制备肺炎衣原体抗原片检测血清抗体

目的:探索肺炎衣原体抗原片检测血清抗体法在诊断Cpn感染中的实际应用前景。方法:应用进口肺炎衣原体(Cpn)毒株感染Hep-2细胞,分别以瑞氏-姬母萨染色、吖啶橙染色和直接免疫荧光染色等3种方法鉴定Cpn感染细胞。纯化获取大量Cpn抗原,用于制备斑点抗原片。建立微量免疫荧光染色法(MIF)检测血清抗体,诊断Cpn感染。结果:Cpn感染Hep-2细胞的最适条件是用含1μg/mL放线菌酮的维持液,在35℃、5%CO2孵箱中培养7d,并在培养的第0、3、4、5天以2600r/min离心1h,感染成功率极高。染色反应显示,瑞氏-姬母萨染色可将Cpn包涵体染成蓝紫色或红紫色;吖啶橙染色则使Cpn感染的Hep-2细胞呈现鲜明的橘红色;免疫荧光抗体染色后,在Cpn感染细胞内可见亮苹果绿色包涵体。通过斑点抗原荧光抗体染色的方法抽样检测了100份病人血清中的Cpn抗体,其中抗Cpn-IgG抗体的阳性血清共61份,阳性率为61%。与Cpn-外周血单核细胞(Cpn-PBMC)抗原片比较,阳性检出率无明显差别。结论:用Cpn感染细胞制作的Cpn斑点抗原片可用于临床检测血清Cpn-IgG抗体,且具有特异性、敏感性高的特点,但要求检测人员有一定的经验。     

知母皂甙元是Na~ 、K~ —ATP酶的抑制剂

中药知母属清热泻火药,但其作用机理一直不明。我们从知母提取到一种皂甙及其水解产物皂甙元,根据它的熔点、红外光谱、质谱分析及薄板层析等结果证明我们所得到的皂甙元为已知的菝葜皂甙元。它们明显地降低由甲状腺素造成的耗氧率增高,并抑制Na~ -K~ -ATP酶活性的作用。     

连接酶链反应技术在衣原体诊断中的应用

核酸扩增技术在感染常规诊断中的作用已被确认,技术不仅包括多聚酶链反应（ＰＣＲ）,而且也包括连接酶链反应（ＬＣＲ）,自我持续序列复制（３ＳＲ）,扩增探针和Ｑβ复制酶。本文综述了ＬＣＲ在衣原体检测中的应用,并与其它方法进行了比较,以助于了解ＬＣＲ技术在衣原体诊断中的应用优势。     

知母皂甙元是Na~ 、K~ -ATP酶的抑制剂

中药知母属清热泻火药,但其作用机理一直不明。我们从知母提取到一种皂甙及其水解产物皂甙元,根据它的熔点、红外光谱、质谱分析及薄板层析等结果证明我们所得到的皂甙元为已知的菝葜皂甙元。它们明显地降低由甲状腺素造成的耗氧率增高,并抑制Na~ -K~ -ATP 酶活性的作用。     

外周血单个核细胞中肺炎衣原体的分离、培养及连续传代

开发一种分离并增殖肺炎衣原体(Cpn)的简易方法极具意义。该方法先分离血液标本中的外周血单个核细胞(PBMC),用PEG使Cpn-Ag阳性的PBMC裂解释放出Cpn,然后与人喉表皮癌细胞(Hep-2)一起离心,继续培养Hep-2细胞,再将Hep-2细胞冻融破碎后,放入到新的Hep-2细胞中进行离心,以完成Cpn的1次传代,然后以同样的方法进行2-4次传代。分别用微量免疫荧光法(MIF)及PCR法检测Hep-2细胞中的Cpn-Ag和CpnDNA,并用FITC标记的属特异性衣原体脂多糖单克隆抗体检测实验分离以及进口菌株传代后的包涵体形成单位数量。结果显示MIF法检测Cpn感染后的Hep-2细胞,其胞内Cpn-Ag强阳性;MIF法检测1次传代及2次传代的Hep-2细胞,其胞内Cpn-Ag亦均强阳性,3次传代为阳性,而4次传代为阴性;PCR法检测2次传代后CpnDNA阳性。该简化方法可以实现PBMC中Cpn的分离,分离菌株传代4次后出现退化(优于进口菌株),但该方法仍可实现进一步的培养及传代。