Arg77和Glu80定点突变同时去除葡激酶中的T和B细胞抗原表位

【目的】对葡激酶的T和B细胞抗原表位重叠的关键氨基酸Arg77和Glu80进行定点突变以降低葡激酶的免疫原性。【方法】基于Arg77和Glu80的溶剂可及表面积设计葡激酶的突变体;突变体在大肠杆菌DH5α中进行表达。经过三步层析法纯化后,分析突变体的纤溶活性和免疫原性。【结果】免疫学实验提示,葡激酶导致Th2免疫反应;Glu80突变为丙氨酸和丝氨酸减少了溶剂可及表面积,同时去除了部分T和B细胞抗原表位;Arg77突变为天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸仅去除了部分T细胞抗原表位;6个组合突变体中,Sak(R77Q/E80A)和Sak(R77Q/E80S)有效去除了部分B和T细胞抗原表位,降低了葡激酶的免疫原性;Sak(R77Q/E80A)and Sak(R77Q/E80S)的纤溶活性和催化效率与r-Sak相当。     

具有抗血小板聚集功能的新型葡激酶突变体的表达、纯化及性质

[目的]为解决溶栓后再栓塞问题,构建N-端含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的葡激酶双功能突变体.研究突变体的表达和纯化,并进行性质分析.[方法]将突变后的葡激酶突变体序列连入pBV220质粒,转化大肠杆菌BL21进行表达.阳离子交换、凝胶过滤和阴离子交换三步层析法纯化表达产物,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定,并测定纯化产物对血小板聚集的抑制效应.[结果]PAGE扫描结果显示,葡激酶突变体蛋白在大肠杆菌BL21中的表达量约占菌体蛋白总量的40%～50%;三步层析纯化后,HPLC测定其纯度可达95%.酪蛋白凝胶板溶圈法测得其比活性分别为10.8×104和11.0×104HU/mg,与野生型葡激酶活性相当;且具有明显的抗血小板聚集活性,血小板聚集仪测定其血小板聚集抑制率分别为10.72%和19.71%,明显高于野生型葡激酶血小板聚集抑制率.本实验利用pBV220载体高效表达了葡激酶突变体基因,得到了高纯度、高活性的突变体蛋白,为葡激酶生产产业化和临床应用奠定了良好的基础.     

人脐带血间充质干细胞体外分离培养及生物学特性研究

目的:探讨并建立稳定可靠的人脐带血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCBMSCs)体外分离和培养方法.方法:采用密度梯度离心法分离脐带血单个核细胞,利用MSC易黏附塑料贴壁生长的特性,分离MSC并进行体外扩增培养,观测其形态学特征,绘制不同代数hUCBMSC生长曲线,流式细胞技术检测细胞表面标志物CD29、CD34、CD105、HLA-DR等表达情况.结果:本法可成功、可靠地在体外自hUCB中分离培养出粘附细胞,该细胞在体外培养呈梭形或成纤维样,其指数生长倍增时问约为36h,其细胞表面表达β1整联蛋白CD29、CD105(endoglm),不表达造血细胞标志物CD34以及HLA-DR.结论:人脐带血中存在问充质干细胞,采用优化的实验方法可以提高培养成功率,稳定获得MSC并体外扩增培养.人脐带血可以作为获得间充质干细胞稳定充足的来源.     

虫草多糖治疗家犬夹闭肾动脉引起的急性肾衰

探讨了虫草多糖对家犬夹闭肾动脉造成的急性肾衰的治疗作用。将实验动物家犬分为假手术组、阴性模型组、阳性组、虫草多糖高、中、低三个剂量组,观察治疗后犬的肾功能、血液生化指标、尿常规、肾脏病理的变化。发现虫草多糖组肾功能受损程度明显轻于阴性模型组（P〈0．01）,肾脏病理损伤明显减轻。实验证明虫草多糖能够治疗肾缺血诱发的急性肾功能衰竭,其机理可能与改善肾功能、增加肾血流量、纠正代谢紊乱、促进肾小管的修复与再生等作用有关。     

接瓣兰的离体快速繁殖

1植物名称接瓣兰[Zygopetalum maculatum （Kunth）Garay],又名轭瓣兰。 2材料类别种子。 3培养条件种子萌发培养基：（1）1／2MS＋100mL·L^-1椰子乳＋1g．L^-1活性炭;（2）VW＋100mL·L^-1椰子乳＋1g．L^-活性炭。原球茎或类原球茎增殖培养基：     

微波诱变结合底物类似物选育恶臭假单胞杆菌

利用微波辐照恶臭假单胞菌进行诱变处理,结合底物类似物的筛选方法,结果选育到一株产海因酶和N-甲酰基水解酶的高酶活菌株MW303;高效液相色谱(HPLC)分析结果显示:该菌的总酶活由0.218升高至0.612,提高了280.73%。     

人工环境下棘胸蛙(Paa spinosa)繁殖期的行为谱及活动节律

2007年4月,利用红外线摄像设备记录人工环境下的棘胸蛙行为活动,采用扫描取样法和目标动物取样法对录像资料进行分析,对人工环境下棘胸蛙的个体行为和活动节律进行了研究。结果表明：人工环境下的棘胸蛙行为主要包括静止行为（休息、对视）;社会行为（打斗、追逐）;运动行为（游泳、呜叫、跳跃）;捕食行为;繁殖行为（求偶呜唱、侵占、驱赶、撕咬,摔跤、抱对、错抱、拒绝行为、产卵）等。日变化规律变化表明：棘胸蛙的静止行为占了多数,其余多数行为集中在夜间,在凌晨03：00～05：00间出现一个最高峰,与此不同的是棘胸蛙的打斗行为在白天06：00～07：00、08：00～09：00、11：00～12：00多次出现高峰,而在夜间17：00～24：00打斗行为时间分配很少。呜叫行为在06：00—07：00,13：oo～14：00出现两个高峰,而在夜间17：00～01：00鸣叫行为时间分配很少。棘胸蛙的繁殖行为也主要发生在夜间,在凌晨02：30—04：30为高峰,其间抱对行为占到67％,其次为摔跤17％,撕咬15％,而其余所占很少。在行为描述的基础上,对棘胸蛙的有关行为机制进行了探讨。     

川芎嗪对PC12细胞氧糖剥夺后细胞内抗超氧阴离子能力和过氧化氢的影响

目的:探讨川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对PC12细胞氧糖剥夺/复氧复糖损伤后细胞内抗超氧阴离子能力和过氧化氢(H2O2)的影响.方法:建立PC12细胞氧糖剥夺(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)模型,复氧复糖给予不同浓度(0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56、5.12、10.24 μmol/L)的川芎嗪,培养24 h后行MTT和LDH的检测.采用四甲基偶氮唑(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)比色检测细胞生存率,并检测细胞内抗超氧阴离子能力和过氧化氢.结果:氧糖剥夺可明显降低PC12细胞活性(55.05％),而川芎嗪可以显著提高PC12细胞活性,其作用呈现一定的剂量—效应相关性.复氧复糖后给予0.16 μmol/L川芎嗪可以提高PC12细胞的活性到75.38％.氧糖剥夺/复氧复糖后6h、24h,TMP组(川芎嗪组)抗超氧阴离子能力明显高于OGD组(模型组)(P＜0.05),而H2O2的含量TMP组明显低于OGD组(P＜0.05).结论:川芎嗪可能提高抗超氧阴离子能力,减少H2O2的产生,从而减轻PC12细胞氧糖剥夺/复氧复糖损伤,具有较好的治疗作用.     

土地利用变化影响下洞庭湖地区生态系统服务价值的时空演变

对洞庭湖地区多年遥感影像进行解译,结合其经济发展统计数据,在地理信息系统技术支持下,估算各土地利用类型的生态价值系数,并运用空间自相关、高地聚类及热点分析等空间地统计分析方法,探究洞庭湖地区生态系统服务价值(ESV)的时空变化特征.结果表明: 2000—2013年间,洞庭湖地区的ESV小幅上升,由3868.39亿元上升至3886.62亿元,湿地面积的增加是ESV上升的主要原因;洞庭湖地区的ESV高值区与低值区相互溶解渗透,次高值区对高值及低值区呈包围态势;洞庭湖地区的ESV及其动态演化表现出明显的空间自相关与高低值聚集现象,但其自相关与聚集程度趋于减弱;研究期间洞庭湖地区的ESV热点区重心主要向西稍偏北方向移动,其轨迹大体上呈 “S”型态势,迁移速度缓慢但具有明显的阶段性,经历了 “剧烈—缓慢—剧烈”的变化阶段.