肺纤维化中TGF-β信号传导通路及其靶点治疗

转化生长因子β(TGF-β)是最重要的致肺纤维化细胞因子.TGF-β通过下游的信号转导因子激活成纤维细胞等效应细胞.对TGF信号传导通路各靶点进行干预可能为治疗纤维化疾病提供一种新手段.     

大鼠肺泡巨噬细胞对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制作用

实验采用[^3H]TdR掺入标记法测定微量培养人胚肺成纤维细胞的增殖,观察到健康大鼠的肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage,AM)可抑制成纤维细胞增殖。经调理的酵母多糖激活后,AM的抑制作用加强;而经消炎痛处理的AM,抑制作用转为被促进增殖作用所取代;测定AM上清液中前歹腺素E（prostaglandin E,PGE)含量,显示其抑制作用与PGE含量相关。结果提示,AM有抑制作促进肺成纤维细胞增殖的双重作用,正常时以抑制作用占优势;PGE可能是AM产生的主要的肺纤维化抑制因子。     

腺苷A2a受体在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用

目的：观察腺苷A_2a受体（A_2aR）在小鼠肺纤维化形成中的调控作用。方法：30只雄性SPF级野生型BALB/C小鼠和20只A_2aR基因敲除BALB/C小鼠,随机分为以下5组：野生型小鼠对照组（A组）、野生型小鼠纤维化组（B组）、A_2aR基因敲除小鼠对照组（C组）、A_2aR基因敲除小鼠纤维化组（D组）、野生型小鼠纤维化+A_2aR激动剂（CGS21680）组（E组）,每组各10只。纤维化组小鼠气管内注入博莱霉素（bleomycin,BLM）溶液50μl （5 mg/kg体重）,对照组在气管内注入等体积生理盐水,注射后立即将小鼠直立旋转3~5 min,使其均匀分布于两肺。A、B、C、D各组每天腹腔注射生理盐水0.5 ml,E组每天腹腔注射A_2aR激动剂（CGS21680）0.5 ml （0.25 mg/kg体重）,连续28 d。第29天取血检测血清转化生长因子β1（TGF-β1）含量;检测肺组织中羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）、TGF-β1和A_2aR蛋白质含量,TGF-β1 mRNA、A_2aR mRNA的表达,并观察肺组织光镜和超微结构。结果：①光镜和超微结构提示,B组肺泡壁增厚破坏,肺泡腔狭窄或部分陷闭,纤维增生,炎细胞浸润,I型、Ⅱ型肺泡上皮细胞明显空泡化,D组较B组明显,E组表现较B组减轻。Masson染色提示B组、D组小鼠肺组织纤维增生明显,E组明显减少,提示基因缺失加重了小鼠肺纤维化的形成。②与A组比较,B组血清TGF-β1含量,肺组织Hyp含量,TGF-β1、A_2aR蛋白质含量和TGF-β1 mRNA、A_2aR mRNA的表达均明显增高（P<0.01,P<0.05）。与C组比较,D组血清TGF-β1含量、肺组织Hyp、TGF-β1含量和TGF-β1 mRNA表达明显增高（P<0.01,P<0.05）,提示肺纤维化小鼠肺组织Hyp含量增高,TGF-β1表达上调。③与B组相比,D组血清TGF-β1、肺组织Hyp、TGF-β1含量和TGF-β1 mRNA表达明显增高（P<0.01）。与B组比较,E组A_2aR蛋白质含量和A_2aR mRNA的表达均增高（P<0.01）,而血清TGF-β1、肺组织Hyp和TGF-β1蛋白含量及TGF-β1 mRNA表达较B组明显下降（P<0.01,P<0.05）,提示A_2aR基因敲除小鼠肺组织Hyp含量增高、TGF-β1表达上调;A_2aR激动剂可使A_2aR表达上调、TGF-β1表达下降。结论：A_2aR基因敲除小鼠的肺纤维化明显增加。A_2aR在肺纤维化形成中反应性增高,可通过降低TGF-β1的表达而抑制肺纤维化形成。     

靶向沉默HIF-1α信号通路抑制百草枯中毒诱导的肺泡上皮细胞上皮间质转化

目的:探讨HIF-1α信号通路在百草枯(paraquat,PQ)诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用机制。方法:使用20μmol/L浓度的百草枯溶剂对大鼠Ⅱ型肺泡上皮RLE-6TN细胞干预24 h,随后在倒置光学显微镜观察各组细胞形态学变化;用real-time PCR与Western blot法检测RLE-6TN细胞中HIF-1α、上皮表型标记蛋白E-cadherin及间质表型标记蛋白Vimentin的表达,Transwell侵袭实验检测各处理组细胞侵袭能力的改变;使用HIF-1α靶向si RNA抑制其表达后,进一步采用RT-PCR和Western blot检测HIF-1α、E-cadherin和Vimentin的表达水平,Transwell法检测细胞侵袭能力变化。结果:体外百草枯溶液可显著诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN细胞HIF-1α表达升高和上皮间质转化的发生,同时细胞的体外侵袭能力也增强。靶向沉默HIF-1α基因后,百草枯诱导的上皮间质转化过程被逆转,同时细胞侵袭能力显著减弱。结论:百草枯通过调控HIF-1α信号通路来诱导RLE-6TN细胞上皮间质转化的发生,进而促进肺纤维化的形成。     

血清标记物在类风湿关节炎相关间质性肺疾病中的作用

类风湿关节炎相关间质性肺疾病(rheumatoid arthritis-associated interstitial lung disease, RA-ILD)是类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)最具破坏性的并发症,一旦发展成普通型间质性肺炎模式,患者的死亡率急剧上升,且缺乏有效的治疗手段和特异性的诊断方法。血清标记物,特别是MMPs、KL-6、SP-D、CCL18、OPN、WNT5A、Anti-CarP抗体、抗MAA抗体、抗PAD抗体等,可以早期识别RA-ILD的高危患者,预测亚型、评价疗效、监测预后,日益受到人们关注。本文就血清标记物与RAILD异常表达和肺纤维化发生、进展及预后的相关性作一综述,旨在为RA-ILD寻找可靠的血清标记物,为临床诊治工作提供参考。     

罗格列酮和强的松对博来霉素诱导大鼠肺纤维化中FIZZ1表达的影响

目的:观察Fizz1在肺组织中的动态表达及其意义,并比较罗格列酮与强的松对Fizz1表达的影响。方法:90只雄性SD大鼠随机分为对照组,模型组,强的松干预组,罗格列酮干预组,强的松+罗格列酮干预组,模型组和干预组大鼠气管内一次性注入博来霉素构建大鼠肺纤维化模型,对照组给予等量生理盐水。造模24小时后各干预组给予相应药物灌胃。各组动物于7、14、28d随机处死6只,测肺系数,取肺组织病理切片行HE和Masson染色,观察肺泡炎和纤维化程度,测肺组织羟脯氨酸含量,免疫组化法检测Fizz1在肺组织中的表达情况。结果:干预组各时期肺纤维化程度均较模型组轻。Fizz1表达呈动态性变化,第7天表达最高,14 d,28 d表达减弱。干预组各时期Fizz1表达水平较模型组降低,其中罗格列酮和强的松联合干预组早期对Fizz的下调水平更大。结论:Fizz1的表达上调可能参与博来霉素诱导的肺纤维化形成;罗格列酮、强的松均可下调Fizz1表达减轻博来霉素诱导的肺纤维化程度,减少肺组织胶原的沉积,提示Fizz1可成为肺纤维化治疗的新靶点,罗格列酮和强的松联用治疗较单用强的松效果更好,对Fizz1的下调水平更大。     

虫草对肺部疾病治疗的研究进展

肺纤维化、慢性阻塞性肺病和哮喘是人类主要的呼吸系统疾病,它们均以肺部或呼吸道的慢性炎症为特征,当前的治疗方法尚不理想并伴随着很多的副作用,人们迫切需要一种更安全的替代疗法。冬虫夏草是我国传统的名贵药用真菌,被广泛用来治疗多种肺部疾病。近年来,冬虫夏草对肺部疾病治疗作用的研究取得了较大进展,本文综述了冬虫夏草、其无性型中国被毛孢(Hirsutella sinensis或Ophicordyceps sinensis)和其他相关虫草及其提取物对肺纤维化、慢性阻塞性肺病、哮喘等肺部疾病治疗作用的研究进展,并介绍了其作用机制的研究成果。     

综述: 衰老及相关疾病细胞分子机制研究进展

人类及其他生物随时间推移逐渐发生细胞功能丧失,即细胞衰老.这个过程如突显在某个组织器官,则可引起这个组织和器官的衰老性疾病.然而,最近的研究表明,哺乳动物在出生之前胚胎发育的生理条件下,即已经出现细胞和组织的复制性衰老现象.机制研究显示多种分子从细胞(核)内外引起生理性和应激性细胞复制性衰老.而自然界中某些生物随时间推移生命力增强、并不发生衰老.这些现象的分子机制,还有如发生在脑及代谢性疾病中的非复制性细胞衰老等,都还是个谜.本文就近期衰老的机制、细胞衰老的类型以及某些衰老相关疾病的分子基础的最新研究进展做一个扼要综述.论文包含以下几个部分:a.细胞衰老的定义、分类和机制;b.生理性衰老:发育中程序化衰老;c.内环境稳态与组织器官衰老;d.一型细胞复制性衰老及相关疾病:端粒长度与预测衰老及肿瘤预后、特发性肺纤维化、高血压;e.二型非复制性细胞衰老及相关疾病:帕金森病、糖尿病;f.衰老与长寿的物种多样性.     

三七总皂苷对肺纤维化小鼠血清中Ⅳ-C型胶原透明质酸的干预作用

目的:研究三七总皂苷对小鼠肺纤维化血清中Ⅳ-C型胶原及透明质酸的的影响.方法:C57BL/6雄性小鼠60只,分为三七总皂苷高、中、低剂量组,强的松组.模型组,假手术组,每组10只.除假手术组外其余各组小鼠气管内一次性滴注盐酸博莱霉素,假手术组小鼠气管内一次性滴注等体积的生理盐水.造模后第2天开始给药,持续到处死动物的前一天.三七总皂苷高、中、低剂量组分别为120、60、30mg/kg/d,强的松组为0.56mg/kg,假手术组、模型组分别灌服等体积的生理盐水.于28d后处死,观察比较各组小鼠血清中Ⅳ-C型胶原及透明质酸的含量.结果:模型组小鼠肺组织中Ⅳ-C型胶原、透明质酸含量均明显高于假手术组(P<0.01),与模型组相比,三七总皂苷高中低剂量组均能降低小鼠血清中Ⅳ-C型胶原、透明质酸舍量,其中中、高剂量组的降低作用较为显著(P<0.01).结论:三七总皂苷可通过降低肺纤维化小鼠细胞外基质含量而发挥治疗肺纤维化作用.     

内源性和外源性一氧化氮对正常和滴注博莱霉素大鼠肺泡巨噬细胞生存的调节

分别用一氧化氮（nitric oxide,NO）供体硝普钠（sodium nitroprusside,SNP）和前体L-精氨酸（L-arginin,L-Arg）孵育来自正常大鼠（alveolar macrophages from normal rats,normal AMs）和滴注博莱霉素大鼠的肺泡巨噬细胞（alveolar macrophages from BLM-treated rats,BLM AMs）,以探讨NO对不同状态细胞生存的调节。用凋亡和细胞周期评价细胞生存,细胞内Bcl-2和Bax蛋白含量探讨其分子机制。结果如下：（1）BLM AMs的凋亡多于normal AMs;G0／G1期BLM AMs数少于normal AMs;S＋G2M期BLM AMs数与相应的normal AMs数问的差异无统计学意义;（2）与normal AMs相比,BLM AMs内Bcl-2下调,Bax上调;（3）与相应的对照比,SNP和L-Arg能诱导normal AMs和BLM AMs凋亡;L-Arg仅能增加S＋G2M期BLM AMs数;（4）SNP和L-Arg诱导normal AMs内Bcl-2下调和Bax上调,但不能使BLM AMs内的Bcl-2和Bax发生上述变化;（5）L-Arg下调BLM AMs内的Bax。上述结果显示：NO能诱导BLM AMs和normal AMs凋亡;Bcl-2和Bax与NO诱导的normal AMs凋亡有关,而与NO诱导的BLM AMs的凋亡无关,提示NO诱导normal AMs和BLM AMs分子机制不同;内源性NO促进BLM AMs增殖,这可能与其下调Bax有关。