以葡萄糖为底物一步法合成γ-氨基丁酸整合型重组钝齿棒杆菌的构建

[目的]为了构建一株直接利用廉价的葡萄糖合成γ-氨基丁酸的重组钝齿棒杆菌,将来自于植物乳杆菌γ-氨基丁酸合成途径的关键酶谷氨酸脱羧酶基因(lpgad)在产谷氨酸菌株钝齿棒杆菌中进行整合表达,实现葡萄糖到GABA的一步法生产.[方法]运用PCR技术扩增得到带有tac启动子的谷氨酸脱羧酶基因tacgad.通过重叠PCR的方法获得钝齿棒杆菌精氨酸合成途径关键酶N-乙酰谷氨酸激酶(NAGK)基因内部缺失型基因△argB.利用自杀载体pK18mobsacB构建同源整合载体pK18-△argB::tacgad,以△argB的上下游序列为同源臂,通过两次同源重组将tacgad基因整合到钝齿棒杆菌基因组,同时将NAGK基因argB灭活,利用蔗糖致死基因sacB反向筛选标记筛选得到谷氨酸脱羧酶的重组钝齿棒杆菌C.crenatum △argB::tacgad.重组钝齿棒杆菌以葡萄糖为底物进行发酵,测定GABA含量.[结果]重组菌C.crenatum △argB::tacgad成功表达谷氨酸脱羧酶,同时阻断了精氨酸合成途径对谷氨酸到GABA代谢途径的竞争,粗酶液基本检测不到NAGK活性,发酵液无精氨酸合成.通过96 h发酵,重组菌可积累约8.28 g/L的GABA.[结论]本研究通过将谷氨酸脱羧酶基因定向整合到钝齿棒杆菌精氨酸合成途径的关键酶基因argB内部,成功表达谷氨酸脱羧酶的同时阻断竞争途径精氨酸的合成.本研究为实现直接利用葡萄糖合成GABA的一步法生产奠定了基础.     

国内外食品安全法规与标准体系现状研究

研究了欧盟、美国、日本和中国等国家食品安全法规与标准体系现状,对比分析了中国食品安全法规与标准体系中存在的问题和建议,为中国食品安全法规与标准体系建设提供了借鉴经验。     

四季豆和淡豆豉提取物降血糖动物实验研究

目的：研究四季豆和淡豆豉提取物的降血糖作用,为开发辅助降血糖的保健食品提供实验依据。方法：设低、中、高三个四季豆和淡豆豉提取物受试样品组,1个纯水对照组、1个高血糖模型对照组,每组12只小鼠。3个剂量组分别给予0.14、0.28、0.83g/kg BW受试样品,相当于推荐日服量的5、10、30倍。用四氧嘧啶制备高血糖小鼠模型后,连续用受试样品30d后,观察其对高血糖模型小鼠和正常小鼠空腹血糖和糖耐量的影响。结果：受试样品在0.83g/kg BW剂量下,高剂量组的糖耐量值明显低于高血糖模型对照组（P＜0.05）;在0.14g/kg BW和0.83g/kg BW剂量下,低、高剂量组的空腹血糖值明显低于高血糖模型对照组（P＜0.01、P＜0.05）;同时受试样品对正常小鼠的空腹血糖没有明显影响（P＞0.05）。结论：四季豆和淡豆豉提取物对糖尿病小鼠的血糖具有辅助调节作用。     

LA系列百合‘Eyeliner’花器官组培快繁技术研究

该试验以LA系列百合‘Eyeliner’花器官为外植体,通过不定芽直接诱导和愈伤组织再分化2种途径,建立了花器官组培快繁技术体系。结果表明:以花器官为外植体污染率接近于0;4种百合花器官诱导从易到难的顺序为花梗、花丝、子房和花柱;花丝易诱导愈伤组织,花梗易诱导不定芽,最适诱导培养基均为MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA;不定芽增殖最佳培养基为MS+2.0mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA,愈伤组织分化最佳培养基为MS+1.5mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA;诱导生根最佳培养基为MS+45g·L-1蔗糖;最佳炼苗方式为将组培苗封口放置在自然环境中3d,然后开口放置在自然环境条件下2d;当试管苗鳞茎大小为3.15cm时,移栽成活率最高;移栽最佳基质为草炭∶蛭石∶珍珠岩=2∶1∶1。     

Parkin基因过表达质粒和细胞模型的构建

目的:构建Parkin基因过表达质粒并转染SH-SY5Y细胞,为进一步研究帕金森病的发病机制及中药的作用环节奠定基础。方法:首先构建Parkin基因过表达质粒,采用脂质体转导技术,将Parkin过表达质粒应用Lipo3000转染SH-SY5Y细胞。荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR检测其Parkin mRNA的表达;Western Blot技术检测其Parkin蛋白的表达。结果:转染组可观测到较多的绿色荧光蛋白表达;Parkin过表达细胞Parkin mRNA和蛋白的表达均显著提高(P0.01)。结论:通过脂质体转导技术,应用Lipo3000可将Parkin过表达质粒成功转染入SH-SY5Y细胞,转染的基因和蛋白表达均较高,提示此法可成功构建Parkin基因过表达的细胞模型。     

基于功能基因组数据整合方法研究前列腺癌风险基因

目的:利用生物信息学方法,将高通量基因表达数据与单核酸多肽(SNP)基因型数据进行整合分析,研究并注释前列腺癌风险基因。方法:本文基于EST、SAGE、基因芯片三类功能基因组数据整合的方法研究前列腺癌风险基因。首先,通过三类数据寻找前列腺癌中异常表达和差异表达基因。利用全基因组关联分析得到前列腺癌相关基因的SNPs。定位所得到的前例腺癌差异表达基因与SNPs到染色体,获取与SNPs在同一区段的差异表达基因,并通过各种数据库注释所得基因。结果:通过数据整合分析,最终得到前列腺癌风险基因84个,其中20多个基因已被证实与前列腺癌极其相关。结论:整合前列腺癌高通量表达数据与SNP基因型数据,能够快速有效的获得前列腺癌显著相关基因。此方法可以推广于其它癌症的研究。     

DNA甲基化修饰与干细胞分化

干细胞自我更新及分化潜能一方面是内源性转录因子相互协调控制的结果,另一方面表观遗传修饰也起着重要的作用。该文综述了DNA甲基化修饰的机理、哺乳动物DNA甲基化的特点以及干细胞分化的DNA甲基化修饰。     

百合鳞茎苯丙氨酸解氨酶提取条件的优化

研究兰州百合(Lilium davidii var. unicolor)鳞茎内PAL的最佳提取条件结果表明：pH 8.8的硼砂缓冲液为最适缓冲液;百合鳞茎的PAL不耐酸碱,更不耐酸;最适反应温度为40℃;随着水浴时间延长和水浴温度提高,PAL活性逐渐降低,但40℃水浴30 min后,酶活性仍保留47%;最适底物浓度为0.032 mol·L^-1;磨样时加入PVP 0.5 g,能够明显提高PAL活性。     

电针对帕金森病模型小鼠黑质铁染色细胞和铁蛋白表达的影响

目的探讨电针防治帕金森病的作用机制。方法采用1-甲基-4-苯基1,2,3,6四氢吡啶腹腔注射建立帕金森病小鼠模型,利用组织化学技术以及免疫组织化学技术观察电针对帕金森病小鼠脑黑质铁染色细胞和铁蛋白表达的影响。结果模型组1周、2周、4周小鼠黑质铁染色阳性细胞的数量较正常组明显增多,染色强度也明显增强（P〈0．001;P〈0．01;P〈0．001）,电针在3个存活期内均可明显减少帕金森病小鼠黑质铁阳性细胞的数量和染色强度（P〈0．001;P〈0．05;P〈0．001）;模型组1周、2周黑质部位铁蛋白的表达与正常组相比都有不同程度下降（P〈0．01;P〈0．001）,而电针组2周帕金森病小鼠黑质铁蛋白的表达与模型组相比显著增加（P〈0．01）。结论电针可以通过降低脑内铁的含量,同时增加铁蛋白的表达,从而提高帕金森病模型小鼠脑抗氧化能力,达到保护黑质多巴胺能神经元的目的。     

基于老年综合评估结果指导治疗对老年冠心病患者心功能、脂代谢和生活质量的影响

摘要 目的：探讨基于老年综合评估结果指导（CGA）治疗对老年冠心病患者心功能、脂代谢和生活质量的影响。方法：本次研究将2020年6月-2022年1月在江苏省人民医院心血管内科接受治疗的106例老年冠心病患者,采用随机数字法将其随机分为对照组（常规药物治疗,53例）与研究组（对照组的基础上结合CGA治疗,53例）。对比两组疗效、心功能、脂代谢和生活质量相关情况。结果：研究组的临床总有效率为94.34%,明显高于对照组的79.25%（P<0.05）。研究组治疗3个月后左心室舒张期末内径（LVEDD）、左心室收缩期末内径（LVESD）低于对照组,左心室射血分数（LVEF）高于对照组（P<0.05）。研究组治疗3个月后高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）高于对照组,甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）低于对照组（P<0.05）。研究组治疗3个月后病情、体力、医疗状况、一般生活、社会心理状况、工作状况各维度评分高于对照组（P<0.05）。研究组的住院期间心脏不良事件总发生率低于对照组（P<0.05）。结论：基于CGA治疗老年冠心病,可有效改善心功能、脂代谢,降低住院期间不良事件发生率,提高患者的生活质量。