抗HPV11 E2核酶的计算机设计

 借助计算机软件分析 ,设计出能特异性切割HPV11型 6 4 4ntE2mRNA的核酶 (ribozyme) .遵循Symon′s锤头状核酶结构和GUX剪切位点原则 ,靶序列存在 32个这样的剪切位点 .通过计算机软件分析出核酶的最佳剪切位点 ,并对底物及核酶的二级结构进行预测及进行相应基因生物学功能和基因同源性分析 ,筛选出 2个锤头结构核酶 .针对这两位点设计的核酶分别命名为RZ2 777和RZ32 81.计算机分析显示 ,两核酶与底物切点两翼碱基形成锤头状结构 ,切点所在基因序列具有相对松弛的二级结构 ,位于该基因重要生物功能区内 ,是核酶的理想攻击区域 .通过基因库检索 ,在已知人类基因排除了与上述两核酶切点两翼碱基有基因同源性序列的可能性 .将两核酶用于体外剪切实验取得了良好的实验结果 ,认为借助计算机分析可帮助尽快从多个剪切位点选择出最适核酶     

脱氧胆酸钠体系分离紫杉烷类化合物

以脱氧胆酸钠(SDC)为手性拆分剂,建立了紫杉醇、10-去乙酰基-紫杉醇、10-去乙酰基-7-表-紫杉醇、三尖杉宁碱、巴可亭Ⅲ、10-去乙酰基-巴可亭Ⅲ、10-去乙酰基-7-表-巴可亭Ⅲ等7种紫杉烷类化合物的胶束电动毛细管色谱分离方法.分离条件为67cm×75μm毛细管,分离电压25kv,温度25℃,UV检测器230nm,气动进样3s.缓冲液为脱氧胆酸50mm,Tris-HCl140mm,MeOH20%,pH8.5.     

特异切割苹果锈果类病毒的核酶基因的克隆和转录物的体外活性测定

根据锤头型核酶的作用模式 ,设计、合成和克隆了特异切割苹果锈果类病毒ASSVd正链 (194-196位点 )或负链 (89- 91位点 )RNA的 2个短臂锤头型核酶基因 :42nt的RzASSVd(+)和 40nt的RzASSVd(- )。经转录获得核酶转录物和³²P标记的ASSVd正、负链转录物。将核酶与ASSVd混合 ,50℃或 37℃保温 3～ 4h ,进行 8%PAGE(含8mol L尿素 )和放射自显影分析。体外切割检测表明 :2个核酶均具有特异切割活性 ,其中RzASSVd(- )对ASSVd负链的切割活性较高 ,对ASSVd正链不起作用。RzASSVd(+)对ASSVd正链的切割活性较弱 ,对ASSVd负链亦不起作用。在此基础上 ,构建得到双价核酶基因pGEMRzASSVd(± )。     

腹腔注射2-DG对大鼠下丘脑orexin-A神经元表达的影响

目的：探讨腹腔注射2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）对大鼠下丘脑增食欲素-A （ore xin-A）神经元的影响。方法：12只健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组（3只）、生理盐水对照组（3只）及腹腔注射2-DG组（6只）,2-DG剂量400 mg/kg,动物存活2 h,抽取脑脊液后灌注固定。实验结束后,采用免疫组织化学方法观察下丘脑orexin-A的表达、以及orexin-A与Fo s的双标情况,采用ELISA方法检测orexin-A在脑脊液中的含量。结果：[H TK]2-DG组的orexin-A阳性神经元数量和双标细胞阳性率（双标细胞占orexin-A阳性细胞的百分率）均高于对照组和生理盐水组（P<0.05）;并且2-DG组动物脑脊液中的orexin-A含量也明显高于其他两组（P<0.05）。结论：腹腔注射2-DG可激活大鼠下丘脑orexin-A神经元,orexin-A可能参与其诱导的急性应激反应。     

蔓地亚红豆杉3′-N-去苯甲酰-2-脱氧紫杉醇苯甲酰转移酶基因的克隆与序列分析

3′-N-去苯甲酰-2-脱氧紫杉醇苯甲酰转移酶(DBTNBT)是催化紫杉醇生物合成最后一步反应所需要的酶,负责将带有不完全侧链的紫杉醇前体催化形成紫杉醇。利用蔓地亚红豆杉的总DNA和总RNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术克隆出DBTNBT基因的DNA序列和cDNA序列,测序结果显示长度分别为1465bp和1362bp,编码438个氨基酸的多肽。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的蔓地亚红豆杉的DBTNBT基因的一致性为99%,其氨基酸序列与已经报道的蔓地亚红豆杉的DBTNBT氨基酸序列的一致性为96%。DNA序列和cDNA序列比对发现该基因含有1个内含子。利用SWISS-PROT、DNAMAN等生物信息学工具对其蛋白序列进行了分析,为利用基因工程的方法生产紫杉醇或其前体物质提供了分子基础。     

意大利蜜蜂工蜂脂肪体胚后发育过程中细胞的增殖和凋亡

脂肪体是昆虫体内物质贮备和中间代谢的重要组织。本研究通过显微形态观察、 BrdU免疫组织化学和原位末端转移酶标记(TUNEL)细胞凋亡检测技术, 对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂脂肪体胚后发育过程中细胞的增殖和凋亡特点进行了比较研究。结果表明： 意大利蜜蜂工蜂脂肪体细胞数量的快速增加集中在幼虫发育前期（1-3龄）, 而细胞的凋亡则集中在蛹发育早期的2-3 d（预蛹-2日龄蛹）时间之内。在变态发育中, 工蜂幼虫脂肪体凋亡降解后重新组建形成成虫的脂肪体。本研究为昆虫脂肪体的功能研究以及昆虫组织细胞自噬和凋亡的机制研究提供一定的证据。     

体外转染NHE-1核酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨锤头状核酶对大嫌肺动脉平滑肌细胞Na^ /H^ 变换器（NHE－1）表达和活性、pHi的影响,及其与细胞增殖的关系。方法：构建含锤头状核酶序列的pLXSN反转录病毒重组载体,将其转染体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞,G418筛选后获取含有重组载体的细胞克隆,检测细胞NHE－1 mRNA表达、^22Na摄取量、pHi和^3HTdR掺入量。结果：与结果pLXSN空载体的细胞和正常对照组细胞比较,转染重组载体的肺动脉平滑肌细胞中NHE－1 mRNA表达、^22Na摄取量减少,同时伴有pHi降低和^3H-TdR掺入量减少,正常对照组和空载体组间无显著差异。结论：NHE－1特异性锤头状核酶可对NHE－1 mRNA进行特异性切割,减少其表达,从而诱导细胞酸化,抑制肺动脉平滑肌细胞增殖。     

利用合成调控RNA技术提高大肠杆菌异源合成红霉素前体6-脱氧红霉内酯B产量

红霉素为代表的聚酮类化合物已经成功的在大肠杆菌中实现了异源合成,但其产量仍然较低(仅~10 mg/L)。本研究基于大肠杆菌全基因组代谢模型iAF1260,利用通量平衡分析预测了红霉素母核6-脱氧红霉内酯(6-Deoxyerythronolide B,6-d EB)生物合成的关键靶点,通过合成调控RNA技术(Synthetic small regulatory RNAs,sRNAs)对预测的靶点进行验证。结果表明,以弱化lsrC(编码LsrABC转运蛋白)和ack A(编码乙酸激酶蛋白)为代表的关键靶点改造可以显著提高6-d EB异源合成,提高幅度可达48.7%。通过弱化靶点的组合,进一步改善了6-d EB的异源合成,产量最终可达22.8 mg/L,比出发菌株产量提高59.9%。本研究发现和确认了6个有效的调控靶点,最终成功地改善了6-d EB在大肠杆菌中的异源合成。研究表明,通量分布比较分析结合sRNAs技术是一种有效的方法提高6-d EB异源合成,也为改善其他代谢产物的异源合成提供了可供借鉴的研究思路。     

沉淀聚合法制备1-脱氧野尻霉素分子印迹聚合物微球及其性能研究

本研究制备了1-脱氧野尻霉素分子印迹聚合物微球,考察溶剂、反应时间对分子印迹聚合物产率以及性能的影响。以1-脱氧野尻霉素为模板分子,α-甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂,采用沉淀聚合法合成分子印迹微球,采用静态吸附及扫描电镜(SEM)的方法对微球进行表征。结果表明,当反应时间为24 h、乙腈为溶剂时,所制得印迹聚合物微球的形貌和吸附性能较好,对1-脱氧野尻霉素与N-甲基-1-脱氧野尻霉素的选择性分离因子α为2.26,说明分子印迹聚合物微球对1-脱氧野尻霉素分子有特异性吸附和识别能力。