一株高温高效产氢细菌的分离及产氢特征研究

实验组采用非选择性培养、选择性培养、液体培养和固体培养一整套培养方法,结合平面厌氧操作技术与培养瓶厌氧技术,从混合产氢培养液中分离得到1株较好的产氢细菌。细菌需氧实验证明:此细菌为厌氧细菌;Gram实验和芽孢染色实验表明:此菌为革兰氏阴性杆菌,无芽孢。在不同的pH值、不同金属离子与温度下,于间歇式条件下测定其产氢量。实验结果表明:此菌株对pH值敏感,其最适产氢pH值为5.5,最适温度在45℃左右,在最适宜条件下产气量在1000 mL/(5 g葡萄糖),产气周期在15 d左右。金属离子影响实验表明:缺少铁和镁离子对此产气菌株的产气量有明显影响,此菌株对铜离子(0.1 g/L)无抗性。     

棘胸蛙（Quasipaa spinosa）对重复急性冷暴露的生理应激与适应耐受

为探讨棘胸蛙(Quasipaa spinosa)这一溪源性两栖类对环境温度极端变化做出的生理响应与适应机制,测定了该物种在反复遭受急性冷暴露(4℃,12 h)过程中其非特异性免疫反应、氧化还原状态以及热休克蛋白70(Hsp70)mRNA表达的变化,结果发现:棘胸蛙在初次冷暴露过程中外周血细胞吞噬活性(第4小时和第12小时;P0.05)、脾巨噬细胞呼吸爆发强度(第4小时和第12小时;P0.05)以及胃溶菌酶活力受到显著抑制(第12小时;P0.05);当蛙返回到22℃环境12 h后3种免疫指标均恢复到初始和对照组水平(P0.05)。经过连续7 d冷暴露后,除溶菌酶外,血细胞吞噬活性和脾巨噬细胞呼吸爆发强度均能恢复到初始和对照组水平(P0.05)。另外,冷暴露增加了肝脏和肾脏内丙二醛(MDA)的含量,但肾脏内MDA含量升高的幅度要明显大于肝脏;肝脏SOD活力和GSH含量也表现出急性和适应性升高,而肾脏仅SOD活力有所升高,暗示在低温胁迫状态下棘胸蛙肝脏氧自由基清除能力要强于肾脏。HSP70作为应激保护蛋白,当机体遭受冷暴露后肝脏Hsp70 mRNA表达量始终未呈现出应激性升高,反而受到显著抑制(P0.05)。综上所述,棘胸蛙在经历多次急性冷胁迫后体内部分非特异性免疫功能以及肝脏氧化防御系统可以产生不同程度的适应性改变。     

合作与参与、患者成熟度与医生的领导方式 ——互动视域下医患权利（力）运作形式四

从合作与参与的内涵着眼，就事前准备、信息共享、遵医参与、医患互动四个维度对医患的合作参与进行详尽分析，尝试将患者成熟度和领导生命周期理论运用到医患互动中。并根据四种类型的患者在不同阶段有着不同的特质和行为表现，医生选择相应的职业行为和领导方式。在对医患互动中权力运作的五种形式的核心概念进行厘清，强调了医生要多运用权威力量征服患者，并对如何管控医患双方的权力提出了深度思考。     

藻类DNA条形码研究进展

DNA barcode,又称为DNA条形码,是指利用短的标准DNA序列的核苷酸多样性进行物种的鉴定和快速识别.目前该方法在动物分类研究中应用广泛,其中线粒体的细胞色素c氧化酶亚基1(cytochrome c oxidase subunit 1,COI或cox 1)基因中的约700bp长度的一段被用来作为标准DNA片段.在陆地植物条形码研究中,生命-植物条形码联盟会(Consortium for the Barcode of Life-Plant Working Group,CBOL-Plant Working Group)近期推荐将植物叶绿体中的两个基因片段rbcL+ matK作为初步的陆生植物条形码,此组合能在70％的程度上进行植物物种的鉴别.在海藻的分类研究中,DNA条形码的应用较少,已有的研究主要集中在硅藻、红藻和褐藻,尚没有学者明确提出适合藻类的DNA条形码.总结了能够作为藻类DNA条形码的序列特点、应用流程及分析方法,综述了DNA条形码在藻类中的研究现状和存在的问题,展望了藻类DNA条形码的应用前景.     

低温暴露和恢复对棘胸蛙雌性亚成体生存力及能量物质消耗的影响

棘胸蛙(Paa spinosa)亚成体在人工驯养过程中容易出现越冬困难,非正常的冬眠可能会影响次年的繁育。以雌性棘胸蛙亚成体(1—2龄)为对象,研究该蛙在人工低温暴露(4℃保持90 d)条件下的生存力、机体能量物质消耗、肥满度、脏器系数的变化特征,以及这些参数在温度恢复至正常(由4℃缓慢升至22℃后保持7 d)后的变化情况。结果表明,该蛙在低温暴露过程中存活率逐渐降低,恢复期无死亡。肥满度(K)和体重/体长(Kwl)在低温暴露期间有逐渐升高的趋势,但两者在经历恢复期(22℃,7 d)后均恢复至初始水平(P>0.05)。胃系数和脾系数在低温暴露期呈明显的上升趋势(P<0.05),且两者在第90天均显著大于初始水平(P<0.05)。恢复期肝系数显著减小(P<0.05)。在低温暴露期各阶段肝脏和肌肉脂肪含量与初始无统计差异(P>0.05);肝脏水分在低温暴露期间呈明显下降趋势(P<0.05),而肌肉水分则与之相反;肝脏非脂肪干物质含量呈显著上升趋势(P<0.05),而肌肉非脂肪干物质则呈相反趋势。肝糖原含量随暴露时间的延长呈现显著上升趋势(P<0.05),低温暴露第60天和第90天肝糖原含量与初始相比分别增加59.4%和60.1%,而恢复期肝糖原含量则降至初始水平(P>0.05)。根据结果可以看出,在低温暴露过程中肝脏和肌肉脂肪含量变化不显著,同时肥满度、肝系数、肝脏非脂肪干物质和肝糖原含量均有不同程度的升高,而肌肉非脂肪干物质则显著减少(P<0.05),说明该蛙雌性亚成体在低温期主要消耗的能量物质不是脂肪而是肌肉非脂肪干物质,或者肌肉非脂肪干物质在组织间发生了大量转运。     

哇巴因对人血管内皮细胞死亡和钠泵α1、β1,亚单位表达的影响

目的：研究钠泵抑制剂哇巴因（ouabain）对人血管内皮细胞死亡的影响及其作用机制。方法：以脐静脉内皮细胞系ECV304为靶细胞,应用MTT实验检测哇巴因对细胞生长的作用 采用Hoechst33342/PI双荧光染色、透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳等分析细胞死亡特征,半定量RT-PCR法检测钠泵α1和β1亚单位mRNA的表达。结果：哇巴因以浓度和作用时间依赖的方式抑制ECV304细胞生长。10μmol/L哇巴因作用24 h,引起细胞坏死 0.1μmol/L哇巴因作用24～48 h,细胞明显脱落,细胞间连接丧失,细胞出现染色质凝集、分布于核膜内缘、DNA裂解等凋亡特征。哇巴因能明显上调ECV304细胞钠泵α1亚单位mRNA的表达,下调β1亚单位mRNA表达,且两者均呈时间依赖性。结论：哇巴因能诱导人血管内皮细胞ECV304死亡,其上调钠泵α1亚单位表达、下调β1亚单位表达,可能与亚单位介导信号传递、降低细胞黏附有关。     

神经生长导向因子SLIT2抑制结肠癌细胞迁移的作用研究

目的:研究SLIT2基因对结肠癌细胞迁移能力的影响。方法:通过western blot技术检测SLIT2在各种结肠癌细胞系中的表达,采用小干扰RNA转染技术,在低转移细胞系RKO中沉默SLIT2基因表达,并采用PCR和western blot技术验证其干扰效率。采用质粒转染技术,在高转移细胞系LOVO中上调SLIT2基因表达后,通过Transwell迁移实验和划痕愈合实验检测SLIT2表达变化对结肠癌细胞系迁移能力的影响。结果:SLIT2在高转移细胞系LOVO和HCT116中表达明显低于低转移细胞系RKO和HT-29。在低转移细胞系RKO中敲减SLIT2后,Transwell结果显示细胞的迁移能力得到了明显增强(P0.05)。在高转移细胞系LOVO中过表达SLIT2后,细胞的划痕愈合能力和迁移能力则均受到明显抑制(P0.05)。结论:神经生长导向因子SLIT2的表达与结肠癌细胞的迁移潜能相关,体外实验表明SLIT2可抑制结肠癌细胞系LOVO、RKO的迁移能力。     

重症肌无力风险基因挖掘

目的:挖掘重症肌无力(Myasthenia gravis,MG)可能的风险基因。方法:通过人工挖掘在Pub Med数据库收集重症肌无力风险基因,通过Gene数据库获取重症肌无力风险基因编号,用以表示基因或者其相应的蛋白。应用基因功能分析软件DAVID(http://david.abcc.ncifcrf.gov/)对重症肌无力风险基因进行KEGG通路富集分析,挖掘重症肌无力风险通路,进而对任意两个通路进行关联分析。应用基因功能分析软件DAVID的Gene Ontology,对MG风险基因进行功能注释,以P0.01来判定注释是否有显著意义。结果:(1)本研究挖掘出97个重症肌无力的风险基因,KEGG基因富集分析共筛选出44条与重症肌无力显著相关的通路,主要包括多种自身免疫性疾病相关通路、信号转导相关通路、肿瘤相关通路、抗原的加工提呈通路等等。(2)以上44条风险通路两两通路间均具有相关性(P.0.01)。结论:本研究共挖掘出44条重症肌无力风险通路,8个重症肌无力风险基因,分别为:NF-kB、TNFR、MEK、AP-1、Raf、MEK1/2、MSK1、TAPBP。其中,MEK同时出现在多个风险通路中,考虑其风险性更高。     

利用改进的MutMap方法克隆水稻雄性不育基因

通过对籼稻黄华占EMS(甲磺酸乙酯)诱变, 筛选得到一隐性核不育的水稻雄性不育突变体osms55, 遗传分析表明该突变体为单基因控制的隐性核不育, 采用高通量的Illumina Infinium iSelect SNP(50 K)芯片检测技术鉴定该突变体的遗传背景, 确认该突变体的遗传背景与黄华占一致。文章利用改进的MutMap方法成功克隆该雄性不育基因, 突变位点与突变表型的共分离分析表明LOC_Os02g40450(MER3)是控制osms55突变体雄性不育的基因, 该基因的剪切识别位点发生变异后导致剪切异常, 造成第5外显子缺失15个碱基, 从而产生雄性不育。改进的MutMap方法无需精确组装的野生型基因组序列作对照, 而是通过将定位群体中有突变表型植株的DNA pool和野生型植株DNA的重测序结果分别与日本晴参考基因组进行比对, 然后再比较突变体和野生型的差异SNP来确定候选基因, 该方法大大降低了野生型基因组测序和组装成本, 进一步扩大了MutMap方法的应用范围。     

烟草根际土壤真菌多样性的研究

烟草土传病害发生普遍,危害严重。为深入了解烟草根际土壤真菌区系与土传病害间的相互关系,选取黑龙江、山东、广西和云南四省区的代表性烟田,开展了烟草根际土壤真菌多样性的研究。对采自上述四省区12个县市的224份烟草根际土壤样品进行了真菌的分离和培养,共分离获得1,278株真菌,通过形态学特征鉴定出真菌25属86种。其中接合菌门4属6种,子囊菌门1属1种,无性型真菌20属79种。通过分析发现,烟草根际土壤中的优势真菌种群及其菌株数量所占分离真菌总菌株数量的比例分别为：青霉属Penicillium 16.74%,木霉属Trichoderma 14.32%,镰孢菌属Fusarium 13.54%和曲霉属Aspergillus 11.50%。在12个采样地点中,山东诸城的多样性指数（H￠=2.0666）和均匀度指数（J=0.6898）最高,云南玉溪的丰富度指数（R=4.0687）最高。不同采样地点的烟草根际土壤真菌种群的相似性水平也存在差异,其中云南永胜和大理的烟草根际土壤真菌种群的相似性系数最高（Cj=0.9375）,山东沂水和云南玉溪间的相似性最低（Cj=0.5217）。