瘦尾虫的小核在无性繁殖周期中对细胞形态结构的影响

通过显微切割建立瘦尾虫无小核细胞系,并与原细胞系及切割后再生的有小核细胞系进行对照观察。结果表明,无小核细胞的形态结构,尤其是口器出现高比率的畸形。在生长静止期,无小核细胞系群体中约23 % (36/155)的细胞完全失去了波动膜。与此同时,这些细胞的口围带也显出异常。一些无小核细胞的大核也出现异常,有的细胞仅含有1枚大核,有的则含有4枚,而不是通常的2枚;还有少数细胞的大核在非细胞分裂期进行分裂。上述结果提示,在无性繁殖周期中,瘦尾虫的小核对于维持正常的细胞形态结构、尤其是保持胞口结构的稳定性和大核数的恒定起着重要的作用[动物学报52 (2) : 383 -388 , 2006]。     

念珠伪角毛虫小核体功能初步研究

为了研究念珠伪角毛虫的小核是否具有及具有怎样的体功能,采用显微切割手术去小核并建立无小核细胞系。经蛋白银染色鉴定,无小核细胞系群体中大多数细胞的形态结构存在缺陷：口围带的部分小膜缺损或排列紊乱,大核的数目和形态也不正常。这表明,念珠伪角毛虫的小核对于保持口围带结构的完整性以及大核的数目和形态结构的稳定性起着明确的作用。     

纤毛虫在进化过程中的特异性

介绍了纤毛虫在进化过程中形成的特异性。其中包括核器二型性、大核发育、大核基因的结构特点、密码子不通用性、细胞周期差异性和组蛋白特异性。追踪报道了纤毛虫小核体功能研究、密码子研究的最新进展。     

冠突伪尾柱虫生理改组中口器发生及口围带调节重建的研究

在冠突伪尾柱虫生理改组过程中,口器发生分波动膜形成和口围带重建两方面独立进行。前者发生包容了旧波动膜解聚、胞咽壁新产生和左列腹棘毛解体等三个部位的毛基粒;后者重建则由口围带原基新分化的小膜、经过裁剪修饰后的旧翻领部和邻部三者拼接整合而成。新小膜的添加与旧小膜的减少二者之间的所达致的平衡保证了生理改组后口围带结构的稳定性。     

冠突伪尾柱虫有性生殖期间皮膜发育的核控制

通过显微手术去小核建立多个冠突伪尾柱虫（Pseudourostyla cristata)无小细胞系,并诱导它们与有小核细胞进行接合生殖,以评估小核及其衍生的大核原基在有性生殖期间对皮膜形态发生的影响,当无小核接合体从有小核配偶获得1枚配子核后,接合双方不仅能平行地继续核器演化,而且使第1次皮膜改组能够同步进行和正常发育,说明小核在有性周期中除了生殖功能外仍保留着某些控制皮膜发育的体功能,虽然大部分接合后体的大核原基在DNA贫乏期停止发育,但少数接合后体能够超越这一时期,并启动第2次皮膜改组和顺利完成其后续的有性发育全程,表明指令发动第2次皮膜发育的信号来自DNA贫乏期后以排出一核物质团块为标志的大核原基。     

大型纤毛虫总RNA的提取方法

以冠突伪尾柱虫为材料,建立了一种适合于富含RNase和多糖的大型纤毛虫总RNA的提取方法。该方法采用异硫氰酸弧和β-巯基乙醇联合快速变性,酚、氯仿和异戊醇抽提,同时在变性剂存在的条件下两次选择性地沉淀RNA,从而有效地去除了DNA、蛋白质和多糖。所得RNA样品经电泳、紫外分光光度法检测和RT-PCR分析,证实为完整、均一且无基因组污染的总RNA.这为构建冠突伪尾柱虫有小核系与无小核系之间的削减文库、筛选两细胞系差异表达的基因奠定了基础。     

RNA干涉在纤毛虫中的研究进展

RNA干涉是dsRNA介导的基因沉默现象,本文简要介绍了其作用的机制和生物学意义,重点阐述了RNA干涉在原生动物纤毛虫中的发现与应用,比较了RNA干涉与纤毛虫大核基因组重排机理的异同,并对RNA干涉在纤毛虫中传输的技术途径-RNAi喂饲法的原理也做了详细的介绍。     

冠窦伪尾柱虫接合过程中小核的形态发生作用

为查明有性生殖期间小核对形态发生的影响程度和范围,我们利用蛋白银染色对冠突伪尾柱虫不同交配型无小核体之间 的接合过程进行了跟踪观察。结果表明：无小核细胞的交配反应能力明显下降;接合双方第一次皮膜形态发生如常进行,但纤毛器原基分化往往出现异常;接合后体照常进入拟包囊阶段,但原有纤毛器多不从皮膜上消失。由于没有新核器形成,均不能启动第二次形态发生并于拟包囊早期解体死亡。因此,小核对于纤维接合早期及第一次皮膜改组的正常进行具有某些明显作用,其衍生的大核原基对于启动后续的发育则是绝对必要的。     

筛选冠突伪尾柱虫有小核细胞系和无小核细胞系饥饿期差异表达的ESTs

利用显微切割的方法建立大型腹毛目纤毛虫———冠突伪尾柱虫(Pseudourostyla cristata)的无小核细胞系,分别提取有小核和无小核细胞系的总RNA,用SMART-PCR方法直接合成dscDNA,进而运用抑制性消减杂交技术(Sup-pression subtractive hybridization,SSH)对冠突伪尾柱虫去小核前后的差异表达基因进行研究,构建了有与无小核细胞系在饥饿期差异表达基因的消减文库,随机挑取了284个克隆,应用cDNA阵列技术鉴定阳性克隆。将鉴定出的17个阳性克隆进行Blastx分析,结果表明17个EST(Expressed sequence tag)均可能与小核体功能密切相关,此为进一步阐明小核的遗传机理奠定了基础。     

冠突伪尾柱虫(Pseudourostyla cristata)接合生殖的研究 Ⅰ.核器演化

在25℃条件下,冠突伪尾柱虫接合生殖全程历时10天左右。接合生殖过程中的核器演化包括:①数十枚老的大核逐步瓦解。电镜观察表明,老的大核是以一种类似于食物泡消化的方式被吸收的,并在此过程中伴有大量溶酶体出现。②仅8枚左右小核中的一枚参与新核器的发生。首先,位于胞口后部的一枚小核膨大并进行一次预备分裂,接着发生三次成熟分裂。每一接合体内形成一枚雄原核和一枚雌原核。雄原核互向对方迁移并与其雌原核融合成为合子核。合子核分裂两次,四枚子核之一发育为大核原基,另一枚发育为小核原基,其余两枚退化。预备分裂和前两次成熟分裂各自产生的两枚子核中,仅一枚进入下一次分裂,另一枚解体消失。在第一次成熟分裂前期,“降落伞”的形成和发展经历着复杂的结构变化,持续一小时以上。③大核原基经过长时间的发育,伴有多线染色体的形成和解体等一系列变化,方达成熟状态。成熟的大核原基以伸长断裂、分叉断裂和哑铃形缢缩三种方式进行分裂,小核原基亦随之分裂,逐步形成具60枚左右大核、8枚左右小核的正常营养体。其后,大核融合,开始配后第一次无性分裂。值得注意的是,大核原基发育到将成熟时,最初的迹象是染色质向大核原基中央集结成团,染色质团与核膜之间充满着匀质的核液。当中央染色质团伸长时,又将