疟原虫抗原B表位NKND在鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白中的表达

疟原虫抗原Ｂ表位ＮＫＮＤ是由本课题组首先报道的一个新的疟疾抗原表位,它是存在于多种不同疟原虫分离株中的保守序列,以减毒沙门菌为载体制备口服活疫苗,方法简单,使用方便,其鞭毛蛋白有较强的免疫原性,有利于激发人体的细胞和体液免疫,人工合成８肽的实验中发现ＮＫＮＤＤ可增强ＮＫＮＤ相应抗体的亲和力,将人工合成的ＮＫＮＤＤ寡核苷酸片段插入鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白表达体系中,经Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交鉴定,表达出具有     

疟原虫抗原B表位NKND在鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白中的表达

疟原虫抗原B表位NKND是由本课题组首先报道的一个新的疟疾抗原表位．它是存在于多种不同疟原虫分离株中的保守序列．以减毒沙门氏菌为载体制备口服活疫苗,方法简单,使用方便,其鞭毛蛋白有较强的免疫原性,有利于激发人体的细胞和体液免疫．人工合成8肽的实验中[2]发现NKNDD可增强NKND对相应抗体的亲和力．将人工合成的NKNDD寡核苷酸片段插入鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白表达体系中,经Western杂交鉴定,表达出具有多拷贝NKNDD表位的重组鞭毛蛋白．     

沙门氏菌1,4,[5],12:i:-耐药性和遗传特征研究进展

近10年来,一种与鼠伤寒沙门氏菌具有相似抗原的非典型沙门氏菌血清型1,4,[5],12:i:-在全球多个国家检出率大幅度增加,目前已被列为引起人类沙门氏菌病的主要血清型之一。沙门氏菌1,4,[5],12:i:-菌株具多重耐药特性,存在分别以质粒和染色体介导的两种主要的多重耐药菌株(西班牙株系和欧洲株系)。多个抗生素抗性基因(blaTEM、blaCTX-M-1、aac(3)-IV、aadA2、cmlA1、sul1、sul2、dfrA12、strA-strB、tet(A)和tet(B))在1,4,[5],12:i:-耐药菌株中检出。遗传特征分析显示,沙门氏菌1,4,[5],12:i:-与鼠伤寒沙门氏菌具有很高的遗传相似度,并且推测是由于多个独立的遗传事件的改变,导致鼠伤寒沙门氏菌变异而产生不同的1,4,[5],12:i:-株系。对于沙门氏菌1,4,[5],12:i:-,相关快速、准确检测方法的建立及致病、耐药机制研究将是今后的重要方向。     

新鲜蔬果中食源性致病细菌研究进展

食用新鲜蔬果引起的食源性疾病快速增长,恶性事件时有发生。关注于国外与蔬果有关的致病细菌的研究进展,主要介绍了蔬果的微生物性质调查,分析了细菌总数、大肠菌群和致病细菌的分布规律;重要的致病细菌污染来源及影响污染率的原因;致病细菌在蔬果中的存活规律,并对重要因素进行排序;介绍了去除致病细菌通用方法和具有潜在应用价值的方式方法 ;致病细菌在蔬果中的附着方式,着重介绍了大肠杆菌O157:H7的3种附着方式。另外,还对相关的研究趋势提出了看法。     

Salmonella enterica Flagellin Is Recognized via FLS2 and Activates PAMP-Triggered Immunity in Arabidopsis thaliana

Infections with Salmonella enterica belong to the most prominent causes of food poisoning and infected fruits and vegetables represent important vectors for salmonellosis. Recent evidence indicates that plants recognize S. enterica and raise defense responses. Nonetheless, the molecular mechanisms controlling the interaction of S. enterica with plants are still largely unclear. Here, we show that flagellin from S. enterica represents a prominent pathogenassociated molecular pattern （PAMP） in Arabidopsis thaliana, which induces PAMP-triggered immunity （PTI） via the recognition of the fig22 domain by the receptor kinase FLS2. The Arabidopsis fls2 mutant shows reduced though not abolished PTI activation, indicating that plants rely also on recognition of other S. enterica PAMPs. Interestingly, the S. enterica type III secretion system （T3SS） mutant prgH- induced stronger defense gene expression than wild-type bacteria in Arabidopsis, suggesting that T3SS effectors are involved in defense suppression. Furthermore, we observe that S. enterica strains show variation in the fig22 epitope, which results in proteins with reduced PTI-inducing activity. Altogether, these results show that S. enterica activates PTI in Arabidopsis and suggest that, in order to accomplish plant colonization, S. enterica evolved strategies to avoid or suppress PTI.     

鼠伤寒沙门氏菌诱导昆明小鼠肠道感染模型的建立

目的:建立鼠伤寒沙门氏菌诱导昆明小鼠肠道感染模型。方法:先用5 mg/mL链霉素预处理2 d,提高小鼠对鼠伤寒沙门氏菌的敏感性,然后正常饲养1 d,攻毒前禁水禁食4 h,再分别以不同剂量灌胃攻毒2次,间隔24 h。观察小鼠临床症状,并通过组织病理切片、透射电镜和免疫组织化学的方法,分别观察小鼠肠道组织病理变化、小肠上皮细胞超微结构变化及肠道淋巴细胞增殖状况。结果:攻毒后昆明小鼠会出现昏睡、食欲不振、寒颤,甚至死亡的现象,解剖后发现小鼠肠道充血膨胀。组织病理切片显示小鼠肠粘膜受损,小肠绒毛肿胀,排列杂乱,炎性细胞浸润;透射电镜观察超微结构显示小肠上皮细胞线粒体空泡化,嵴和膜发生融合消失,粗面内质网发生扩张;免疫组织化学的方法显示肠道感染后,淋巴结肿大,T淋巴细胞大量增殖。结论:该模型对探索鼠伤寒沙门氏菌引发肠炎的发病机制、病理生理、免疫等方面作用具有重要意义,并为特异性卵黄抗体被动免疫保护效果的后续评价奠定基础。     

水蛭常见病原菌的分离与鉴定

从表现软体、水肿、出血和硬结等特征的患病宽体金线蛭(Whitmania pigra)中分离到13株细菌分离物。通过培养特征、形态学观察及生化试验,确定了所分离的细菌中有6株为大肠杆菌(占46．15％),4株为变形杆菌(占30．77％),3株为沙门氏菌(占23．08％)。动物回归试验表明,接种后10d内大肠杆菌、沙门氏菌和变形杆菌对水蛭的致死率分别为100％(4／4)、100％(4／4)和25％(1／4);药敏试验结果表明,这三种细菌普通对复合磺胺、氯霉素、丁胺卡那霉素、头孢哌酮、丙氟哌酸、氟哌酸敏感。研究结果表明,本病是由多个病因导致的一种临床综合症。因此,在进行药物治疗时,应选用多种药物联合以达到最佳的治疗效果。     

表达幽门螺杆菌黏附素保守区的减毒鼠伤寒沙门氏菌株的构建

为构建表达幽门螺杆菌（Hp）黏附素保守区（AB）的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗,采用缺失腺苷酸环化酶基因（Δcya）、环腺苷酸受体蛋白基因（Δcrp）以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因（Δasd）的鼠伤寒沙门菌（X4072）作为宿主,将编码AB的基因插入Asd⁺的组成型表达载体pYA248,通过两次转化引入宿主菌,构建了表达AB基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4072（pYA248-AB）,采用桥联法ELISA测定X4072（pYA248-AB）培养上清液和裂解上清液中AB的抗原性,参照Meacock叙述的方法及重组菌生长曲线的测定来确定重组菌株的稳定性,通过C57BL/6小鼠口服测定半致死量来确定重组菌的安全性。成功构建了表达AB的减毒鼠伤寒沙门菌重组菌株S.typhimurium X4072(pYA248-AB),桥联法ELISA测定表明重组菌X4072（pYA248-AB）培养上清中AB的含量高于菌体裂解液,重组菌pYA248-AB在没有选择压力的情况下培养100代,随机挑选的重组菌全部都能生长,且在ELISA测定AB抗原时均显阳性。重组菌的生长曲线测定表明,X4072（pYA248）和X4072（pYA248-AB）的生长状态基本一致;口服重组菌株X4072(pYA248-AB)1.0×10¹⁰cfu.30d后,C57BL/6存活率仍为100%。成功构建了表达AB的无抗性的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗X4072（pYA248-AB）,体外实验表明重组质粒是稳定的,动物实验证明重组菌株是安全的;为防治幽门螺杆菌感染提供了口服活菌疫苗候选株。     

两种肠道侵袭性菌与小鼠小肠微皱褶细胞相互作用的初步研究

利用小鼠肠袢模型进行局部感染,在不同的时间取Peyer's结对其进行扫描电镜和透射电镜的观察,并用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果表明,鼠伤寒沙门低菌460043和痢疾杆菌F2a-12两种肠道侵袭性菌与微皱褶细胞的粘附发生在局部感染30min,感染60－90min在M细胞和淋巴细胞中可见到细菌,而在感染6－8h后Peyer's结中的细胞凋亡百分率与对照相比差异最为明显。提示：鼠伤寒沙门氏菌460043和痢疾杆菌F2a-12均是借助于M细胞通过上皮屏障,从而引起局部的粘膜反应。     

以减毒沙门氏菌为载体的口服胞嘧啶脱氨酶基因治疗小鼠肿瘤

通过电转化法将真核表达载体EGFPN1和pLCDSN导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261中,经由胃管饲于C57BL／6和BALB／c小鼠。6周后接种Lewis和4T1肿瘤细胞,待种瘤增至直径为10mm左右,辅以‘腹腔注射5－氟胞嘧啶治疗。通过流式细胞仪、共聚焦显微镜和PCR等方法,在小鼠的肝脏、脾脏、小肠、肾脏、肿瘤等组织器官中均可检测到胞嘧啶脱氨酶基因的整合,绿色荧光蛋白在小鼠的脾脏和肿瘤中表达最强,其他组织表达甚弱,利用胞嘧啶脱氨酶／5－氟胞嘧啶系统进行治疗的小鼠肿瘤生长较其他组织显著受抑（P＜0.01),小鼠的生存期明显延长（P＜0.01),未观察到明显的毒副作用。