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为了揭示肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)的复制与宿主细胞Raf/MEK/ERK信号通路(简称ERK通路)的相互关系,本研究应用临床诊断为手足口病的患儿疱疹液,通过易感细胞分离培养、RT-PCR及序列测定,以及Western印迹技术等方法,成功分离到EV71临床株.进一步用该分离株感染易感细胞,通过观察宿主细胞p-ERK1/2蛋白磷酸化水平、病毒特异性衣壳蛋白VP1水平、病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及感染细胞的CPE等指标,以期揭示ERK通路在EV71复制的作用.结果表明,EV71的复制可引起细胞ERK通路的活化;而用MEK1/2特异性的抑制剂U0126预先抑制ERK通路的活化,可显著地降低受染细胞上清液中的病毒的感染滴度(以TCID50表示)、受染细胞中EV71VP1蛋白水平、受染细胞中EV71核酸水平,以及受染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE).提示ERK信号通路的活化对EV71的复制具有重要的作用.本研究为进一步阐明EV71在宿主细胞内的复制机制、寻找新型抗病毒靶标等研究奠定了良好的基础. 相似文献
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与光系统Ⅱ颗粒结合的对DTT敏感的蛋白酶的纯化和性质 总被引:1,自引:0,他引:1
菠菜光系统Ⅱ颗粒的1mol/LNaCl抽提液经butyl-Toyopearl650M疏水层析和DEAE-SephadexA-50柱层析分离得一种对DTT敏感的蛋白酶。用SDS-PAGE和Superose12凝胶过滤测得该酶的分子量为37kD,其为单体酶。该酶可降解18kD和24kD水溶性蛋白质,分别产生13.2kD、12kD、10.5kD和23kD、22kD、20kD片段,最适pH为8.0,对NaCl不敏感,对DTT和β-Me敏感。抑制实验表明该酶不属丝氨酸类蛋白酶。 相似文献
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微电泳乙酰胆碱和阿托品对大鼠丘脑束旁核痛敏神经元电活动的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
在30只大鼠上,用多管微电极细胞外记录和离子微电泳方法,观察了乙酰胆碱(ACh)和阿托品对丘脑束旁核(Pf)神经元电活动的影响。结果表明,微电泳ACh可加强痛敏神经元的电活动,并使部分自发放电神经元对伤害性刺激产生反应。阿托品可以阻断ACh的上述作用。微电泳阿托品能减少痛敏神经元的电活动。这些结果提示,在Pf神经元的活动中,ACh可以直接作用于M受体发挥其兴奋作用。 相似文献
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羊抗人IgG的纯化及其在抗—HCV检测中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
单独或联合应用辛酸沉淀、饱和硫酸铵沉淀、阴离子交换等方法对羊抗人IgG进行纯化,对纯化前后抗体的纯度和免疫学活性进行比较,并与辣根过氧化物酶连接,作为二抗用于抗-HCV的ELISA检测。结果表明,不同方法纯化的抗体其纯度和免疫学活性具有一定程度的差别,其中经辛酸+饱和硫酸铵沉淀纯化的抗体为最佳,凝胶扫描纯度为98.05%,比活性近1800,为纯化前的6.8倍。用痞根过氧化物酶标记后,作为酶标二抗检测HCV阴性和阳性标准血清各40份,阴性符合率为97.5%,阳性符合率为95%,可用于抗-HCV的ELISA检测。 相似文献
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