分子生物学技术在中药鉴定中的应用及探讨

对PCR及其延伸技术在中药鉴定中的应用作了总结,对该方法的优势和注意事项作了说明,并对该技术在中药品种和质量鉴定中的应用前景作了展望。     

D-乳酸高产菌菊糖芽胞乳杆菌Y2-8磷酸果糖激酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

以D-乳酸高产菌菊糖芽胞乳杆菌Y2-8基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到960 bp的磷酸果糖激酶基因(pfk)。氨基酸序列比对分析表明,该磷酸果糖激酶(PFK)与其他乳酸菌PFK具有保守的底物结合位点,但是其变构效应物结合位点存在差异。将pfk基因克隆到表达载体pSE380上,获得重组菌E-pSE-pfk。进一步通过诱导条件的优化,重组菌的PFK比酶活达到4.89 U/mg,是优化前的4.79倍。采用低温诱导策略有助于实现菊糖芽胞乳杆菌pfk基因在大肠杆菌中可溶性表达。     

重组蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中高效表达的影响因素

高效表达重组蛋白 ,对于生物制药意义重大。大多数药用蛋白是糖蛋白 ,中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell,CHO)是目前重组糖基蛋白生产的首选体系。影响外源蛋白在CHO细胞中表达的因素很多 ,从CHO细胞表达体系、表达载体系统、外源基因、表达细胞株的加压扩增与筛选、细胞大规模培养等方面对CHO高效表达加以阐述 ,同时提出存在的问题和未来的发展方向。     

hsBLyS基因在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其在免疫小鼠中诱发的抗体反应

为建立稳定表达人可溶性B淋巴细胞刺激因子(hsBLyS)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,从人胎盘cDNA文库中扩增hsBLyS基因,将人红细胞生成素(EPO)信号肽序列和hsBLyS基因重叠延伸为融合基因;融合基因分别插入pcDNA3、pcDNA3.1、pEFneo质粒;磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSVdhfr,共转染CHOdhfr细胞;选择培养液筛选,经氨甲喋呤选择压力扩增表达,获稳定表达hsBLyS的细胞系,表达量由0.13μg/ml上升至0.55μg/ml;同时利用pEFneo/hsBLyS重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测结果表明小鼠产生hsBLyS的特异性抗体。本实验建立了稳定表达hsBLyS的CHO细胞系,对其基因免疫小鼠抗体产生的特点做了初步探讨,为hsBLyS进一步研究奠定了良好的基础     

课堂教学引入PBL教学法利于学生综合能力的培养

目的:探讨应用以问题为中心的教学法(problcm-basedlearning,PBL)在病理学课堂教学中的作用.方法:采用PBL教学法与传统教学方法相结合的教学方式.结果:调查结果显示:PBL教学法应用后的教学效果获得上课学生的普遍认可,PBL教学法可激发学生的学习兴趣,培养学生的自学能力、分析问题和解决问题的能力以及与他人合作的能力,深化和延伸了课堂教学.结论:PBL教学法应用在病理学课堂教学是行之有效并且切实可行的,并且有利于学生综合能力的培养.     

地龙生物活性部位经膜分级分离后降压作用的比较研究

以新鲜红地龙的匀浆液为分离对象,对分离条件进行研究,采用不同孔径的聚偏氟乙烯膜进行超滤,对超滤液进行降血压活性的测定。研究经聚偏氟乙烯（PVDF）膜分级分离后地龙匀浆液产物的降血压活性。发现随着分子量的降低,膜分离产物的血管紧张素转换酶（ACE）抑制活性逐渐增大,以4000膜滤过液达到最大。证明在合适条件下以聚偏氟乙烯膜分离地龙匀浆液,能得到降血压活性高的活性部位。     

痒觉信号通路与相关受体研究进展

痒是一种引起机体产生抓挠欲望的不愉快感觉．与疼痛一样,痒觉也是机体的一种自我防护反应,可以促使机体及时避免有害刺激,但持续较长时间的慢性痒往往是一种病理性特征,严重影响人的生活质量．目前已发现两条痒觉传导通路,组胺依赖的信号通路和组胺非依赖的信号通路．组胺、阿片类物质、大麻素、一些肽类物质及氯喹均可刺激相关受体诱导痒觉产生．痒觉产生的机制,有多种学说,比较有影响的是选择性学说和特异性学说．本文综述了近年来痒觉信号通路及其相关受体的研究进展．     

干细胞共培养技术在医学研究中的应用

细胞共培养技术是20世纪70年代后期发展起来的将不同种类、不同来源的细胞在同一个体系中进行培养、增殖的技术,该技术的诞生至今已经历了三十多年的时间,在共培养的细胞种类、共培养条件、共培养方法等方面均取得了很大的进展。其中,将骨髓间充质干细胞与其他种类细胞共培养,以诱导骨髓间充质干细胞定向分化的研究最为常见。该文对在神经、骨关节、心血管等系统疾病的替代治疗中有重要价值的共培养研究—骨髓间充质干细胞与不同种类的体细胞共培养作了重点介绍,以期为今后的工作提供借鉴和帮助。     

痛觉相关钠离子通道研究进展

疼痛是一种与组织损伤或潜在的损伤相关的不愉快的主观感觉和情感体验,是机体受到伤害性刺激后产生的一种防御反应。伤害性感觉神经元细胞膜上的电压门控钠离子通道是细胞表面一类跨膜糖蛋白,负责可兴奋细胞动作电位的产生和传导,并且在炎性痛、神经病理性疼痛和功能性痛的产生、传导以及维持上起到了重要的作用,成为近年来疼痛病理生理机制研究和疼痛治疗的分子靶标。本文将就痛觉相关钠离子通道的类型,结构,及其表达和功能的改变与疼痛的关系进行综述。     

麦冬不同提取物对过氧化氢损伤人血管内皮细胞ICAM-1、VEGF、Bcl-2表达的影响

目的：观察麦冬不同提取物对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）间黏附分子-1（ICAM-1）和VEGF、Bcl-2表达的影响。方法：体外培养HUVEC,用过氧化氢（H2O2）制造HUVEC损伤模型。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活数量,用流式细胞仪检测HUVEC表面ICAM-1的表达量;免疫细胞化学方法检测HUVEC的VEGF、Bcl-2的分布情况。结果：模型组较正常对照组细胞增殖活性明显降低（P〈0．01）。与模型组相比,经麦冬水提物、正丁醇提取物处理组细胞增殖活性明显增加（P〈0．05,P〈0．01）。流式细胞仪检测显示正丁醇提取物可降低过氧化氢增加的ICAM-1基因的表达。Bcl-2的表达,模型组明显低于正常对照组,而正丁醇组表达明显高于模型组（P〈0．01）。VEGF的表达,模型组明显高于正常对照组,麦冬水提物、正丁醇提取物处理组高于模型纽（P〈0．05,P〈0．01）。结论：麦冬提取物具有抗凋亡、促增殖、降低细胞间黏附分子-1表达的作用,尤以正丁醇提取物效果更为显著。