大鼠正常肝细胞BRL-3A,Western Blot检测不同靶点RNAi后Tmub1蛋白表达情况,确定有效靶点。针对有效靶点大量包装慢病毒。测定病毒滴度并以最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染BRL-3A细胞后,G418抗生素筛选稳定感染细胞系BRL-3A/256。RT-PCR和Western Blot检测各组细胞Tmub1 mRNA和蛋白质的表达差异。结果:结果显示Tmub1 RNAi慢病毒载体构建成功,C0020Sh2-Hops-256干扰靶点RNAi效果最强。成功包装Tmub1基因RNAi慢病毒,测定病毒滴度为2.3×108TU/ml,对293T细胞的最适感染复数为60。成功建立Tmub1 RNAi慢病毒载体稳定感染细胞系BRL-3A/256,且在该细胞系中Tmub1 mRNA和蛋白质表达明显降低。结论:成功构建Tmub1 RNAi慢病毒载体,有效干扰BRL-3A细胞中Tmub1 mRNA和蛋白表达;成功筛选出Tmub1RNAi慢病毒稳定感染细胞系BRL-3A/256。     

辐射诱导对犬胆管平滑肌细胞凋亡中BCL-2活性的影响

目的:探讨γ射线对BCL-2基因在犬胆管壁增殖平滑肌细胞凋亡中的活性影响。方法:实验犬24只(15～18kg),随机分为普通支架组和~(125)I支架组各12只。用切断吻合法,造成胆总管损伤。术后30天胆道狭窄形成后,分组将普通支架及125I支架从胆总管末端开口处释放到胆总管内。置入支架后60d分别行病理形态学检测,用免疫组织化学方法进行凋亡细胞,BCL-2蛋白基因检测,并用计算机图像检测系统检侧两组胆管腔面积。结果:~(125)I支架组犬胆管组织中BCL-2基因表达较普通支架组减弱,且BCL-2基因低表达组犬胆管出现明显增殖平滑肌细胞凋亡,而且犬肝外胆管无明显狭窄;而普通支架BCL-2基因高表达,且犬胆管未出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,而且犬肝外胆管有明显狭窄。结论:~(125)I放射性支架通过抑制BCL-2基因,促进犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡,可以抑制犬肝外胆管狭窄。