抗MRP3单链抗体-sTRAIL融合蛋白诱导U251多形性胶质母细胞瘤凋亡

采用重组PCR技术获得抗多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3, MRP3)的单链抗体(scFv)与人源可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(soluble TNF-related apoptosis inducing ligand, sTRAIL)的融合蛋白质的基因编码序列, 利用原核表达载体pMAL-c2,构建含麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein, MBP)标签肽的antiMRP3(scFv)-sTRAIL融合蛋白, 经亲和层析柱纯化. 获得纯化的antiMRP3(scFv)-sTRAIL融合蛋白,用MRP3阳性U251多形性胶质母细胞瘤做增殖抑制实验、细胞凋亡诱导实验,结果均显示具有明显的活性, 而MBP无明显作用. 上述结果表明,成功表达了antiMRP3(scFv)-sTRAIL融合蛋白, 该融合蛋白具有诱导U251多形性胶质母细胞瘤细胞凋亡的活性, 为开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础.     

矿化液和地塞米松增强大鼠原代骨髓基质细胞NF-κB受体活化剂配体的表达

NF-κB受体活化剂配体(receptoractivatorforNF-κBligand,RANKL)是调节破骨细胞生成的重要因子,它可在骨髓基质细胞中表达。矿化液(含10-8mol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/mlL-抗坏血酸)能够诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化,为探讨矿化液及其主要成分地塞米松对大鼠原代骨髓基质细胞表达RANKL的影响,采用矿化液培养原代大鼠骨髓基质细胞48h,通过免疫荧光染色观察RANKL的表达变化。结果显示矿化液和地塞米松在短期内均能增强鼠骨髓基质细胞RANKL的表达,提示地塞米松促进破骨细胞形成的分子机制可能与骨髓基质细胞RANKL表达的改变密切相关。     

进化信息照亮了果蝇Toll通路配体蛋白的功能表面

Toll信号通路不仅控制果蝇背腹轴的发育,而且在成体果蝇抵抗真菌感染的过程中发挥重要作用。当果蝇受真菌攻击后,配体Spatzle被蛋白酶切割后形成二聚体活性形式,专一性结合到Toll受体,从而激发胞内信号传导级联放大过程并最终导致抗真菌肽Dmsomycin的表达。     

SELEX技术在病毒感染诊断和治疗中的应用

指数富集的配体系统进化（SELEX）技术是一种新的组合化学技术,它利用人工合成的随机寡核苷酸文库,通过体外多轮筛选与扩增,获得能与靶物质特异性结合的寡核苷酸适体。适体的靶分子广泛,包括病毒代谢相关产物,且与靶物质结合的亲和力高、特异性强,在体内代谢及稳定性等方面优于抗体。在细胞和动物模型中,适体显示出很多优于抗体的特性,而且已经有适体作为药物进入临床试验阶段。这种体外筛选技术是一种较成熟的技术,由此产生的适体具有较好的理化特征,可以抑制病毒复制感染的各个阶段,而且在病毒感染所引发的相关疾病诊断和治疗等方面具有较好的应用前景。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及抗肿瘤作用

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是肿瘤坏死因子（TNF）超家族成员之一,能选择性的诱导肿瘤细胞、转化细胞凋亡,而对正常组织无毒性,有望成为肿瘤治疗的新方法,备受人们的关注。本文从TRAIL的结构、受体、诱导肿瘤细胞凋亡机制及在肿瘤治疗中的应用等方面作了介绍,以期为TRAIL临床应用提供参考。     

冠心病患者血清sCD40L水平及其与hs—CRP关系研究

目的：研究冠心病患者血清sCD40L和hs-CRP临床特点及其关系,探讨其在冠心病预测和治疗中的意义。方法：采用夹心法酶联免疫吸附测定分析法及微粒子增强透射免疫分析法分别对对照组15例、稳定型心绞痛（SAP）组27例、不稳定型心绞痛（UAP）组35例及急性心肌梗死（AMI）组14例受试者血清sCD40L和hs—CRP水平进行检测,并观察其与冠脉狭窄程度的相关性。结果：1）、血清hs-CRP水平：SAP组、UAP组、AMI组呈依次递增（AMI组比UAP组、UAP组比SAP组P〈0．05．AMI组、UAP组比对照组（P〈0．01）;SAP组与对照组血清hs—CRP水平相似;2）、血清sCD40L水平：AMI组及UAP组血清sCD40L水平高于SAP组和对照组（P〈0．01）,AMI组与UAP组之间、SAP与对照组间没有统计学差异;3）、相关分析显示血清sCD40L水平与hs-CRP水平显著相关（r=0．787,P〈0．0001）,两者均与冠脉狭窄程度无相关性。结论：血清hs-CRP、sCD40L水平升高与冠心病临床表现类型和病情是否稳定有关,与冠状动脉狭窄程度无关,此两项指标能够用于冠心病病情不稳定性的判断和预测。     

哺乳动物Toll样受体与组织再生修复

机体损伤后通过诱导组织细胞产生复杂而又相互调控的系列反应,来促进损伤组织的再生.不同细胞因子、生长因子及细胞之间的协调平衡对于组织再生的调节非常重要,免疫系统在此过程中起着极其重要的作用.Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)可识别微生物病原体,在触发机体防御性抗病原微生物免疫反应中发挥着重要作用,是先天免疫系统中必不可少的重要成分,TLRs内源性配体的存在提示TLRs不仅可诱导机体防御性的抗微生物免疫反应,同时还是机体损伤后启动组织再生修复的敏感监测系统.本文概述了TLRs及其内源性配体,以及TLRs在诱导损伤后组织再生中的作用.TLR内源性配体及其在组织再生过程中的作用为促进机体损伤组织的再生修复提供了新的思路策略.     

金黄色葡萄球菌外毒素B特异性适体的筛选及其应用

目的:利用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,筛选能与金黄色葡萄球菌外毒素B(SEB)特异、高亲和力结合的单链DNA(ssDNA)适体,并将该适体应用于患者血清标本的检测。方法:从体外合成的96核苷酸随机ss-DNA文库中,以羧基磁珠作为筛选介质,经逐步PCR扩增、筛选,获得针对SEB的高亲和力、高特异性适体;利用荧光素标记适体测定筛选过程中各轮结合力;利用酶连接适体方法检测适体特异性和结合力。结果:经过13轮筛选,ssDNA文库与SEB的结合百分率从1.1%提高到39.8%,增加了36倍;获得的ssDNA适体(A11)针对SEB的特异性强,与金黄色葡萄球菌表面蛋白A(SPA)结合低,并能初步识别患者血清。结论:利用SELEX技术筛选获得了特异结合SEB的高亲和力的ssDNA适体,为金黄色葡萄球菌的临床诊断与治疗奠定了基础。     

利用HER2/neu胞外配体结合区2从噬菌体抗体库中筛选抗体及其初步鉴定

目的:利用HER2/neu胞外配体结合区2(RLD2)从噬菌体抗体库中筛选相应抗体,并进行初步检测。方法:设计合成引物,利用PCR方法克隆出RLD2基因后,将其连接到pET-24a( )载体中,在大肠杆菌中实现高效表达。对包涵体蛋白经纯化、透析复性后得到目的蛋白。以得到的目的蛋白为靶标,从人源性噬菌体抗体库中进行4轮筛选得到抗体,经ELISA法初步鉴定,并用MTT法检测阳性克隆。结果与结论:初步得到6株亲和力较高的抗HER2/neu抗体,选取其中2株进行了MTT法检测,表明对HER2高表达的乳腺癌细胞有较明显的抑制作用。     

β2-肾上腺素受体在新生大鼠心肌成纤维细胞中的分布及其促增殖作用

为了明确β-肾上腺素受体(AR)亚型在新生大鼠心肌成纤维细胞中的分布及其在成纤维细胞增殖反应中的作用,采用放射配体结合实验和[3H]-thymidine掺人法检测了新生大鼠心肌成纤维细胞的β-AR密度和DNA合成速率。结果显示,在培养心肌细胞和心肌成纤维细胞中β-AR密度(Bmtax)和解离常数(Kp)无显著性差异;竞争抑制曲线分析结果提示,心肌成纤维细胞对CGP 20712A和ICI ll8551单位点拟合均显著优于两位点拟合(P＜0．01),表现为对选择性β1-AR拮抗剂CGP 20712A的低亲和性(IC50值：10．1μmol/L)和对选择性β2-AR拮抗剂ICI 118551的高亲和性(IC50值：0.147μmol/L)。异丙肾上腺素(ISO)促心肌成纤维细胞增殖作用可被ICI 118551和心得安(非选择性β-AR拮抗剂)完全抑制,而CGP20812A则无此作用。上述结果提示,在培养心肌成纤维细胞中β-AR亚型占绝对优势,并且ISO引起的心肌成纤维细胞增殖反应是由β2-AR介导的。