免疫检查点程序性细胞死亡蛋白配体-1翻译后修饰及其在免疫治疗中的应用前景

免疫检查点程序性细胞死亡蛋白配体-1（programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1）是一种主要表达于肿瘤细胞表面的免疫抑制性分子,其可与T淋巴细胞表面的程序性细胞死亡蛋白-1（programmed cell death protein 1,PD-1）结合,抑制T淋巴细胞的激活,发挥免疫抑制性功能。基于这一原理所开发的PD-1/PD-L1免疫阻断疗法,已在临床广泛应用于多种实体瘤的治疗,使诸多病人受益。与此同时,随着对PD-L1调控机制研究的深入,PD-L1的多种翻译后修饰形式陆续得到了鉴定,包括糖基化、磷酸化、泛素化和棕榈酰化等。研究表明,这些翻译后修饰过程可影响PD-L1的蛋白质稳定性与生理功能。因此,翻译后修饰成了PD-L1研究新的切入点。目前,PD-L1翻译后修饰靶向药物已在免疫治疗中展现出良好的应用前景。通过靶向PD-L1翻译后修饰过程,进而调控由PD-L1介导的肿瘤免疫逃逸,成了提高免疫治疗应答率的新思路和新策略。本文将对PD-L1翻译后修饰的研究进行系统总结,并陈述其在免疫治疗领域中的应用前景,希望为未来针对PD-L1翻译后修饰的研究提供理论支持。     

基于CRISPR/Cas9技术的基因敲入/敲除策略

成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥有多种类别。其中,CRISPR/Cas9系统是研究最深入、应用最成熟的一种。本文针对CRISPR/Cas9系统,分别从基因敲入/敲除片段的大小、同源臂长短、构型即递送方式等技术环节进行综述,阐述不同设计及操作条件下由CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入/敲除的效率差异。     

核酸检测技术进展及其在SARS-CoV-2核酸检测中的应用

2020年初至今，新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情仍在全球多个国家流行，给全球公共卫生安全造成了严重威胁.中国在应对COVID-19的实践中，最先完成病毒核酸测序并共享序列信息，最早有效控制疫情蔓延、恢复生产，并在病毒作用人体机制研究、疫苗研发、中和性抗体发现等环节均处于世界前沿. 其中，针对病毒核酸的检测工作——试剂盒研发、检测配套设备研制、10合1混检策略及相关政策制订，有效提高了疫情防控效率、保障了百姓健康. 本文就严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（SARS-CoV-2）核酸检测多种方法的原理、优劣势及其配套设备等进行综述.     

人绒毛膜癌细胞JEG-3中SEPSECS、TRNAU1AP蛋白表达稳定性的分析

目的:通过测定人绒毛膜癌细胞JEG-3中SEPSECS、TRNAU1AP两蛋白的半衰期,分析JEG-3细胞内SEPSECS、TRNAU1AP两蛋白表达的稳定性.方法:采用蛋白合成抑制剂放线茵酮作用于人绒毛膜癌细胞JEG-3,用MTT法确定放线茵酮对细胞的最适作用浓度,之后用最适浓度的放线菌酮处理JEG-3,利用Western b1ot检测10个时间点SEPSECS、TRNAU1AP蛋白表达量,确定SEPSECS、TRNAU1AP蛋白半衰期.结果:CHX作用于细胞的最适浓度为0.1μg/mL,与对照组相比,SEPSECS蛋白表达量在4h、8h有显著性差异(P＜0.01);而TRNAU1AP蛋白表达量在2h、4h有显著性差异(P＜0.01).结论:在JEG-3细胞中SEPSECS蛋白的半衰期可能为4h～8h,而TRNAU1AP蛋白的半衰期可能为2h～4h,前者半衰期明显大于后者,由此,可推测SEPSECS蛋白在JEG3细胞中表达的稳定性要高于TRNAU1AP蛋白,同时也为进一步分析二者在其他肿瘤细胞的表达情况提供依据.     

miR-30b 的组织特异性研究

目的:研究miR-30b的组织特异性,检测其在心,肝,脑,肾,脾和骨骼肌中的表达情况。方法:选取C57BL/6J雄性小鼠6只,用real-time PCR方法检测小鼠心,肝,脑,肾,脾和骨骼肌中miR-30b的表达量。结果:miR-30b在小鼠肝脏中表达量最低,与肝相比,在心,脑,肾,脾和骨骼肌中的相对表达量分别为13.13±0.899,9.497±0.717,4.478±1.031,6.751±0.596,2.538±0.79。且与肝相比均具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-30b在各组织中的表达存在差异,在心脏中的表达量最高,提示miR-30b可能与心脏的发生发展密切相关,为深入探索miR-30b的功能奠定了基础。     

低硒心肌损伤与钾离子通道蛋白的关系研究

目的:心肌上的离子通道蛋白与心肌损伤有很大的关系,本研究通过低硒喂养对C57BL/6小鼠心肌组织损伤的影响及其对钾通道蛋白的改变。方法:将实验小鼠分为4组:对照组,低硒30天组,低硒90天组和低硒180天组。采用低硒饲料(硒含量0.0045μg/g)喂养的方法建立低硒小鼠模型,对照组给予正常饲料(硒含量0.256μg/g),与低硒组同时喂养;硒含量的测定和HE染色方法观察心肌损伤情况,Western Blotting方法检测其钾通道蛋白的表达。结果:低硒饲料喂养小鼠的心脏硒含量与正常饲料喂养的硒含量相比明显降低(P0.01);并出现轻微的心肌损伤,钾通道蛋白的表达量在低硒30天组,低硒90天组和低硒180天组下调(P0.01)。结论:成功建立低硒小鼠模型,低硒能引起小鼠心肌损伤,这种改变可能有心脏的钾通道蛋白的表达水平有关。     

天然牛黄对MODS大鼠保护作用的实验研究

目的:肠道内的消化酶在MODS发生发展过程中起着关键的作用,有研究发现非结合型胆红素可以灭活胰蛋白酶和糜蛋白酶.基于非结合型胆红素对消化酶的灭活作用,本研究主要探讨非结合型胆红素含量丰富的天然牛黄对多器宫功能障碍综合症大鼠的保护作用.方法:通过腹腔注射无菌石蜡酵母多糖混悬液的方法制作MODS大鼠模型.观察天然牛黄对MODS大鼠的生理状态,生命体征,血气分析,多指标系列生化检测,二胺氧化酶水平,以及心肺肝肾重要脏器病理组织学检查的变化及影响.结果:天然牛黄治疗纽大鼠生命体征,血气分析结果,生化指标,血清DAO水平与MODS模型纽比较,体温、心率、呼吸检测结果显著降低;pH、PaO2、SO2、AB、BE值升高,PaCO2值降低;LDH、ALT、Cr值减少;DAO水平降低,均有显著差异(P＜0.05),且心肺肝肾等组织病理变化也有明显改善.结论:天然牛黄能明显恢复石蜡酵母多糖混悬液造模方法引起的MODS大鼠生理状态,生命体征,能有效改善MODS大鼠脏器功能及病理形态,对MODS大鼠具有脏器保护作用.其机制可能是非结合型胆红素灭活消化酶所致,待进一步研究.     

SIK1作为miR-93新的靶基因抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

该文探讨了SIK1作为miR-93新的靶基因对前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。采用重组质粒pcDNA3.1-SIK1上调前列腺癌细胞中SIK1的表达后,利用CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖;利用细胞划痕和Transwell实验检测细胞侵袭和迁移;利用Western blot检测E-cadherin和Vimentin的蛋白表达。采用生物信息学方法预测靶向SIK1 mRNA的3’UTR的miRNAs并进行筛选;双荧光素酶报告实验和Western blot验证miR-93靶向调控SIK1。结果显示,上调SIK1的表达能抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并增加E-cadherin和减少Vimentin蛋白表达;miR-93能够靶向负调控SIK1。总之,SIK1可作为miR-93一个新的靶基因抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移。