多聚磷酸盐激酶双底物通道腔的理性设计及其在无细胞催化生产谷胱甘肽中的应用

三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)是一种重要的辅助因子,参与许多需能的生物催化反应。多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinases,PPK)由于其底物聚磷酸盐廉价易得,可以为消耗ATP的反应提供能量。本研究选择哈氏噬纤维菌(Cytophaga hutchinsonii)来源的ChPPK,进行了底物谱和耐受性分析,通过分子对接和定点突变,理性改造多聚磷酸盐激酶的双底物通道腔来提高PPK酶的催化活性。与野生型相比,筛选得到突变体ChPPK_K81H-K103V的相对酶活提高了326.7%,同时,双突变扩大了ChPPK的底物利用范围与耐受性,提高了该酶的耐热性与耐碱性。基于该ATP再生系统,本研究偶联谷胱甘肽双功能酶GshAB和ChPPK_K81H-K103V,破细胞后采用无细胞催化生产谷胱甘肽,加入5 mmol/L ATP后,该体系6 h可以生产(25.4±1.9) mmol/L的谷胱甘肽,比突变前的催化体系提高了41.9%。优化无细胞催化体系的缓冲液、裂解液菌体量、补料时间后,无细胞体系可产生(45.2±1.8) mmol/L谷胱甘肽,底物l-半胱氨酸的转化率达到90.4%。提高ChPPK生产ATP的能力,可有效增强底物的转化率,降低催化成本,实现了无细胞催化生产谷胱甘肽的高产量、高转化率与高经济价值的统一。本研究提供了一种绿色高效的ATP再生系统,可为消耗ATP的生物催化反应平台提供可持续动力。     

不同年龄蝾螈肢体再生速度的比较

1.根据外形与组织学的观察,比较了不同年龄的东方蝾螈(Cynops orientalis)肢体的再生速度。我们发现再生速度随年龄增加而降低。幼虫的再生速度最高,变态以后再生速度显著地下降,但幼体(一岁、尚未达性成熟)仍比成体(性成熟)快得多。2.幼虫肢体再生之一切组织学过程均比变态后的动物进行快。幼体和成体的前二再生时期(组织去分化期和再生芽基形成期)进行速度相差不大,它们之间的差别主要在于分化期中再生体之生长和分化速度。3.再生初期速度(即组织去分化速度)依赖于断切时肢体组织的分化程度。变态前后组织分化程度的巨大差异造成了幼虫和幼体、成体之间组织去分速度的巨大差别。幼虫肢体组织分化程度低,去分化比变态后进行快得多;幼体和成体肢体所有组织的分化均接近或已达到完成,形态上彼此没有显著差异,这可能解释为什么它们的去分速度都减慢而且彼此大约相等。4.实验期中幼体体长仍继续增加,而成体生长几已陷于停顿,这可能是它们的再生体生长速度的差别的原因。此外,也应考虑到性成熟过程中组织生理的变化可能对再生体的生长和分化发生影响。5.我们讨论了内分泌和再生的关系并认为变态和性成熟过程中内分泌变化所引起的组织生理和组织分化程度的差...     

創傷癒合和組織再生的研究——Ⅰ.白鼠皮膚切除創傷癒合過程中創口的收縮

一.引言在高等動物的皮膚創傷癒合過程中,創口的收縮是很顯著的現象,使它所形成的疤痕往往小於當初創傷的部分。因此,創口的收縮作用,對於創傷癒合來說,是具有極大意義的。最早Carrel(1910)在研究狗的皮膚創傷癒合工作中,即已指出這個創口收縮的重要性;並且提出是由於肉芽的收縮作用(granulous retrac-     

中枢神经损伤后影响轴突再生的因素

与周围神经不同 ,成年哺乳动物中枢神经损伤后轴突不能再生 ,往往造成不可逆的功能丧失。影响再生的原因相当复杂 ,胶质瘢痕形成、神经营养因子缺乏及存在诸多的抑制性因子等。本文就一些影响中枢神经再生的因子从其结构、分布、功能及可能的作用机制诸方面作一综述     

陆地棉中棉所24胚性愈伤组织的诱导及植株再生

以陆地棉“中棉所24”为材料进行了全固体体细胞培养,获得了愈伤组织和再生植株。愈伤组织诱导阶段采用0．01IAA 0．01KT 0．012,4-D的培养基效果好,继代时间多为30～50d;激素由高到低的继代可明显提高胚性愈伤分化率,IAA和KT含量均较低,IAA／KT比例为1：1～1：6,胚性愈伤最高分化率为50．22％。     

刀鲚与凤鲚尾鳍再生现象的观察

本文介绍了对野外工作中发现的甸刀鲚和凤鲚鱼尾部异常现象的观察结果，经对有关材料的发类性状和Ｘ光骨骼照片的研究分析，认为上述鱼类尾部异常是由于生活时期尾部损伤后再生造成的；分布区中，尾部异常的现象大量存在。     

神经元再生:抑郁症治疗的新策略

成年哺乳动物一生中,海马等脑区神经元是可以再生的,而海马脑区神经元再生的减少和增多分别是抑郁症发生和恢复的重要因素。如果神经元再生过程被抑制,在抑郁症的动物模型上抗抑郁剂将会失去其行为学效应。长期给予不同种类的抗抑郁剂可以显著地促进动物海马神经元再生。随着对神经元再生调节机制研究的不断深入,为进一步探讨抑郁症的发生机制,以及发展新型抗抑郁治疗药物提供了新的思路与视角。     

黄瓜成熟胚离体培养中的胚状体诱导和植株再生（简报）

以10个黄瓜品种为材料,取成熟胚外植体先经MS 2,4—D 1.0mg/L(单位下同) KT0.5诱导后转入MS IAA 0.1 KT0.5上分化,胚状体发生频率高并有植株再生。材料的基因型差异显著,“农大春光”分化率最高(40％)。双层培养有效地促进畸形胚状体的正常发育,5％蔗糖和1.0mg/L ABA促进胚性愈伤组织的继代增殖和胚性保持。     

甘蓝型油菜叶柄原生质体培养再生植株

Two cultivars of Brassica napus,Altex and Canadian twins,were used as materials.Protoplasts isolated from petioles of plants grown in vitro were cultured in Nitsch mediumsupplemented with 0.5mg/L BA,0.5mg/L NAA,1mg/L 2,4-D,100mg/L serine,800mg/Lglutamine,4% sucrose and 0.4mol/L mannitol.After 2 days of culture,the first division wasobserved.The division frequency estimated after 10 days of culture was 30—60%.One weekafter transferring onto MS medium containing 6mg/L GA_3 and 3mg/L BA,protoplast-derivedcalli regenerated into shoots.The regeneration frequency of the two cultivars was 24% and31% respectively.It was found that the protoplasts isolated from petioles could float on thesurface of the 3% sucrose contained solution which was very favourable both to purificationand culture of the protoplasts.     

红菜苔子叶离体培养与植株再生

IhVitroCotyledonCultureandPlantRegenerationofBrassicacampestrisLIHan－Xia,YEZhi-Biao,LINGHut（DepartmentofIlorticulture,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070）1植物名称红菜苔(Brassicacampestris)2材料类别无菌苗子叶。3培养条件基本培养基为MS。（1）无菌苗培养基为1／2MS;（2）芽分化培养基是MS＋BA2mg／L（单位下同）4NAAI;（3）生极培养基是MS＋IAAo5;培养温度25C,每天光照14h,光照度1800IX。4生长与分化情况于超净台上将种子在含O．l％SDS的0．1％HgCI,溶液中表面灭菌10min,再以无…