动物细胞无血清培养基的应用及研究进展

使用无血清培养基除了避免生产批间差异、不利于目的蛋白的分离纯化和产业化时难以建立SOP以外;优化的无血清培养基可通过延长细胞的G1期或迫使细胞处于G0期而使较长时间地维持细胞高密度培养,高效地生产目的产物;还可以避免衰老死亡细胞释放的蛋白酶降解目的产物。应用CHO细胞无血清悬浮培养技术,使活细胞密度达到1×107cell/m1水平以上,与传统的批式培养相比产物浓度提高5—10倍,相对应的培养基成本明显下降。     

重组蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中高效表达的影响因素

高效表达重组蛋白 ,对于生物制药意义重大。大多数药用蛋白是糖蛋白 ,中国仓鼠卵巢细胞 (Chinesehamsterovarycell,CHO)是目前重组糖基蛋白生产的首选体系。影响外源蛋白在CHO细胞中表达的因素很多 ,从CHO细胞表达体系、表达载体系统、外源基因、表达细胞株的加压扩增与筛选、细胞大规模培养等方面对CHO高效表达加以阐述 ,同时提出存在的问题和未来的发展方向。     

hsBLyS基因在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其在免疫小鼠中诱发的抗体反应

为建立稳定表达人可溶性B淋巴细胞刺激因子(hsBLyS)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,从人胎盘cDNA文库中扩增hsBLyS基因,将人红细胞生成素(EPO)信号肽序列和hsBLyS基因重叠延伸为融合基因;融合基因分别插入pcDNA3、pcDNA3.1、pEFneo质粒;磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSVdhfr,共转染CHOdhfr细胞;选择培养液筛选,经氨甲喋呤选择压力扩增表达,获稳定表达hsBLyS的细胞系,表达量由0.13μg/ml上升至0.55μg/ml;同时利用pEFneo/hsBLyS重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测结果表明小鼠产生hsBLyS的特异性抗体。本实验建立了稳定表达hsBLyS的CHO细胞系,对其基因免疫小鼠抗体产生的特点做了初步探讨,为hsBLyS进一步研究奠定了良好的基础     

蚯蚓提取物对小鼠肿瘤动物模型的研究

目的 :研究蚯蚓提取物 (EFE)的免疫活性及抗肿瘤作用。方法 :采用小鼠移植性肿瘤S1 80 肉瘤及Heps肝癌的动物模型观察其肿瘤抑制作用。结果 :EFE对S1 80 肉瘤和Heps肝癌细胞的抑制率分别为 36 97%和 4 8 55% ;结论 :它对小鼠实体瘤细胞有明显的抑制作用 (P <0 0 1 )并提示对小鼠的细胞和体液免疫功能有显著增强作用。     

人红细胞生成素工程细胞株的特性鉴定

目的：为了对人红细胞生成素工程细胞株(F10—6)进行特性鉴定。方法：将人红细胞生成素基因构建的重组表达质粒pCDB与标志质粒pSV—dhfr共转染CHO-dhfr^-细胞中,经氨甲喋呤加压筛选和亚克隆挑选,获得高效稳定表达EPO的工程细胞株并对其进行鉴定。结果：实验结果表明,工程细胞株无细菌、支原体、真菌和病毒污染;并无致瘤性;染色体数目不变;连续传代50次和三次冻存复苏后,细胞表达稳定。结论：该工程细胞株可用于工业化生产。     

制备磷酸化抗体结合反相蛋白阵列探测细胞通路模型信号

通过制备、鉴定与筛选可靠应用于反相蛋白阵列(reverse-phase protein array,RPPA)的磷酸化抗体作为探针,建立LNCa P细胞中Akt、Erk/MAPK通路在4种方式(EGF、LY294、PMA、Na Cl)刺激下信号变化的细胞通路模型,利用RPPA技术探测细胞通路模型的信号。结果获得4组细胞通路模型的RPPA测定数据及25个RPPA适用性的磷酸化抗体探针。4组模型结果均显示了通路中关键信号分子响应于4个外部扰动的磷酸化状态的动态变化。RPPA结果数据与相应的免疫印迹法(Western blot)分析结果一致,证实了分析数据的有效性与可靠性。结果表明,所制备磷酸化抗体探针与RPPA平台结合,极适合于分析细胞信号通路模型。该方法能够有效地拓展RPPA探针范围,使其成为新药开发、临床样本分析等领域的先进工具。     

抗菌肽的分子生物学研究进展

抗菌肽的分子生物学研究进展胡云龙赵学忠屈贤铭＊（南京军区军事医学研究所）一、引言昆虫在动物界中所占的数量最多,分布最广,并且有高度的适应能力和防御机能,在昆虫免疫防御体系中,没有抗体、补体的参与,但却有一系列称之为抗菌肽的小分子蛋白。早自１９世纪Ｐａ...     

人红细胞生成素基因在小鼠体内的转移与表达

将人的红细胞生成素(EPO)基因克隆在CMV启动子的下游,构建EPO表达质粒,在BHK₂₁细胞中表达成功后,将该质粒经脂质体包埋,再导入到小鼠的骨骼肌内,在体内亦获得了表达,一个月时小鼠血浆中人红细胞生成素的表达量高达1 340 ng/L,这为贫血病人的基因治疗提供了科学依据.     

不同听力曲线分型突发性耳聋患者听阈水平及临床特征分析

摘要 目的：探讨不同听力曲线分型突发性耳聋患者听阈水平及临床特征分析。方法：前瞻性选取我院2019年10月至2022年10月我院收治的80例突发性耳聋患者作为研究对象。采集患者临床特征信息。检测所有患者听阈水平。采用秩和检验进行多组间差异分析;采用Spearman检验进行相关性分析;采用多元线性回归模型进行回归分析。结果：平坦下降组、低频下降组、高频下降组和全聋组在侧别、性别、糖尿病、耳鸣、眩晕、耳闷胀感亚组间差异显著（P<0.05）,而在年龄、高血压和脑梗塞亚组间无显著差异（P＞0.05）;平坦下降组、低频下降组、高频下降组和全聋组在极重度、重度、中度、轻度、正常亚组间差异显著（P<0.05）;突发性耳聋患者听力曲线分型与侧别、性别、糖尿病、耳鸣眩晕、耳闷胀感、听阈水平密切相关（P<0.05）,而与年龄、高血压、脑梗塞无关（P＞0.05）;多元线性回归结果显示,耳鸣、眩晕、耳闷胀感、听阈水平、侧别是影响突发性耳聋患者听力曲线分型的独立危险因素（P<0.05）。结论：突发性耳聋不同听力曲线分型患者间存在临床特征及听阈水平的差异,临床可依据患者独特疾病特征构建精准的治疗策略进行干预。