利用DGGE法研究不同种植体系中根际微生物群落结构

利用DGGE技术研究不同间作和轮作种植体系对作物根际细菌和真菌群落结构的影响.运用16SrDNA和18SrDNA特异引物对,将土壤中提取的总DNA进行PCR扩增后,通过DGGE技术对PCR产物进行分析,结果表明:玉米-蚕豆轮作对蚕豆根际细菌和真菌群落结构影响明显,二者都与单作蚕豆有较大差异;小麦/蚕豆间作明显改变两种作物根际细菌群落结构和蚕豆根际真菌群落结构;玉米/蚕豆间作明显改变玉米根际细菌、真菌群落结构和蚕豆根际真菌群落结构.     

Cyanovirin-N蓝藻的筛选及其分子鉴定

目的:从实验室培养的自牛蓝藻中筛选出含有能编码抗病毒蛋白(cyanovirin-N,CV-N)基因的藻株并对其进行分子鉴定.方法:应用PCR技术和自行设计的特异性引物从80株蓝藻中筛选目标藻株,通过克隆、测序后,进行blast比对,经在线生物信息学软件预测该抗病毒蛋白CV-N的一级,二级,三级结构,并推测该基因序列编码的蛋白的抗病毒潜能.结果:筛选出藻株RZHA4.其所含的CV-N基因与已报道的CV-N基因有97%的相似性.结论:经16S rRNA-PCR和序列分析,该藻株与蓝藻Nostocaceae有99%的相似性,为一在实验室常规培养条件下生长良好的念珠藻(Nostoc),有可能成为新的CV-N生产藻株.     

满江红鱼腥藻遗传多样性的RAPD分析

共生在水生蕨类植物满江红(又称“红萍”:Azolla)叶腔中的固氮兰细菌曾被认为是一个种满江红鱼腥藻(Anabaena azollae Strasb.).但由于现存的满江红在分类学上有2个亚属,7个种1,对不同满江红叶腔中鱼腥藻的鉴别,多年来引起人们的重视.80年代,鱼腥藻的单克隆抗体和RFLP的研究,发现了它与宿主分类上一定程度的对应关系2,3.90年代以后,Van Coppenolle和Eskew分别以RAPD-PCR和DAF-PCR对从满江红共生体中提取的DNA进行了分析4,5,但后者发现了共生体中藻的DNA对整个PCR产物的干扰作用会影响满江红属本身系统分类.       

羽衣甘蓝的组织培养

1　植物名称　羽衣甘蓝 (Ｂｒａｓｓｉｃａｏｌｅｒａｃｅａｖａｒ.Ｒｕｂｒａ)。2　材料类别　无菌苗幼嫩茎段。3　培养条件　 (1 )种子萌发培养基 :1 2ＭＳ ＧＡ3 1ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ;(2 )增殖培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 2 .0 ＮＡＡ 0 .1 ;(3 )生根培养基 :1 2ＭＳ ＮＡＡ 0 .0 5。所有培养基均加 0 .7%琼脂和 3 %的蔗糖 ,ｐＨ 5 .8,培养温度 (2 5± 2 )℃ ,光照 1 2ｈ·ｄ-1,光照度 2 0 0 0ｌｘ左右。4　生长与分化情况4.1　无菌材料的获得　种子用自来水洗 3次 ,再用 75 %酒精消毒 3 0ｓ,ＨｇＣｌ2 消毒 8ｍｉｎ ,再用无菌水洗 3…     

结合态氮对满江红内生细菌群落组成和结构的影响

研究从超微结构和分子水平上探讨结合态氮对满江红(Azolla)叶腔中以共生藻占优势的微生物群落的影响。为排除外源污染并保留其内生菌的多样性, 采用茎尖组织培养并添加结合态氮等方法, 取得了表面无菌的含藻满江红(AmA)和无藻满江红(AmB)。电镜观察揭示, AmB较AmA的萍体表型有某种程度的修饰。AmA的微生物群落结构以共生藻、内生菌和宿主腺毛及其分泌物组成的生物被膜和藻囊为主要特征, 而AmB的叶腔几乎中空。基于16S rRNA基因和nifH基因的高通量测序结果显示, 生长于无氮培养液的AmA样品的微生物群落有相当高的多样性, 共有17个可操作分类单元(OTU), 分属4个细菌门, 并有一个以Nostoc azollae为优势的固氮微生物亚群包括草螺菌、根瘤菌和Niveispirillum等。而生长于富含结合态氮培养液的AmB样品的群落多样性明显降低, 仅有8个OTU, 且以Nostoc azollae为优势的上述固氮微生物亚群全部消失。研究结果表明, 通过调整氮素营养, 可改变宿主植物的微生物群落组成与结构, 进而改良植物的生长发育。     

福建省稻田土壤细菌群落的16S rDNA-PCR-DGGE分析

用不依赖细菌培养的16S rDNA-PCR-DGGE方法对福建省6个不同地区12个取样点的稻田土壤进行细菌群落结构分析.对12份样品直接提取其总DNA,用F341GC/R534引物扩增16SrDNA基因的V3可变区,结合DGGE(denaturing gradient gel electrophoresis)技术分析样品细菌群落组成.结果表明,福建省不同地区的稻田土壤之间细菌群落结构存在较大差异.犬体上可分为闽东、闽南、闽北、闽西4个大类.同一地区的根际土和表土样品之间也存在差异,但差异相对较低,其中龙岩根际土和表土细菌群落结构相似性最大,永泰差异性最大.回收了DGGE图谱中11个条带,测序结果经过Blast比对表明其中10个条带代表的细菌是不可培养的,显示了DGGE技术的优越性.     

满江红鱼腥藻与其宿主的遗传多样性和协同性的RAPD分析

从16个代表不同种属或地域来源的满江红样本中分离出共生藻并通过处理获得无藻的满江红宿主,对二者同步进行了RAPD扩增,分别得到了大量DNA多态片段。通过建立满江红鱼腥藻及其宿主的UPGMA聚类关系图,看出二者在遗传分支上存在着一定程度的协同对应关系。但在种内的不同品系间,这种协同性有所减少,发现有的品系的共生藻发生了明显的变异。 Abstract:Symbiotic Anabeana azollae and its host plant Anabeana-free Azolla were isolated from 16 Azolla accessions representing different Azolla species or geographic origins.DNA polymorphic fragments were obtained by simultaneous RAPD amplification of both symbiont and host.The UPGMA clusters of Anabeana azollae and its host Azolla were established separately based on Dice coefficient caculation and a coordinated relationship was shown between Anabeana azollae and its Azolla host along both individual genetic divergence,but this genetic homology was reduced among different strains within Azolla species while the obvious mutants of Anabeana azollae were detected in some Azolla tested strains collected from different geographic area in the same host species.     

朱丽亚甜瓜的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　日本引进的甜瓜品种“朱丽亚”(Cu cumismelovar.julia)。2　材料类别　茎段、种子。3　培养条件　种子发芽培养基 :( 1 ) 1 /2MS。茎段生长培养基 :( 2 )MS + 6 BA 2 .0mg·L- 1 (单位下同 ) +NAA 0 .0 5 ;( 3)MS + 6 BA 2 +PP3333.0 +NAA 0 .0 5。所有培养基均附加 0 .7%琼脂和 3%的蔗糖 ,pH 5 .8～ 6.0 ,培养温度为 2 3～ 2 7℃ ,光照 1 2h·d- 1 ,光照度为 2 0 0 0lx左右。4　生长与分化情况4.1　外植体的灭菌　种子用自来水冲洗 3～ 4次后 ,在无菌条件下用 0 .1 %HgCl2 消毒 1 0～ 1 2min ,然后用无菌水洗 4～ …     

仙人掌"黄体绯牡丹"的组织培养

1　植物名称　黄体绯牡丹仙人掌 (Ｇｙｍｎｏｃａｌｙｃｉ ｕｍｍｉｈａｎｏｖｉｃｈｉｉｖａｒ.ｆｒｉｅｄｒｉｃｈｉｉｃｖ .Ａｕｒｅａ)。2　材料类别　仔球。3　培养条件　诱导小球培养基 :( 1 )Ｂ5 6 ＢＡ 2 .0ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 0 .2 ;( 2 )Ｂ5 6 ＢＡ 5