基于超高效液相色谱-电喷雾-质谱、天然产物词典和活性筛选的艾纳香内生真菌次生代谢产物

【背景】植物内生真菌是天然活性小分子的重要来源,但由于种类繁多,导致寻找结构新颖、活性强的化合物非常困难,重复分离已成为制约新型药源小分子发掘的瓶颈。【目的】综合各种技术,快速寻找目标活性次生代谢产物。【方法】通过对菌株分子鉴定、天然产物词典(dictionaryofnatural products,DNP)数据库检索、超高效液相色谱-电喷雾-质谱(ultraperformanceliquidchromatographyquadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-QTof-MS)分析、滤纸片法抑菌实验和色谱技术跟踪获得活性单体化合物。运用质谱和单晶衍射技术对化合物结构进行鉴定,96孔板法对单体化合物进行活性评价。【结果】分离鉴定出11株艾纳香内生真菌,筛选出一株各方面表现良好的艾纳香内生菌菌株Diaporthe sp.,从其大米培养基中获得一个单体化合物Cytochalasin H,活性评价显示其对枯草芽孢杆菌具有很好的抑制活性,MIC值为32μg/mL。【结论】将多种筛选技术相结合的方法应用于艾纳香内生真菌活性代谢产物的发掘,为快速寻找活性先导化合物提供了很好的借鉴。     

拟南芥细胞中存在中间纤维的研究

利用整装电镜制样与选择性抽提技术,在拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ （Ｌ．） Ｈｅｙｎｈ） 愈伤组织细胞质中观察到直径１０ ｎｍ 左右的纤维网络结构。免疫印迹分析表明纤维的主要成分是６ 种多肽,它们分别与动物角蛋白单克隆抗体ＡＥ１ 、ＡＥ３ 有免疫交叉反应。利用间接免疫荧光技术,与ＡＥ１ 和ＡＥ３ 反应的抗原呈弥散状定位于整个细胞质中,而且１０ ｎｍ 纤维可以在体外重新组装。以上结果表明,在拟南芥细胞质中存在类角蛋白的中间纤维。以动物中间纤维基因的保守序列为引物,采用ＲＴ＿ＰＣＲ技术,进一步从这一模式植物中克隆到一个ｃＤＮＡ片段,这可能为从分子水平上证明植物中间纤维的存在提供了一个线索     

用染料修饰吐温80液—固萃取体系从猪心肌匀浆液中分离纯化心肌黄酶

用三嗪类染料 Ｃｉｂａｃｒｏｎ Ｂｌｕｅ Ｆ３Ｇ－Ａ修饰的吐温８０,与吐温８０、硫酸被构成液－固萃取体系,从猪心肌匀浆液中分离纯化心肌黄酶。研究了吐温８０染料修饰物在吐温８０相中所占的比例、分相盐浓度、溶液的酸度、匀浆液的加入量等对匀浆液中酶及杂蛋白在两相中分配的影响。在室温条件下,酶选择性地进入吐温８０固相,杂蛋白主要留在盐水相。匀浆液中心肌黄酶的酶活力平均收得率为８１．４％,一步纯化倍数为６．６。降低盐浓度,提高盐水相酸度,能使酶从吐温８０固相反萃到盐水相。     

茵陈水提液的体外抗氧化活性

在．ＯＨ、Ｏ２和Ｈ２Ｏ２的产生和检测系统以及兔脑和肝组织匀浆中,加入一定量的茵陈（Ａｒｔｉｍｉｓｉａ ｃａｐｉｌｌａｒｉｓ Ｔｈｕｎｂ）,水提液,观察其与活性氧引发反应的竞争效应。结果表明,茵陈水提液降低．ＯＨ作用下的水杨酸羟基化作用及Ｏ２介导的氮兰四唑（ＮＢＴ）光化学还原,而对Ｈ２Ｏ２驱动的过氧化物－１太复合物的形成没有影响;显著抑制兔脑和肝组织匀浆的脂质过氧化作用。提示茵陈水提液具有显著的抗尖     

一种供RAPD分析用蜘蛛模板DNA的快速提取方法

简要介绍了一种高效、快速提取蜘蛛模板 Ｄ Ｎ Ａ 供 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ 分析的方法⒚该方法具有快速简便、重复性好的优点,提取的 Ｄ Ｎ Ａ 无污染物产生,完全能满足 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ 研究的需要⒚     

铁线蕨中间纤维的研究及某些植物类角蛋白的比较分析

应用整装电镜制样技术,结合选择性抽提方法在铁线蕨（ＡｄｉａｎｔｕｍｐｈｉｌｉｐｐｅｎｓｅＬ．）叶细胞中观察到直径１０ｎｍ的纤维网络结构。免疫印迹结果显示：经选择性抽提得到的纤维蛋白与动物角蛋白抗体有免疫交叉反应,间接免疫荧光标记也得到类似结果,而且此类蛋白能在体外自组装为１０ｎｍ或更粗的纤维。说明蕨类植物细胞中存在类角蛋白中间纤维网络。免疫印迹结果表明,螺旋藻（ＳｐｉｒｕｌｉｎａｓｕｂｔｉｌｌｉｓｉｎａＫｕｔｚ．）细胞,地钱（ＭａｒｃｈａｎｔｉａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａＬ．）叶状体,铁线蕨（Ａ．ｐｈｉｌｉｐｐｅｎｓｅＬ．）、银杏（ＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａＬ．）、白菜（ＢｒａｓｉｃａｐｅｋｉｎｅｎｓｉｓＲｕｐｒ．）的叶组织经选择性抽提后得到的蛋白均与动物角蛋白抗体有免疫交叉反应。其中,螺旋藻仅含有两种类酸性角蛋白,而其余４种植物材料均含有３种类酸性角蛋白及３种类碱性角蛋白。结合以往实验结果,我们认为类角蛋白在植物细胞中是普遍存在的。     

同时抽提DNA和RNA的简便方法

同时抽提ＤＮＡ和ＲＮＡ的简便方法刘定干（中国科学院上海生物化学研究所,２０００３１）关键词ＤＮＡＲＮＡ抽提在研究工作中,常同时需要培养细胞的ＤＮＡ和ＲＮＡ,从同一样品中同时提取ＤＮＡ和ＲＮＡ。目前,已有好几种同时抽提ＤＮＡ和ＲＮＡ的方法［１～４］。作...     

植物叶片衰老机理的几种假说

关于植物叶片衰老已有很多工作,对于衰老的机理提出了许多假说。本文汇总、介绍了其中几种主要假说。     

噬菌体DNA的快速抽提

介绍一种噬菌体DNA的快速抽提方法.用聚乙二醇沉淀噬菌体颗粒,然后经DEAE纤维素纯化处理和酚抽提.与传统的噬菌体DNA纯化方法相比,改进后的方法方便、快速、经济,可获得高纯度的噬菌体DNA.     

新城病毒浓缩法的初步报告

近年来国内农业科举研究机关进行新城病疫苗的制造,一般制造的疫苗为鸡胚富尔马林疫苗或鸡胚化毒力减弱病毒疫苗(粟寿初与马闻天,1950;李善达,1951;杜念兴,1954)。作者在过去报告中(高尚荫,1952)曾指出在其它条件固定的情况下,有机