麻疯树核糖体失活蛋白Curcin2的原核可溶性表达及其抗真菌活性研究

Curcin2是麻疯树幼苗在真菌侵染、干旱及高低温胁迫下诱导产生的一种核糖体失活蛋白.采用分子克隆的方法,从麻疯树基因组中扩增到Curcin2成熟肽编码基因,分别连接到质粒载体pGEX-6p-1、pMAL-c5E上,转化大肠杆菌最终获得重组菌PGC(pGEX-6p-1-curcin2)和PMC(pMAL-c5E-curcin2).在不同温度、IPTG浓度、时间诱导下,Curcin2在重组菌PGC中均以包涵体形式表达,在重组菌PMC中主要以可溶性融合蛋白形式表达,且蛋白质的表达量与诱导条件相关.重组菌PMC表达可溶性curcin2的优化条件为:温度28℃,IPTG 0.3mmol/L,时间8h,此条件下目的蛋白占总蛋白表达量的30.6％,1L培养物中可获得19.74mg电泳纯的重组蛋白.重组蛋白可被MBP TrapTM HP柱亲和纯化并与curcin抗体发生抗原抗体反应.体外抗真菌活性实验表明,纯化后的curcin2融合蛋白有抑制真菌生长作用,且对小麦赤霉、油菜菌核的抑制作用强于curcin.此蛋白的获得为其相关功能的研究奠定了基础.     

基于多来源数据分析河南省刺鱼目新纪录种——中华多刺鱼

2015年10月,河南省鱼类资源调查队在河南省林州市进行鱼类资源普查时,采集到30尾刺鱼目Gasterosteiformes鱼类,综合采用形态学和分子系统学的方法确定其为中华多刺鱼Pungitius sinensis,为河南省新纪录种,标本保存于河南师范大学水产学院鱼类标本室。本文对该鱼的主要鉴定特征、分布区域、可能的来源、生存环境等做了初步分析。该鱼在我国北方(辽宁、黑龙江、吉林、天津、河北等省市)及韩国、日本北方均有分布,记录最南分布区域为北京市,为北京市二级保护鱼类。此次报道进一步扩大了该鱼最南端分布界限,为进一步开展该鱼的基础研究提供了重要参考资料。     

新生儿无乳链球菌分离株全基因组重测序分析

无乳链球菌是新生儿细菌感染的主要病原菌之一,严重危害新生儿的健康。目前,国内鲜有从基因组的角度对无乳链球菌进行深入研究。本研究对一株新生儿无乳链球菌分离株SA1507进行了全基因组重测序和生物信息学分析。与参考基因组进行比对,SA1507存在大量的变异位点,比对发现SNP 8 850个,大多数位于外显子区域;Indel 253个,大多数位于基因上游。对SNP和Indel进行COG聚类分析和KEGG通路分析,分别得到2 272个COG功能条目和1 363个KEGG通路条目。测序与分析将为进一步研究无乳链球菌的变异,感染和耐药性等奠定基础。     

植物多倍体及其应用

对多倍体的形成途径、操作方法、形态学特征、细胞学特性以及在植物育种上的应用进行了综述并对存在的问题和对策进行了探讨。     

丙型肝炎病毒的分子生物学

本文根据国内外最新资料,对丙型肝炎病毒基因组结构、各区功能,病毒粒子的形态、病毒分型和变异以及实验室诊断和急待解决的问题作了较为详细的介绍。     

蕲蛇酶注射液治疗急性脑梗死Ⅱ期临床研究总结

蕲蛇酶注射液治疗急性脑梗死Ⅱ期临床研究总结赵玉宾李美琳曹美英慕容慎行季晓林蕲蛇酶注射液含有从蕲蛇毒中分离获得的三个类凝血酶同功酶。临床前实验证明,本品具有抗血小板聚集、降低血浆纤维蛋白原含量,延长部分凝血活酶时间,对抗动物实验性脑血栓及动静脉血栓的效...     

现代人类起源的“夏娃”理论

现代人类起源的“夏娃”理论龚缨晏（杭州大学历史系３１００２８）从上个世纪开始,人类一直在寻求人类起源问题的科学答案,并形成了许多理论。最近,国外一些科学家提出了一个新的现代人类起源理论,被称为“夏娃”理论,从而引发了一场颇为热烈的讨论。“夏娃”理论是...     

细胞分裂时期检索表

在教学过程中,尽管老师们已经引导学生对有丝分裂和减数分裂过程以及有丝分裂和减数分裂各时期进行多方面的比较,指     

脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的优化研究

目的探索A群、C群脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的适宜配方。方法通过筛选改良培养基(配方2)中酸水解酪蛋白替代培养基配方1中原50%盐酸酪蛋白水解液制备相应的培养基,培养A群、C群脑膜炎球菌一定时间后,以收获的细菌浓度和复合多糖量来确定培养基的配比,并比较该培养基在不同温度条件下培养细菌的结果。结果在A群、C群脑膜炎球菌多糖疫苗不同培养基的细菌培养过程中,用酸水解酪蛋白制备的改良培养基(配方2)培养的细菌浓度和多糖收获量均高于其他培养基(配方1和配方3),用酸水解酪蛋白培养基能提高脑膜炎球菌的产量。结论以酸水解酪蛋白为主要原料(配方2)的改良培养基能作为流脑A群、C群细菌的最适培养基,且细菌在(37±0.2)℃培养情况良好。     

结核分枝杆菌同源重组基因敲除系统的构建和应用

【目的】结核分枝杆菌同源重组效率很低,突变株的构建需要半年之久。本研究的目的在于构建一种用于在结核分枝杆菌中进行基因快速敲除、且易于筛选的高效同源重组系统。【方法】野生型结核分枝杆菌转化含有SacB反向选择标记、且能诱导表达两种同源重组酶gp60和gp61的质粒pSL002。然后分别将靶基因的两个同源臂克隆入到含有hyg(潮霉素)抗性基因和gfp(绿色荧光蛋白)基因的重组质粒pSL001中,再将靶基因同源臂-loxP-hyg-gfp-loxP片段从pSL001切下,转化含有pSL002的野生型结核分枝杆菌,一步得到双交换突变株。再将含有SacB反向选择标记、且表达Cre重组酶的质粒pSL003转化入结核分枝杆菌双交换突变株中,切除两个loxP之间的hyg抗性基因和gfp基因,得到无痕缺失突变株。最后利用含有2%蔗糖的琼脂糖平板去除含有SacB反向选择标记的质粒pSL002和pSL003。【结果】在结核分枝杆菌中成功构建了高效同源重组系统,利用该系统构建了rv1364c、pstP跨膜区、pstP胞外区三个突变株,得到双交换突变株的效率为25%-62.5%,从双交换突变株得到无痕缺失突变株的效率为100%。通过gfp作为荧光标记基因,利用NightSea BlueStar蓝光手电筒和滤光眼镜,可以对平板上的基因缺失株直接进行快速判定。【结论】该同源重组系统利用gp60和gp61重组酶,在时间上将在结核分枝杆菌中无痕缺失突变株的构建从6个月缩短到3个月。这是目前为止在结核分枝杆菌中构建突变株最快且效率最高的方法,为加速分枝杆菌功能基因组的研究提供了新的遗传工具。