坚强芽胞杆菌主要分泌蛋白的鉴定及其分泌性序列

[目的]坚强芽胞杆菌是一种在自然界普遍存在的益生菌,在对虾养殖中应用较为广泛.为了研究其分泌性蛋白从而为分泌性载体的构建提供理论依据,本文对坚强芽胞杆菌的主要分泌蛋白进行质谱鉴定及分泌性序列的分析.[方法]从本实验室分离保存的1株来自对虾肠道的坚强芽胞杆菌(Bacillus firmus)培养液中获取了分泌性蛋白,进行SDS-PAGE,并对表达量较高的3条蛋白区带进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定及克隆测序,进行生物信息学分析.[结果]鉴定出的蛋白分别是坚强芽胞杆菌几丁质酶(chitinase)、坚强芽胞杆菌肠毒素A(enterotoxin A)和坚强芽胞杆菌BCG9842蛋白(hypothetical protein BCG9842).经在线软件SignaIP 3.0分析,确定chitinase、enterotoxin和BCG9842均存在不同的分泌性信号肽序列bf-43、bf-37和bf-16,通过在线软件PSORT分析表明,bf-43定位于细胞的外膜上,bf-37和bf-16定位于细胞的胞外.[结论]本研究鉴定出了坚强芽胞杆菌的3个主要分泌性蛋白,分析筛选出了3条分泌性序列,为分泌性载体的构建提供理论依据.     

ROMA在卵巢上皮性癌早期诊断中的研究进展

卵巢上皮性癌(Epithelial ovarian cancer,EOC)死亡率居妇科恶性肿瘤首位,早期诊断可明显改善患者预后。人附睾上皮分泌蛋白(human epididymis protein 4,HE4)对早期EOC的检测敏感性高,有助于对EOC高危患者的筛选,与CA125可互补,增加盆腔包块患者中EOC早期诊断力度。HE4与CA125联合检测及结合绝经状态预测盆腔包块患者中卵巢恶性肿瘤的发病风险模型(Risk of Ovarian Malignancy Algorithm,ROMA),能成功预测盆腔包块患者中EOC高风险个体,对卵巢良恶性肿瘤的鉴别预测更为准确且更易被接受,有较大的临床应用价值。     

兰州市门诊病人人乳头瘤病毒（HPV）感染与宫颈病变相关性分析

目的：了解兰州市门诊病人人乳头瘤病毒（HPV）感染情况、年龄分布及与宫颈病变相关性,免疫组化法测不同宫颈病变组中P16表达,了解P16在筛查宫颈癌及其癌前病变中的作用。方法：收集兰州市2009年10月至2011年3月782例门诊女病人,核酸分子快速导流杂交基因芯片技术（HyBrimax）对宫颈脱落细胞行HPV分型检测,分析门诊病人中HPV感染状况及年龄分布。部分细胞学异常或高危HPV阳性者阴道镜下宫颈活检,病理检查宫颈病变程度及与HPV感染相关性,免疫组化法检测宫颈组织中P16蛋白表达情况。结果：兰州市门诊782例病人中,HPV阳性率28.64%（224/782）,21种亚型检测出17种,排在前5位亚型分别为HPV16、HPV58、HPV68、HPV52、HPV33,各年龄组间HPV感染差异有统计学意义（P〈0.05）,21-30岁之间感染占37.42%。117例病检组织中,HPV在正常/炎症、CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、ICC组中阳性率分别为35.55%、65.60%、88.46%、100%,各组间HPV感染差异有统计学意义（P〈0.01）,同时P16表达依次增高,阳性率分别为22.22%、56.25%、84.61%、100%,组间差异有统计学意义（X2=36.124,P=0.001）。结论：兰州市门诊病人HPV感染阳性率为28.64%,各年龄组间感染差异有统计学意义,随宫颈病变加重,HPV检出率及P16蛋白表达均增高,二者联合检测有助于早期诊断及治疗。     

人附睾蛋白4 在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是严重威胁女性健康的恶性疾病之一。糖类抗原125(carbohydrate antigen125,CA125)是目前临床上广泛用于诊断卵巢上皮性癌的肿瘤标记物,然而其缺乏敏感性和特异性,因此,迫切需要寻找一种新的标志物来提高卵巢癌的诊断。人附睾蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)是近年发现的肿瘤标志物,其在良性肿瘤和正常组织中含量极低,但在卵巢癌中高表达。本文就HE4在卵巢癌中的诊断,动态监测等方面的进展做一综述。     

对虾白斑综合症病毒重组cDNA克隆的构建与分析

取经人工注射感染了对虾白班综合症病毒40-45h的凡纳对虾鳃组织,分离mRNA,以mRNA为模板合成双链cDNA,并克隆于PUC质粒的Not I/Sal I位点,构建了1000余株对虾感染后期鳃细胞的重组cDNA克隆,重组质粒经PCR鉴定插入片段,DNA斑点杂交分析目的片段,测定了20株对虾白斑综合症病毒的重组cDNA克隆的末端DNA序列,并对其进行了包含存在的开放阅读框架,启动区上游序列、编码产物的特性等分析。结果显示,PCR产物在0.3-1.6kb之间;大于1kb的克隆中有31.8%的克隆为白斑综合症病毒的重组cDNA克隆。已测序的不包含同源序列的13株克隆中含有14个开放阅读框,其中11个上游可检出启动子基序,4个可检出启动子调制元件,ORF转译产物的特性基序分析显示,有2个ORFs可检出锌指基序,3个ORFs可检出亮氮酸拉链基序,2个ORFs可检出NTP结合基序,未检定核定位信号基序。     

ROMA在卵巢上皮性癌早期诊断中的研究进展

卵巢上皮性癌（Epithelial ovarian cancer,EOC）死亡率居妇科恶性肿瘤首位,早期诊断可明显改善患者预后。人附睾上皮分泌蛋白（human epididymis protein 4,HE4）对早期EOC的检测敏感性高,有助于对EOC高危患者的筛选,与CA125可互补,增加盆腔包块患者中EOC早期诊断力度。HE4与CA125联合检测及结合绝经状态预测盆腔包块患者中卵巢恶性肿瘤的发病风险模型（Risk of Ovarian Malignancy Algorithm,ROMA）,能成功预测盆腔包块患者中EOC高风险个体,对卵巢良恶性肿瘤的鉴别预测更为准确且更易被接受,有较大的临床应用价值。     

兰州地区健康体检者血脂水平分析

目的:通过检测兰州地区健康体检者空腹血脂水平了解本地区人群血脂水平现状及血脂异常情况,建立本地区血脂参考值。方法:采用全自动生化分析仪检测兰州市2328名健康体检者,血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。比较不同年龄、性别血脂水平差异。结果:本地区2328名被检者,女性TC平均(4.54±0.94)mmol/L,TG中位数1.24mmol/L、HDL-C平均(1.34±0.26)mmol/L、LDL-C平均(2.61±0.76)mmol/L;男性TC平均(4.52±0.84)mmol/L、TG中位数1.56mmol/L mmol/L、HDL-C平均(1.20±0.23)mmol/L LDL-C平均(2.76±0.72)mmol/L,血脂水平随年龄增加逐渐升高(P<0.05)。血脂参考范围为女性TC:2.70~6.38 mmol/L、TG:0.52~3.66 mmol/L、HDL-C:0.83~1.85 mmol/L、LDL-C:1.12~4.10 mmol/L男性:TG:2.87~6.17 mmol/L、0.65~4.00 mmol/L、0.75~1.65 mmol/L、1.35~4.17 mmol/L。男性高TC、高TG、低HDL-C和高LDL-C患病率为18.2%、42.8%、19.6%和28%,女性高TC、高TG、低HDL和高LDL的患病率分别为22.1%、25.5%、2.7%和23.5%。结论:兰州地区血脂水平随年龄、性别、地区不同存在较大差异,临床上不能采用统一标准衡量,而应根据本地区建立的参考值诊断高脂血症。积极控制血脂水平、降低高脂血症患病率预防心脑血管疾病发生。     

人附睾蛋白4在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是严重威胁女性健康的恶性疾病之一。糖类抗原125（carbohydrate antigen125,CA125）是目前临床上广泛用于诊断卵巢上皮性癌的肿瘤标记物,然而其缺乏敏感性和特异性,因此,迫切需要寻找一种新的标志物来提高卵巢癌的诊断。人附睾蛋白4（human epididymis protein4,HE4）是近年发现的肿瘤标志物,其在良性肿瘤和正常组织中含量极低,但在卵巢癌中高表达。本文就HE4在卵巢癌中的诊断,动态监测等方面的进展做一综述。     

双歧杆菌肽聚糖结构及分子量的分析

从双歧杆菌细胞壁中分离纯化肽聚糖,研究其化学成分、结构和分子量分析。经氨基酸、多糖和蛋白质含量分析和肽聚糖的溶解实验鉴定,所提取物质的主要成分为肽聚糖;经核磁共振和红外光谱分析,所提取肽聚糖的结构与已知的肽聚糖的结构相吻合,其糖链结构为由D型吡喃糖N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸以β-1,4-糖苷键连接而组成;经SDS-PAGE和多种染色方法结合,分析经溶菌酶水解后的肽聚糖,其分子量的分布呈弥散状,范围在97.6kD到14.4kD之间。     

白斑综合症病毒与对虾血淋巴细胞的体外结合实验

通过差速离心和蔗糖密度梯度离心,从感染了白斑综合症病毒(WSSV)的病虾头胸部分离了WSSV,利用地高辛对病毒蛋白进行了标记(DIG-WSSV),以体外培养的对虾血淋巴细胞为吸附基底,观察和分析了病毒与细胞间的结合现象及特性。以NBT/BCIP为酶反应显色底物观察到在细胞周围形成许多暗紫色颗粒,证实病毒与细胞间存在着稳定的结合。以OPD为酶反应显色底物分析了结合反应的特性:当DIG-WSSV维持恒定值时,随着血淋巴细胞数量的增加结合显色增强,细胞数量达到1.2104cells/孔,492nm处的吸光值达到饱和;当血淋巴细胞数量维持恒定值时,随着DIG-WSSV蛋白含量的增加显色增强,且在DIG-WSSV的蛋白浓度达到4g/孔时,492nm处的吸光值达到饱和;未标记WSSV可竞争抑制血淋巴细胞与DIG-WSSV间的结合作用。进一步的研究得出:4℃下,随着结合时间的延长显色增强,但继续延长结合时间显色反而减弱;缓冲液的渗透压对结合结果影响甚微,而酸性条件利于病毒与细胞间的结合。37℃孵育对病毒结合活性影响不大,55℃和70℃孵育可显著影响病毒的结合活性;短时间超声波处理病毒可增加病毒结合能力,长时间超声波处理可破坏病毒结合能力;有机溶剂处理同样可破坏病毒结合能力,其中尤以氯仿/甲醇的处理更为激烈;不同的去垢剂对病毒结合活性的影响结果不同:SDS和脱氧胆酸钠可以降低病毒的结合活性,而Triton X-100和NP-40可以提高病毒的结合活性。