全文获取类型
收费全文 | 706篇 |
免费 | 51篇 |
国内免费 | 322篇 |
出版年
2024年 | 2篇 |
2023年 | 30篇 |
2022年 | 28篇 |
2021年 | 27篇 |
2020年 | 26篇 |
2019年 | 30篇 |
2018年 | 26篇 |
2017年 | 16篇 |
2016年 | 22篇 |
2015年 | 31篇 |
2014年 | 49篇 |
2013年 | 53篇 |
2012年 | 45篇 |
2011年 | 76篇 |
2010年 | 52篇 |
2009年 | 58篇 |
2008年 | 82篇 |
2007年 | 46篇 |
2006年 | 39篇 |
2005年 | 47篇 |
2004年 | 53篇 |
2003年 | 45篇 |
2002年 | 37篇 |
2001年 | 38篇 |
2000年 | 17篇 |
1999年 | 20篇 |
1998年 | 16篇 |
1997年 | 15篇 |
1996年 | 5篇 |
1995年 | 2篇 |
1994年 | 12篇 |
1993年 | 9篇 |
1992年 | 5篇 |
1991年 | 2篇 |
1990年 | 1篇 |
1989年 | 7篇 |
1988年 | 3篇 |
1987年 | 1篇 |
1985年 | 1篇 |
1983年 | 1篇 |
1982年 | 1篇 |
1981年 | 2篇 |
1965年 | 1篇 |
排序方式: 共有1079条查询结果,搜索用时 109 毫秒
91.
目的:构建携带突变Kras基因,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的重组真核表达载体,并导入两种不同的肝细胞株中表达。方法:PCR扩增突变Kras目的基因,将该全长基因定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒载体。并利用脂质体转染人肝癌细胞株Huh7.5和鸡肝癌细胞株LMH,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察Kras-EGFP融合蛋白在细胞中的表达;用WesternBlotting方法验证Kras蛋白水平的表达。结果:酶切和测序证实pEGFP—N1-Kras重组质粒构建正确,将EGFP报告基因融合在突变的Kras基因的3’端;在Huh7.5和LMH中均观察到了绿色荧光,转染率分别为19%和53%;WesternBlott—ing也检测到融合蛋白的表达。结论:通过基因克隆方法成功构建了pEGFP—N1-Kras重组质粒载体,并且在Huh7.5和LMH中均稳定表达,为下一步筛选针对突变Kras基因的靶向药物奠定了基础。 相似文献
92.
93.
叶片和树皮绿色组织是杨树两类重要的光合组织,分析其光合特征对温度升高的响应能够全面了解这一植物在适应气候变暖过程中的光合生理变化。本研究设置3个温度梯度(白天温度/夜间温度)23℃/18℃,28℃/23℃及33℃/28℃,分别从光合作用、叶绿素荧光特性等方面研究杨树(Populus alba×Populus berolinensis)叶片与树皮绿色组织对温度升高的响应及二者存在的差异。研究结果表明,随着温度升高,树皮绿色组织和叶片叶绿素含量没有发生明显变化,但树皮绿色组织叶绿素a/b的值随着温度升高明显降低。温度升高对叶片和树皮绿色组织的光合作用产生重要影响,叶片净光合速率(P_n)、光合效率(PE)、叶片气孔导度(G_s)及蒸腾速率(T_r)随着温度升高显著增强,但水分利用效率(WUE)却显著下降。树皮绿色组织净光合速率和光合效率具有和叶片相一致的反应,随着温度升高明显增强,但其它光合气体交换指标未发生显著变化。叶片和树皮绿色组织叶绿素荧光参数对温度升高响应基本一致,光系统Ⅱ实际光化学效率(Φ_(PSⅡ))、光化学淬灭(qP)、电子传递速率(ETR)及非光化学淬灭(NPQ)在33℃处理均表现为明显地降低,但二者光系统Ⅱ最大荧光效率(F_v/F_m)随着温度升高没有发生降低现象。本研究的研究结果表明气孔因素是导致杨树树皮绿色组织和叶片P_n随着温度升高而增大的主要原因。 相似文献
94.
95.
用共聚焦激光扫描显微镜观测GFP标记的内生固氮菌Klebsiella oxytoca SA2侵染水稻根 总被引:9,自引:0,他引:9
用高效绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)突变体EGFPmut2的基因标记内生固氮菌--产酸克雷伯氏菌(Klebsiella axytoca (Fluegge)Lautrop)SA2,用标记菌接种限菌培养条件下生长的水稻(Oryza sativa L.)幼苗,在接种后1、2、4 、8、12、16和21d,用共聚焦激光扫描显微镜对水稻鲜根进行光学切片,显示了标记菌从水稻根成熟区表面向根内入侵的过程。定殖在根表面的标记菌主要从侧根伸出的位置侵入侧根皮层,从邻近发生侧根的位置进入内皮层和维管柱。SA2还能从初生根成熟区无侧根伸出的位置侵入皮层向维管柱迁移。SA2入侵水稻根引发了水稻根局部的过敏反应以阻滞细菌地下海主侵,表现为侵入根内的细菌周围的根细胞细胞壁变厚,在蓝光下发出很强的黄绿荧光。 相似文献
96.
97.
中国飘拂草属植物果皮微形态 总被引:1,自引:0,他引:1
利用扫描电子显微镜对国产莎草科飘拂草属4组18系42种1变种植物果皮微形态特征进行观察,并作了系统描述。研究表明,飘拂草属植物在纹饰类型,超微结构等方面存在着明显的种间差异,具有分类学意义。根据纹饰及微形态特征的不同,支持将褐鳞飘拂草和知风飘拂草各自作为独立的种。依照果皮纹饰的差异,飘拂草属可分为4种类型(1)瘤(疣)-网状复合纹饰;(2)瘤(疣)状纹饰;(3)网状纹饰;(4)脊-疣状复合纹饰。其中(1)和(3)类型的纹饰根据网脊曲直不同各自又可分为2个亚型。 相似文献
98.
以含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pSK100-DS、含切割对虾杆状病毒基因的核酶Rz1的质粒pRGRzl、含核酶Rz2的质粒pRGRz2和转基因空质粒pcDNA3为基础,把绿色荧光蛋白GFP基因克隆于pcDNA3的SV40启动了下面,由SV40启动子控制,含四个两种核酸基因的四联体克隆于pcDNA3的多克隆位点区,由T7启动子控制,构建成含两个Rz1、两个Rz2和GFP基因的转基因质粒pGTR,以用于转基因抗病毒对虾的研究。 相似文献
99.
以绿色荧光蛋白(GFP)为报告分子, 通过构建DHN1-mGFP4融合蛋白表达载体, 研究了渗透胁迫条件下脱水蛋白DHN1的表达及其亚细胞分布的动态变化. 采用PCR方法在脱水蛋白基因dhn1两端引入XbaⅠ和BamHⅠ限制性内切酶位点, 克隆到质粒pBIN-35S mGFP4, 构建DHN1-mGFP4融合蛋白表达载体, 并采用基因枪转化猕猴桃(A. delicisoa)悬浮细胞. 培养10 h后观察到高效表达的GFP绿色荧光, 绿色荧光只出现在细胞核内. 提高培养介质渗透势后, 可以诱导脱水蛋白向细胞质分布(主要集中在质膜周围), 并且增加介质渗透势可以明显缩短细胞质出现绿色荧光的时间. 蛋白合成抑制剂环己亚胺能够抑制细胞质绿色荧光的出现, 暗示细胞质出现的脱水蛋白是诱导产生的结果. ABA可以明显促进细胞质绿色荧光的出现, 并且随着介质渗透势的升高迅速缩短细胞质绿色荧光的出现时间. 相似文献
100.