中国红豆杉紫杉烯合酶cDNA的分离、表达和鉴定

紫杉烯合酶是一种二萜环化酶,催化牛儿基牛儿基焦磷酸形成紫杉醇生物合成过程中的中间体紫杉烯.利用PCR扩增同源探针筛选cDNA文库,克隆了一个编码中国红豆杉(Taxus chinensis (Pilg.) Rehd.)紫杉烯合酶3′端的2 151 bp的cDNA片段,也通过PCR扩增得到了该基因5′端的611 bp的cDNA片段,将这两个cDNA片段拼接在一起,得到长2 712 bp的cDNA片段,具有一个2 586个碱基的开放阅读框架(ORF),编码包括质体转移肽在内的共862个氨基酸残基;该酶与太平洋红豆杉紫杉烯合酶有97%的同源性(identity),与其他植物萜类环化酶也有较高的同源性.利用融合表达载体pET-32a在大肠杆菌BL21trxB中表达,所表达的融合蛋白以包含体形式存在.包含体经过变性、复性和再折叠,利用His残基亲和凝胶柱层析得到融合的紫杉烯合酶.用毛细管气相色谱-质谱联用对酶促反应产物进行分析,结果表明,融合的紫杉烯合酶能催化产生4(5),11(12)-紫杉烯.     

回归分析在肿瘤医院门诊量、床位和手术单元决策中的应用

目的 探讨回归分析法在科室管理决策中的应用。 方法 采用SPSS15.0软件对数据进行统计分析,指标预测采用线性回归分析。结果 经过回归分析,年份与门诊量之间的线性关系良好（F=904.8,P＜0.001）,用年份来预测门诊量结果稳定,决定系数为0.995,预测未来5年门诊量将突破10万,需要新增2个诊室单元;同时,新发恶性肿瘤病例数与门诊量之间的线性关系良好（F=323.6,P＜0.001）,用门诊量来预测用新发恶性肿瘤病例数结果稳定,决定系数为0.985,预计未来5年新发恶性肿瘤病例数将达到1 714例,每周需要的手术单元数从现在的7个正台增加到10个正台才能满足需求,预计2017年需要增加病房床位。结论 回归分析能对科室内部重要运营指标进行较为准确的预测,对于科室制定发展规划以及管理决策中有重大的意义。     

siRNA下调FLAP的表达诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡

目的研究5-脂氧合酶激活蛋白（5’-lipoxygenase activating protein,FLAP或ALOXSAP）的表达抑制对胰腺癌细胞PANC-1凋亡的诱导作用。方法通过siRNA抑制胰腺癌细胞FLAP的表达,用流式细胞仪检测Annexin—V标记的凋亡细胞,用Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达和裂解水平。结果FLAPsiRNA有效抑制了胰腺癌细胞PANC-1中FLAP的表达。转染了FLAPsiRNA的胰腺癌细胞出现凋亡。在细胞凋亡过程中,Bcl-2水平下降,而细胞色素C、caspase-3水平逐渐增高。结论FLAP的表达抑制可以诱导乳腺癌细胞通过Bcl-2和caspase-3途径发生凋亡。     

5-脂氧合酶激活蛋白小干扰RNA诱导人乳腺癌细胞凋亡的初步研究

目的：研究5-脂氧合酶激活蛋白（FLAP）的表达抑制对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用。方法：通过小干扰RNA（siRNA）抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231中FLAP的表达,用流式细胞仪检测膜联蛋白（annexin）-V标记的早期凋亡细胞,用Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白的水平。结果：转染了FLAP siRNA的乳腺癌细胞,24h后FLAP的表达被抑制,17％的细胞出现早期凋亡;48h时早期凋亡细胞增加到32．1％;72h时早期凋亡细胞下降到13．8％,而死亡或凋亡晚期细胞占到61．3％。在细胞凋亡过程中,Bcl-2水平下降,而细胞色素c、胱冬蛋白酶（caspase）-3的水平逐渐增高。结论：FLAP的表达抑制可以诱导乳腺癌细胞通过Bcl-2和胱冬蛋白酶-3途径发生凋亡。     

医保预付制改革对医院临床科研影响的分析

????? 目的 探讨医保预付制改革对医院临床科研工作的影响及应对方法。方法 采用SPSS15.0软件对数据进行统计分析,组间率的比较采用χ²检验或Fisher精确概率法。结果 2012年6月以前与2012年6—10月相比,新收治乳腺癌病例中医保病例的比例从35.8%下降至28.9%（P=0.029）,2012年11月上升至38.2%;随着控制收治医保病例,BC06研究的入组率从19.8%下降至13.2%（P =0.009）,其中医保病例入组率从17.3%下降至7.8%,绝对差异下降了接近10.0%,相对差异下降了54.9%（P=0.027）,非医保病例的入组率绝对差异则仅下降了6.0%,相对差异仅下降了27.4%（P=0.0700 ）。结论 医保预付制改革对医院医保病例收治、临床科研入组等方面造成了一定的影响,应采取相应措施将此影响降至最低程度。