小肽多拷贝基因表达载体的构建及其高效表达(英文)

介绍一种快速、高效构建小肽多拷贝基因表达载体的策略 ,并构建了相应的表达载体pETE coT .用人工合成的编码 2 8个氨基酸残基的胸腺素α1基因为模型 ,采用限制酶EcoT14I识别序列CCAAGG为小肽基因两末端序列 ,利用其酶切后可产生非镜相对称粘性末端 ,一次连接反应就构建出一系列不同基因拷贝数的表达载体 ;在小肽基因两端分别引进编码FactorXa和羟胺蛋白切割位点的序列 ,表达出的融合蛋白可被FactorXa和羟胺剪切出不残留任何外源氨基酸的小肽 .不同拷贝数的小肽融合蛋白在大肠杆菌BL2 1(DE3)中均获得高效表达 .     

海鲈核糖体蛋白L8cDNA的克隆与进化分析

本文构建了海鲈(Lateolabrax japonicus)头肾全长eDNA文库.PCR方法扩增得到海鲈的核糖体蛋白L8基因,全长848bp,编码257个氨基酸,含有L2及L2-C两个保守区.进化分析结果表明,以L8为参照的进化鉴定结果同经典的分子生物学标准18s鉴定结果十分相似,因此核糖体蛋白L8基因L8可以作为鉴定物种进化程度的新标准.     

植物多糖对巨噬细胞的免疫调节作用

植物多糖是一类广泛存在于植物中具有多种生物学活性的天然大分子物质,对免疫系统的影响普遍认为是通过对天然免疫系统的调节作用,尤其是对巨噬细胞免疫功能的影响. 许多研究表明,植物多糖与巨噬细胞表面多种受体结合启动不同信号途径而发挥生物学作用.本文综述了来源于不同种属的多种植物多糖对巨噬细胞释放活性氧、分泌细胞因子和趋化因子等的免疫调节作用,为新型免疫调节药物的研究开发提供了新的思路.     

高寒草甸退化过程中群落生产力和物种多样性的非线性响应机制研究

为了阐释青藏高原高寒草甸退化的关键生态过程, 该研究依托藏北高原草地生态系统研究站(那曲站), 设置不同退化梯度实验, 即对照、轻度退化、中度退化、重度退化和极度退化5个梯度, 探究群落生产力和物种多样性对不同退化强度的响应机制。结果表明: 1)随着退化程度不断加剧, 地上生物量呈现线性或非线性增加趋势, 在重度退化处理下, 地上生物量显著高于对照32.3%, 其中高山嵩草(Kobresia pygmaea)地上生物量呈非线性下降趋势, 而矮火绒草(Leontopodium nanum)地上生物量呈非线性增加趋势; 2)与地上生物量的响应模式相反, 随着退化程度加剧, 地下生物量与总生物量均呈现非线性降低趋势; 3)高寒草甸退化过程中, 物种辛普森指数、丰富度指数、香农多样性指数和均匀度指数均呈现非线性上升趋势。结构等式方程结果表明, 土壤碳含量和体积含水量与地下生物量均呈现显著的正相关关系。土壤碳含量、体积含水量和砾石质量比对地上生物量无显著影响, 土壤碳、氮含量与物种多样性指数呈现显著的负相关关系。研究认为地上生产力的变化不能很好地指示草地的退化程度, 建议今后研究应以可食性牧草和毒杂草等植物功能群的变化来衡量草地退化。     

建立新生大鼠吸入麻醉模型及异氟醚对其海马凋亡的影响

目的:建立新生大鼠吸入麻醉模型并探讨吸入麻醉药异氟醚对其海马凋亡的影响。方法:Penlon Prima SP麻醉机、异氟醚挥发罐及自制带进出气口的麻醉小室。共55只7日龄的SD大鼠用于实验。将其中35只大鼠随机分为7组(n=5)。实验组(Ⅰ-Ⅵ组)异氟醚挥发罐刻度分别为0.125%,0.25%,0.5%,1%,1.5%,2%;新生大鼠置于自制密封麻醉小室内,分别通入含上述异氟醚浓度的混合气体。对照组(第Ⅶ组)给予未混合异氟醚的30%的氧气。将小室安放于37℃恒温箱内。调节气体流量2L/min。实验组于通入气体5,10,15,30,90,180,360 min(T1-7)时于小室出口处抽取10mL气体,采用气相色谱法测定麻醉小室内异氟醚浓度。于通入气体360 min(T7)自新生大鼠左心室采血行血气分析;另取SD大鼠20只,随机分为对照组(C组,n=10),1.5%异氟醚组(I组,n=10),按上述方法建立异氟醚吸入麻醉模型,麻醉结束后2h处死大鼠,采用免疫组织化学法观察C组和I组大鼠大脑海马区Active caspase-3的表达。结果:①麻醉小室出口异氟醚浓度(Y)与麻醉机挥发罐异氟醚浓度(X)的直线回归方程为Y=1.5472X-0.0575(r=0.9993)。②血气分析结果显示:Ⅰ-Ⅵ组与Ⅶ组血气分析组间差异无统计学意义(P0.05)。③免疫组化结果显示:与C组相比,I组大鼠海马Active caspase-3明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论:通过麻醉机、异氟醚挥发罐及自制密封带进出气口的麻醉小室成功建立了新生大鼠异氟醚麻醉模型;为进一步研究异氟醚及相关吸入麻醉药对突触发生期的神经毒性提供了实验基础。     

血清CA125 和OPN 联检在卵巢癌患者中的诊断价值

目的:探讨CA125和OPN联检在卵巢癌诊断中的应用价值。方法:以50例正常健康人为对照,对经组织病理学确诊的69例卵巢癌患者和54例卵巢良性肿瘤患者术前行血清CA125(放免法)和OPN(ELISA法)测定。比较二种血清标志物在正常人、卵巢良性肿瘤和卵巢癌病例中的表达水平。以正常人血清OPN均值±1.96S作为上下界,计算OPN临界值,大于临界值即为OPN阳性。血清CA125≥35 U/mL为阳性。比较三组病例中血清CA125和OPN单检及联检的灵敏度及特异性。比较二种血清标志物在卵巢癌及卵巢良性肿瘤的不同组织分型中的灵敏度。结果:卵巢癌组血清CA125和OPN的水平均显著高于正常对照组和卵巢良性肿瘤组(P<0.01),OPN临界值为27 ng/mL。在卵巢癌诊断中CA125、OPN检测的敏感度分别为66.7%和85.5%,二者联检的敏感度为95.7%。同时二者联检对浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌和子宫内膜样腺癌的敏感度分别为91.7%、70.0%和66.7%。结论:血清CA125和OPN是卵巢癌诊断的敏感性指标,二者联检可提高卵巢癌、特别是粘液性卵巢癌诊断的敏感度。     

蓝莓浓缩汁对小鼠疲劳的改善作用及机制初探

目的:对蓝莓浓缩汁进行抗疲劳功效评价,并对其所涉及的作用机制进行初步探究。方法:小鼠通过预筛选和强制游泳预处理后,以生理盐水为对照组,蓝莓浓缩汁高、低剂量和VC分别作为实验组。经给药及游泳处理后,观察各组小鼠的行为学特征,测定力竭游泳时间,检测血浆和脑组织匀浆中T-SOD活力、MDA含量、LDH活性及血浆中BUN含量的变化,并经HE染色察看小鼠组织病变状况。结果:与S对照组相比,高剂量蓝莓浓缩汁可明显改善疲劳小鼠的行为学特征,延长力竭游泳时间;在血浆和脑组织匀浆中,可增加T-SOD活性((136.92±10.39)%,(50.31±7.26)%),降低MDA含量((58.32±2.91)%,(50.89±2.91)%),提高LDH活性((72.79±19.11)%,(65.11±6.55)%),并减少血浆中BUN((46.92±3.36)%)的产生,(P0.01);还可防止细胞病变间隙的发生。低剂量蓝莓浓缩汁和VC处理组的改善效果不如高剂量组明显。结论:蓝莓浓缩汁有明显抗疲劳功效,所涉及的机制可能与其增强抗氧化酶活性,提高机体有氧代谢能力及改善机体物质代谢等有关。     

饲料铜水平对斑节对虾血细胞中酚氧化酶原系统相关基因表达的影响

以不同铜离子添加水平(0 mg·kg-1、10 mg·kg-1、25 mg·kg-1、40 mg·kg-1、55 mg·kg-1和110 mg·kg-1)的饲料喂养斑节对虾Penaeus monodon 8周,测定对虾血细胞中酚氧化酶原系统相关基因(pro PO1、pro PO2、PE、PPAF和BGBP)表达水平的变化。结果显示,与对照组相比,当铜添加水平为40~55 mg·kg-1时,proPO1的表达量显著上升;当铜添加水平为25~55 mg·kg-1时,pro PO2、PE和PPAF的表达量显著上升;铜添加水平对BGBP的表达量没有显著影响。血清PO活力也在铜添加水平为25~55 mg·kg-1时显著提高。这些结果表明,饲料中添加一定量的铜离子可诱导pro PO1、pro PO2、PE和PPAF表达量的上调,从而提高血清PO活力。根据上述结果,针对提高酚氧化酶原系统免疫功能,在本基础饲料配方中适宜的铜添加水平为25~55 mg·kg-1。     

人源核受体hLRH-1 的表达纯化及多克隆抗体制备

目的：制备抗人源核受体hLRH-1 的多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础。方法：构建含有hLRH-1基因全长克隆的 原核表达载体pET507a-hLRH-1 并用IPTG 诱导其在Rosseta2 菌株中表达重组蛋白His-hLRH-1,经亲和层析纯化后按常规方法 免疫新西兰兔制备多克隆抗体,并用Western Blot 对其特异性进行鉴定。结果：原核表达载体pET507a-hLRH-1经测序证实构建 成功,将其转化大肠杆菌Rosseta2菌株后成功诱导表达重组蛋白His-hLRH-1,经纯化免疫新西兰兔后得到抗hLRH-1 多克隆抗 体,Western blot 证实抗体具有高度特异性。结论：成功表达His-hLRH-1 重组蛋白并制备出多克隆抗体,为进一步用于hLRH-1 的 免疫学检测及其功能研究奠定了基础。     

同步实施家属健康教育对甲状腺癌手术患者生活质量的影响

目的:探讨同步实施家属健康教育对甲状腺癌手术患者生活质量的影响,为改善甲状腺癌手术患者的生活质量提供可能的途径。方法:选择78例甲状腺癌手术患者及其家属作为研究对象,并将其随机分为对照组和干预组,每组39例,对照组给予常规治疗、护理及健康教育;干预组在接受常规治疗、护理及健康教育的同时,同步对其家属实施健康教育。分别于健康教育干预前、干预1个月、6个月后采用生活质量问卷(QL-Index)及抑郁自评量表(SDS)评价和比较两组患者的生活质量评分和抑郁症状评分。结果:健康教育干预1个月、6个月后,干预组的角色功能、社会功能、情绪功能、总体生活质量得分均显著高于干预前(P<0.05),且高于同时点的对照组(P<0.05);干预组的抑郁症状评分均显著低于干预前(P<0.05),且明显低于同时点的对照组(P<0.05)。结论:同步实施家属健康教育可以显著提高甲状腺癌手术患者的生活质量,并降低患者的抑郁水平。