生物技术在薯蓣皂苷及其苷元生物合成中的应用

薯蓣皂苷及其苷元来源于药用植物盾叶薯蓣块茎,是合成甾体激素类药物的重要原料.由于野生盾叶薯蓣资源日渐枯竭及薯蓣皂苷及其苷元制备生产中的严重污染等问题,使其开发和生产面临严重的挑战.本文探讨了薯蓣皂苷及其苷元生产研究进展及存在的问题,概述了薯蓣皂苷及其苷元的代谢途径研究进展,展望了生物技术在薯蓣皂苷及其苷元生物合成中的应用前景.     

蒺藜总皂苷对阿尔茨海默病模型大鼠记忆能力的影响

本实验观察蒺藜总皂苷（GSTT）对三氯化铝（A1C13）诱导的AD模型大鼠学习记忆能力的影响,为GSTT防治AD提供实验依摧。SD雄性大鼠60只,随机分为对照组、AD模型组、脑复康组、GSTT大剂量组、GSTT中剂量组和GSTT小剂量组,每组10只。AD模型组、脑复康组、GSTT各剂量组每日上午给予A1C13灌胃,每日1次,连续9周。脑复康组、     

人参皂苷Rbl、Rc对大鼠胚胎脑发育及GPx基因表达的影响

目的 观察人参皂苷Rbl、Rc对SD大鼠胚胎脑发育及谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GPx)基因表达的影响.方法 实验选用全胚胎体外培养方法,根据Van Maele-Fabry等制定的形态学分析系统进行形态学检测,实验随机分为对照组、人参皂苷Rbl(10,45和90ug/ml)组和人参皂苷Rc(10,45和90ug/ml)组,采用半定量RT-PCR分析人参皂苷Rbl和人参皂苷Rc对胚胎谷胱甘肽过氧化物酶基因表达的影响.结果 与对照组比较,人参皂苷Rbl(10,45和90ug/ml)组胚胎脑、前脑、中脑与后脑的长度值没有统计学意义(P>0.05);与对照组比较,人参皂苷Rc(10,45和90ug/ml)组前脑、中脑与后脑的长度值显著增加(P<0.05).RT-PCR结果显示,人参皂苷Rbl(10,45和90ug/ml)组cGPx与phGPx mRNA的表达水平与对照组比较均没有统计学意义(P>0.05),而pGPx mRNA的表达水平在浓度50和100ug/ml时显著增加(P<0.05).人参皂苷Rc(10,45和90ug/ml)组cGPx与phGPx mRNA的表达水平与对照组比较均没有统计学意义(P>0.05),而pGPx mRNA的表达水平在各种浓度的Rc作用后都增加,且在溶度10和45ug/ml浓度时增加显著(P<0.05).结论 一定剂量的人参皂苷Rc能促进胚胎脑的发育,一定剂量的人参皂苷Rbl、Rc能明显增强胚胎脑pGPx mRNA的表达水平.     

酵母菌半连续转化人参皂苷Rb1的条件优化

以单因素实验为基础,通过多因素方差分析实验对人参皂苷半连续转化的条件进行优化,选出最佳条件组合,得到最佳的补料方式,补料浓度为6%,补料体积为24mL,补料周期为12h,在此条件下人参皂苷Rb1生物转化达33.5%左右。在最佳补料条件下进行人参皂苷酵母菌转化,其稳定性好,转化率高,对工业生产有积极的推动作用。     

蒺藜皂苷对动脉粥样硬化大鼠动脉壁ICAM-1、VCAM-1、PPARα、PPARγ基因表达的影响

观察全草蒺藜皂苷（tribu saponin from Tribulus terrestris,STT）对实验性动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）大鼠动脉壁中ICAM-1、VCAM-1、PPARα和PPARγ基因表达的影响,以探讨STT抗AS的机制。应用高脂饲料饮食配合注射维生素D,建立SD大鼠AS模型,并设立正常组、模型组、辛伐他汀组和蒺藜皂苷低、中、高剂量组。采用半定量RT-PCR的方法检测各组动物动脉壁中ICAM-1、VCAM-1、PPARα和PPARγ基因的表达,分析造模及各给药大鼠ICAM-1、VCAM-1、PPARα和PPARγ基因表达的变化。与正常组相比,模型组ICAM-1和VCAM-1基因的表达量明显增加（P〈0．01）,而PPARα和PPARγ基因的表达量明显降低（P〈0．01）;与模型组相比,辛伐他汀及各STT药均能降低ICAM-1和VCAM-1基因的表达量（P〈0．01～P〈0．05）,并能增加PPARα和PPARγ基因的表达量（P〈0．01）。提示STT能下调实验性AS大鼠动脉壁ICAM-1和VCAM-1基因的表达及上调PPARα和PPARγ基因表达,这可能是STT抗AS的作用机制之一。     

人参总皂苷对人红白血病细胞株（K562）中STAT5表达的影响

旨在探讨人参总皂苷对K562细胞STAT5表达的影响.MTT法显示TSPG对K562细胞增殖抑制程度呈剂量与时间依赖性增加,且呈正相关关系.流式细胞术表明TSPG能阻止K562细胞从G0/G1期向S、G2/M期移行.激光共聚焦显微镜观察可见,TSPG 200 mg/L作用K562细胞24 h,胞浆中的STAT5荧光强度增加,而胞核内STAT5荧光强度减弱.Western blotting结果显示,TSPG作用K562细胞6 、24 、48 h,胞核中STAT5表达较对照组减少,TSPG作用72 h胞核蛋白中STAT5表达增加;TSPG作用K562细胞6 、12、24、48、72 h,胞浆内STAT5表达增加.TSPG能减少K562胞核中STAT5的表达,这可能是TSPG抑制K562细胞增殖的作用机制之一.     

九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡的实验观察

目的：探讨九节龙皂苷对胶质瘤SHG-44细胞潜在的治疗作用及其机制。方法：用四基偶唑蓝（MTT）法检测5、7．5、10、12．5、15、20、40、80mg／L九节龙皂苷作用6、12、24、72h对人胶质瘤SHG-44细胞活性的影响和细胞流式术检测SGH-44细胞调亡情况;Hoeehst33258荧光染色法观察细胞形态的变化;琼脂糖凝胶电泳检测SHG-44细胞DNA的完整性。结果：九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞生长活性呈浓度-时间依赖性,并诱导细胞发生明显的凋亡,细胞核发生浓聚边集,DNA呈凋亡特异性“梯状”分布。结论：九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞的生长活性,能引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用。     

盾叶薯蓣总皂苷超声提取及动力学

考察了乙醇体积分数、溶剂用量、超声时间、超声功率和超声频率对盾叶薯蓣总皂苷提取率的影响,研究了以体积分数70%乙醇溶液或水作溶剂从盾叶薯蓣中超声提取总皂苷的动力学模型。结果表明,在扩散过程中超声提取薯蓣总皂苷的动力学模型满足非定常扩散方程,相关系数为r=0.95,最佳超声时间为40min。     

三七皂苷Rg1对tPA和PAI-1活性的调节作用

探讨三七皂苷Rg1对组织型纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)活性的调节作用。运用发色底物方法测定三七皂苷Rg1在体外和静脉注射对家兔血浆纤溶酶原激活物(tPA)和血浆或血小板释放的纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)水平的影响。结果表明,三七皂苷Rg1在体外呈浓度依赖性明显抑制血浆PAI-1活性,同时提高血浆tPA活性;30和60 mg/kg的三七皂苷Rg1静脉注射显著抑制血浆PAI-1活性,提高血浆tPA活性,同时降低凝血酶激活的血小板所释放的PAI-1水平。本实验提示三七皂苷Rg1能抑制PAI-1活性,同时升高tPA活性可能是其抗血栓作用的分子机制之一。     

蒺藜总皂苷灌胃大鼠体内海柯皂苷元的代谢与分布

采用HPLC-UV和LC-MS方法相结合测定分析了海柯皂苷元在蒺藜总皂苷灌胃Sprague-Dawley(SD)大鼠体内不同器官组织分布动态变化。结果表明在大鼠胃肠中蒺藜总皂苷中有部分海柯皂苷水解为海柯皂苷元;在从6到32 h灌胃蒺藜总皂苷的大鼠肝脏中可检测到海柯皂苷元的存在,证明有一定量海柯皂苷元从大鼠胃肠道吸收进入体内;对于海柯皂苷元检测,API-MS检测方法较UV方法有更高的灵敏度,且有好的专属性。