高通量测序分析DNA提取引起的对虾肠道菌群结构偏差

【目的】通过高通量测序技术,评价不同DNA试剂盒提取引起的对虾肠道菌群结构偏差,了解健康凡纳滨对虾肠道菌群结构特征。【方法】分别以细菌、粪便和组织DNA试剂盒3次重复提取凡纳滨对虾肠道总DNA(分别编号为SIB,SIS和SIT),检测DNA含量、纯度及其16S r DNA V4区可扩增性,进一步采用Illumina Mi Seq高通量测序比较SIB和SIS样品菌群组成和多样性。【结果】细菌试剂盒提取的虾肠总DNA效果最好,粪便试剂盒次之,而组织试剂盒所提DNA含量低且难以被扩增。从SIB和SIS样品分别获得52151±5085和55296±5147条有效序列,同一(46800条)测序深度下,SIS样品OTU(operational taxonomic unit)数量和Shannon多样性指数均显著高于SIB的,而SIB样品间OTU重复性则优于SIS样品间的。从SIB和SIS样品鉴定的优势门一致,均包括变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、浮霉菌门(Planctomycetes)、放线菌门(Actinobacteria)和蓝细菌门(Cyanobacteria),但不同分类水平上绝大多数优势菌群丰度在两种样品间差异明显。【结论】高通量测序分析表明对虾肠道菌群结构因DNA提取方法不同而呈现显著偏差;本研究健康凡纳滨对虾肠道核心菌群主要由发光杆菌属(Photobacterium),乳球菌属(Lactococcus),弧菌属(Vibrio),Aliivibrio和3个分类未定属构成。     

生物活性肽-蛋氨酸脑啡肽对成骨细胞增殖的影响

蛋氨酸脑啡肽（Methionine Enkephalin,MENK）作为内源性物质,通过与阿片受体结合,发挥阿片样物质的生物学作用。研究表明,MENK在成熟的骨组织和成骨细胞中均有分布,并且在成骨细胞表面发现了阿片受体。实验旨在进一步研究MENK对成骨细胞增殖的影响。体外培养MC3T3-E1成骨细胞,MTT方法检测MENK对成骨细胞增殖的影响。结果表明,10-7、10-8、10-9mol/L的MENK对成骨细胞的增殖具有促进作用（P〈0.05）。提示MENK可在骨缺损疾病中发挥促进骨组织重建的作用。     

取食B型烟粉虱前侵染的烟草对B型烟粉虱和烟蚜体内保护酶和消化酶活性的影响

前期研究发现, 重要的外来入侵害虫B型烟粉虱Bemisia tabaci在烟草植株上对烟蚜Myzus persicae具有明显的种间竞争优势。为明确两种害虫的生理适应性差异对其种间竞争的影响, 用生化分析法研究了两种成虫取食B型烟粉虱为害的烟草植株后其体内主要保护酶和消化酶活性的影响。结果表明: B型烟粉虱取食其前侵染的烟草植株6, 12, 24, 48和72 h后, 其体内超氧化物歧化酶（SOD）和多酚氧化酶（PPO）的活性均显著增加（P<0.05）, 过氧化物酶（POD）活性在取食12和24 h后变化不明显, 但在取食6, 48和72 h后也显著增加（P<0.05）, B型烟粉虱体内的这3种酶活性的最高值较对照最高分别增加达1.62, 2.71和2.57倍。烟蚜取食B型烟粉虱前侵染的烟草植株在多数取食时间段内, 其体内PPO和SOD的活性仅略有增加, 但在取食12 h后SOD的活性受到明显的抑制。POD活性除在取食24 h后显著高于对照外, 在取食其他时间后均受到显著的抑制（P<0.05）。B型烟粉虱取食其前侵染的烟草植株不同时间后, 其体内蛋白酶和淀粉酶活性均显著增加, 最大值分别是对照的1.54倍和1.33倍; 烟蚜取食烟草植株6 h后, 其体内蛋白酶和淀粉酶活性与对照相比没有明显差异（P<0.05）, 但随着取食时间的延长, 这两种酶活性被显著抑制, 其最低值分别为对照的0.39和0.72倍。结果提示: 与烟蚜相比, B型烟粉虱取食经B型烟粉虱前侵染的烟草后其体内保护酶和消化酶的活性提高是其具有较高适应性的原因之一。     

肿瘤坏死因子-α和白介素-2对成骨细胞增殖的影响

成骨细胞在骨组织改建中至关重要。本试验体外培养人骨肉瘤细胞系MG63,MTT方法检测白介素-2（Interleukin-2,IL-2）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）对成骨细胞增殖的影响。结果表明,当IL-2的浓度大于100U/mL,其能够促进成骨细胞增殖（P〈0.05）,一定浓度（50～1000U/mL）的TNF-α对成骨细胞的增殖也有促进作用。     

百合科寄主植物对韭菜迟眼蕈蚊的生物效应

室内分别用百合科韭菜、大葱、大蒜和圆葱饲喂韭菜迟眼蕈蚊Bradysia odoriphaga Yang et Zhang幼虫，研究了4种寄主植物对其生长发育和繁殖的影响；用气-质谱联用分析技术，检测了人工合成大蒜素及大蒜、圆葱和韭菜的乙醇提取物的主要化学成分。结果表明，4种供试寄主植物对韭菜迟眼蕈蚊生长发育和繁殖的影响存在差异，幼虫取食韭菜最有利于其生长发育和繁殖；取食大蒜和圆葱对其生长发育和繁殖表现出明显的不利性，主要表现为幼虫死亡率增加，幼虫期延长，蛹重减轻，单雌产卵量降低；而取食大葱的影响介于取食韭菜与取食大蒜和圆葱之间。大蒜、圆葱的乙醇提取物和人工合成的大蒜素均对韭菜迟眼蕈蚊1龄幼虫有不同程度的杀虫活性，大蒜和圆葱的乙醇提取物（干粉，2 g/mL）稀释100和200倍，处理后48 h对1龄幼虫的校正死亡率分别达54.7%、28.0%和49.4%、22.7%；10%大蒜素稀释500和1 000倍，处理后48 h校正死亡率达100%和80.0%。成分分析表明硫醚类化合物可能是大蒜和圆葱中含有的杀虫活性物质之一。     

杀鱼假交替单胞菌C923几丁质酶基因PpchiC的克隆表达与酶学性质

【背景】某些假交替单胞菌可分泌几丁质酶，在降解利用几丁质为水产动物提供营养、免疫、抗病等方面有着重要潜力。【目的】克隆杀鱼假交替单胞菌(Pseudoalteromonas piscicida)C923的一个几丁质酶基因，实现其在大肠杆菌中的异源表达，并对重组几丁质酶的酶学性质进行研究。【方法】从菌株C923测序的基因组中注释到一个几丁质酶家族基因PpchiC，设计引物克隆该基因后进行生物信息学分析；构建载体进行异源表达并从温度、时间与诱导剂浓度进行表达优化；对表达蛋白进行最适温度与pH等酶学性质研究，同时比较了重组菌破碎后上清与沉淀及纯化的酶蛋白对几丁质的降解效应。【结果】基因PpchiC长1350bp，编码450个氨基酸，PpchiC蛋白理论分子量为48.76kDa，等电点为4.78，不稳定系数为29.08。结构域分析发现该蛋白含有一个类型Ⅲ几丁质结合域和一个糖苷水解酶18家族(glycosyl hydrolase 18,GH18)的催化域；PpchiC蛋白含有GH18家族几丁质酶的保守催化基序DxxDxDxE、YxR和[E/D]xx[V/I]。16℃、0.25mmol/L IPTG、诱导12h为其最优化表达条件，PpchiC在50℃、pH8.0时表现出最大酶活性；以胶体几丁质为底物时，PpchiC的K_m值为2.58mg/mL、V_max值为5.04mg/(mL·min)。降解结果表明，菌体的沉淀与上清及从上清中纯化的酶蛋白均有着较好的几丁质降解效应。【结论】杀鱼假交替单胞菌C923基因PpchiC编码GH18家族的几丁质酶，能被大肠杆菌高效表达且降解几丁质效应明显，这为PpchiC及菌株C923的应用提供了参考依据。     

烟草品种和温度对B型烟粉虱和温室白粉虱生物学参数的影响

在室内20℃、26℃和30℃三个设定温度条件下,研究了CF-965、NC-89和NC-82三个烟草品种对B型烟粉虱和温室白粉虱生长发育和繁殖的影响.结果表明:26℃时两种粉虱在CF-965、NC-89和NC-82三个烟草品种上的发育历期没有明显差异,但温室白粉虱卵期和若虫期的发育历期较烟粉虱依次分别延长了1.32d、2.81d和 2.04d.在CF-965上,B型烟粉虱卵期和若虫期的总存活率和平均单雌产卵量分别为54.19%和55.17粒,温室白粉虱仅分别为31.99%和39.17粒;在NC-89上,B型烟粉虱卵期和若虫期的总存活率和平均单雌产卵量分别为23.47%和37.50粒,温室白粉虱仅分别为15.75%和17.25粒;两种粉虱在NC-82上卵期和若虫期的总存活率和平均单雌产卵量差异不大,表明B型烟粉虱对CF-965和NC-89的适应能力较温室白粉虱强.两种粉虱在20℃时的发育历期最长,32℃时最短,26℃时居中.20°C时烟粉虱卵期和若虫期的存活率20.96%为最低,26℃和32℃时分别达54.19% 和53.29%;而温室白粉虱在32℃条件下存活率11.66%为最低,20℃和 26℃时分别达31 34% 和31.99%.温室白粉虱在20℃时产卵量大于烟粉虱, 在26℃时的产卵量小于烟粉虱,30℃时则不能产卵,但烟粉虱成虫30℃时的产卵量仍可达21.06粒.由此说明烟粉虱在较高温度条件下的适应能力显著强于温室白粉虱.山东烟区烟草生长中期的田间平均温度多在22～30℃,适合B型烟粉虱的发生,应引起高度重视.     

黄荆种子总生物碱对棉蚜无翅成蚜的毒力及其对几种酶活力的影响

采用酸水溶液提取法获得黄荆(Vitex negundo L.)种子总生物碱粗品,通过生物测定和生化分析方法研究了黄荆种子总生物碱对棉蚜(Aphis gossypii Glover)无翅成蚜的生物活性.结果显示:黄荆种子总生物碱对棉蚜无翅成蚜的触杀毒力较高,对单头棉蚜无翅成蚜的LD50为0.073 μg；用质量浓度0.500、1.000、2.000、4.000和8.000g·L-1总生物碱处理棉蚜无翅成蚜后24、48和72 h的忌避中浓度(AFC50)分别为1.256、1.720和3.923 g·L-1,具有一定的忌避和持续控制作用；用总生物碱LD30剂量(每头0.045 μg)处理棉蚜无翅成蚜,其存活时间较对照缩短7d,单头雌成蚜的繁殖力较对照降低了30.43％；单头棉蚜无翅成蚜每天的平均排蜜频率和排蜜量分别较对照减少了4.26滴和27.10 μg,差异达显著水平.在离体条件下,黄荆种子总生物碱对棉蚜无翅成蚜的羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶的活力有显著的抑制作用,IC50分别为0.778、1.901和4.216 g·L-1；但对多酚氧化酶的活力则有明显的激活作用,激活程度呈明显的量效关系.用总生物碱LD50剂量(每头0.073 μg)处理棉蚜无翅成蚜后3、6、12和24h,成蚜体内羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶的活力显著低于对照,而体内的多酚氧化酶活力则显著高于对照.研究结果表明:黄荆种子总生物碱对棉蚜无翅成蚜的杀虫作用机制与其对几种酶活力的影响效应相关.     

四川南充地区棕背伯劳繁殖期鸣声的初步研究

2008年3～8月,对四川南充地区棕背伯劳繁殖期鸣声进行了初步的研究.研究期间共记录到430次棕背伯劳的鸣声.根据对其行为和鸣声波谱图、语谱图特点的分析,繁殖期棕背伯劳的鸣声可分为:占区、驱逐、求偶、幼鸟乞食、召唤和应答6种叫声,对棕背伯劳繁殖期鸣声的特点进行了分析讨论.     

六种昆虫生长调节剂对葱蝇生长发育和繁殖力的影响

用灭蝇胺、氟铃脲等6种昆虫生长调节剂和对比药剂辛硫磷LC_40-50浓度处理葱蝇1龄和3龄幼虫，观察对其生长发育和繁殖的影响；并且研究了葱蝇成虫取食药剂对其繁殖力的控制效应。结果表明：6种药剂中除虫酰肼外，其余都对葱蝇幼虫发育历期、化蛹率、成虫产卵前期、成虫寿命、产卵量有很大影响，对其生长发育和繁殖表现出显著不利性。其中灭蝇胺和氟铃脲处理1龄幼虫后，存活幼虫的历期和成虫产卵前期各延长3天，化蛹率降低26.7%～30.0％，成虫寿命缩短22.3～24.3天，产卵量降低35.5％～49.9％；处理3龄幼虫主要导致产生畸形蛹，且正常羽化的成虫寿命降低18.0～20.67天，产卵量降低45.7%～57.8％。成虫连续取食用牛奶稀释的２ 000倍的药液，能导致产卵前期延长、产卵量减少、卵孵化率降低，幼虫死亡率极高，达95%以上。结果提示，利用成虫补充营养的特性，将灭蝇胺和氟铃脲等混入牛奶或糖水中诱集成虫取食，可有效降低成虫的繁殖力，有助于实现对葱蝇的无公害治理。