5种大肠埃希氏菌Col质粒接合传递实验研究

以5种61株Col~ 大肠埃希氏菌为供体,与受体E.Coli K_(12)进行接合实验,结果有16株供体菌的Col质粒传递给K_(12),占25.4％。其中NPEC、ETEC、EPEC、EIEC、EAEC的传递比率分别是8/22、 4/21、2/15、1/2、1/1。按传递方式分类,52株耐药供体菌有10株的Col质粒和耐药标记(或R质粒)发生共同传递,占19.2％,伴发Col质粒传递的耐药标记有8种,其中TC、SM、COS、KM的并发传递率较高(16—20％)。不同耐药标记菌株的Col质粒传递率范围在0—66.7％。在8株敏感菌和1株耐药菌中有6株Col质粒发生单独传递,占66.7％。实验发现4个配对组的Col质粒和R(r)质粒发生分离而独自传递。本文分析了Col质粒传递方式和耐药性的关系,同时讨论了接合传递的不同方法。为阐明和研究R~ Col~ 肠道菌的演变及其对正常菌群生态平衡的影响提供遗传学依据。     

城乡接合社区2型糖尿病患者体成分分析与血糖控制状况及影响因素研究

目的：了解城乡接合社区2型糖尿病患者的人体成分与血糖控制状况，探讨血糖控制影响因素。方法：选择2016年10-12月在北京市朝阳区王四营社区卫生服务中心招募的132例糖尿病患者作为研究对象，以糖化血红蛋白（HbA1c）＜7%和HbA1c≥7%为界点，将研究对象分为血糖控制良好组（68例）和血糖控制不佳组（64例），比较两组血糖、血脂、人体成分指标的差异，分析血糖控制不佳的影响因素。结果：132例研究对象的体质指数（BMI）、空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、总胆固醇水平（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和血压的总体达标率分别为12.9%、50.8%、51.5%、38.6%、58.3%、47.7%、59.8%、20.5%。两组患者的FPG、HbA1c、糖化血清蛋白（GSP）、胰岛素分泌指数（HOMA-β）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、HDL-C、基础代谢率（BMR）、去脂体重（FFM）、肌肉重（MM）、体脂百分比（PBF）存在显著性差异（P＜0.05）。多因素Logistic逐步回归分析结果显示，治疗策略（以生活方式干预作为参照，单种口服降糖药OR=4.565，95% CI：1.483～14.050，多种口服降糖药OR=11.312，95% CI：3.834～33.377）、HDL-C（OR=0.099，95%CI：0.022～0.444）、体脂百分比（OR=1.087，95%CI：1.022～1.157）是血糖控制不佳的影响因素。结论：城乡接合社区2型糖尿病患者的血糖和体脂控制情况欠佳，治疗策略、HDL-C、体脂百分比是血糖控制不佳的主要影响因素，应采取积极的综合措施开展干预。     

不吸水链霉菌武夷变种CK-15遗传转化体系的探索及初建

旨在对不吸水链霉菌武夷变种CK-15的遗传转化体系进行初步的探索及建立.首先对内源质粒的存在及对抗生素敏感性进行了测定,结果显示,在不吸水链霉菌武夷变种CK-15中不存在外源质粒.最终确定最适培养基为MS培养基,最适热激温度与时间为50℃热激10 min,37℃温育最适时间为2.5 h,最佳抗生素水溶液覆盖时间为16-18 h,并对转化子进行了验证.     

细菌整合性接合元件SXT/R391研究进展

SXT/R391家族是整合性接合元件中多样性最为丰富、成员最多的一个家族。SXT/R391包括保守的核基因以及可变区基因,SXT/R391保守的核心基因主要涉及SXT/R391的整合/剪切、自我接合转移、元件表达的调节。SXT/R391可变区基因的编码产物主要负责宿主对抗生素的耐药性、重金属离子抗性、生物膜形成和细菌运动能力的调节,编码毒素-抗毒素系统以阻止SXT/R391从宿主丢失。一些SXT/R391也编码限制性修饰系统、解旋酶、核酸内切酶。SXT/R391受SetCD正性调控,受SetR负性调控。SXT/R391接合转移过程不会导致其在原供体菌基因组丢失。SXT/R391可以阻止细胞获得其它密切相关的同类SXT/R391但不排斥异质性ICE获得,在SXT/R391自身编码的重组系统作用下获得的异质性ICE导致杂合ICE的产生。SXT/R391具有相当高的转移频率和宽广宿主范围,目前已经有超过40个不同类型的SXT/R391在不同种属的细菌中被发现,以弧菌为最多。已知的SXT/R391集中出现在非洲和亚洲沿海地区,且来源多为海洋细菌,表明海洋环境很可能是SXT/R391主要的贮藏库,并且经由海洋环境株向临床株扩散。日益增加的选择压力很可能加速了SXT/R391的传播。鉴于SXT/R391的转移和盛行带来的风险,卫生部门以及医学微生物科学家应对其扩散保持充分警惕。     

Fostriecin产生菌Streptomyces pulveraceus遗传转化体系的建立与优化

【目的】建立并优化链霉菌Fostriecin产生菌Streptomyces pulveraceus的遗传转化系统。【方法】以整合型质粒pSET152为出发质粒,通过供体菌E.coli ET12567/pUZ8002与受体菌Streptomyces pulveraceus进行接合转移。【结果】确定了链霉菌Streptomyces pulveraceus的最佳接合转移条件:培养基为终浓度含15%甘氨酸的MS培养基;孢子热激条件为50°C 10 min;阿伯拉霉素覆盖的时间为18 h,终浓度为20 mg/L。同时,把组成型启动子ermE+与绿色荧光蛋白基因(gfp)克隆到pSET152载体上,通过接合转移整合到该链霉菌中,gfp获得表达。【结论】建立Fostriecin产生菌的遗传转化系统,并发现甘氨酸能显著提高链霉菌的接合转移效率。     

冠窦伪尾柱虫接合过程中小核的形态发生作用

为查明有性生殖期间小核对形态发生的影响程度和范围,我们利用蛋白银染色对冠突伪尾柱虫不同交配型无小核体之间 的接合过程进行了跟踪观察。结果表明：无小核细胞的交配反应能力明显下降;接合双方第一次皮膜形态发生如常进行,但纤毛器原基分化往往出现异常;接合后体照常进入拟包囊阶段,但原有纤毛器多不从皮膜上消失。由于没有新核器形成,均不能启动第二次形态发生并于拟包囊早期解体死亡。因此,小核对于纤维接合早期及第一次皮膜改组的正常进行具有某些明显作用,其衍生的大核原基对于启动后续的发育则是绝对必要的。     

链霉菌高拷贝质粒pIJ101的分子生物学

pIJ101是一个8.9kb的高拷贝链霉菌质粒,在载体的构建和应用方面得到了广泛的应用。pIJ101具有质粒大小适中,在接合时能够自我转移和诱动染色体的能力强,具有清晰的"麻点"形成特征,并在接合时的供受体双方均携带有pIJ101时没有"进入不利"的属性。通过缺失分析,已确定了与接合转移、麻点形成、复制功能及质粒稳定性等功能区。本文对pIJ101分子生物学研究和应用的进展进行系统综述。     

重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)基因在鱼腥藻中的克隆

为了将rhG-CSF基因在鱼腥藻PCC 7120中克隆,用于制备口服制剂,利用DNA重组技术,在不改变阅读杠的前提下,将hG-CSF基因进行突变,并插入到pUC-19载体上,构建中间载体pUC=G-CSF;将pUC-G-CSF插入到pRL-489的启动子PpsbA的下游,构建穿梭表达载体pRL-G-CSF;通过三亲接合转移方法,将pRL-G-CSF转入丝状体蓝藻鱼腥藻PCC 7120内。本试验得到了有抗生素性的鱼腥藻,并用PCR技术检测到rhG-CSF基因在转基因鱼腥藻中存在。     

hGM-CSF基因穿梭表达载体的构建及其在鱼腥藻7120中的克隆

人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)作为一种造血生长因子,能够刺激T细胞和巨噬细胞增殖、成熟和分化,具有极其重要的免疫调解功能.本研究运用PCR方法,从质粒pAG-MT-8中克隆该基因,并在其5′端添加有利于在蓝藻细胞中高效表达的SD序列,然后插入到表达载体(pRL-439)强启动子PpsbA的下游,进一步与穿梭表达载体pDC-08相连构建成穿梭表达载体pDC-GM.利用三亲接合转移方法将该穿梭表达载体(pDC-GM)转入丝状鱼腥藻7120,通过相应抗生素筛选后得到能稳定遗传的转基因藻.以该转基因藻的基因组DNA为模板进行PCR检测,结果表明hGM-CSF基因已转入鱼腥藻7120.这是首次尝试把蓝藻作为制备重组hGM-CSF的新宿主,具有潜在的经济价值和社会效益.