成熟软骨细胞促进小鼠胚胎干细胞向软骨分化

为诱导胚胎干细胞向软骨细胞分化,采用胚胎干细胞与成熟软骨细胞共培养的方法以提供软骨诱导微环境．小鼠胚胎干细胞经初步分化,形成类胚体后,从中分选出Flk-1阳性细胞,其与猪关节软骨细胞混合后,接种于可降解材料支架,并植入裸鼠皮下．4周后经组织学检查及Ⅱ型胶原抗体免疫荧光检查证实,细胞材料复合物形成软骨组织．经小鼠主要组织相容性抗原染色,证实其中部分软骨细胞源自于小鼠胚胎干细胞．本研究建立了胚胎干细胞定向诱导分化的新方法．     

水涝胁迫下辣椒转录组特征分析及EST-SSR标记开发

为开发适当的生物学工具以探索辣椒对水涝胁迫应答的分子机制,该研究对不同淹水处理的辣椒样本进行转录组分析,获得了丰富的序列数据,并在此基础上对SSR分子标记进行挖掘。结果表明:(1)辣椒转录组检测共获得128 939个Unigene,其总长度平均长度和GC含量分别是55 082 725、1 101 bp和40.57%。与七大功能数据库进行比较,分别有102 123个(NR: 79.20%)、110 157个(NT: 85.43%)、70 203个(SwissProt: 54.45%)、73 539个(KOG: 57.03%)、77 646个(KEGG: 60.22%)、77 442个(GO: 60.06%)以及68 216个(Pfam: 52.91%)个Unigene获得功能注释。发现脂质代谢、碳水化合物代谢、氨基酸代谢、环境适应、次级代谢物生物合成、信号转导和翻译等途径在辣椒水涝胁迫应答中起重要作用。(2)从辣椒转录组数据中发掘到26 574个SSR位点分布在24 889个Unigene中。SSR的出现频率为20.61%,其中单核苷酸重复所占比例(37.26%)最高,其次是三核苷酸(31.00%)和二核苷酸(25.44%)重复类型,三者占EST-SSR总数的93.70%。在单核苷酸与二核苷酸中最多的基序类型为A/T、AG/CT和TC/GA,然后是AT和TA; 三核苷酸中最常见的基序类型是TTG/CAA和ACA/TGT。(3)用Primer 3在线工具设计了10 002对EST-SSR引物,随机选择30对引物进行PCR扩增,均可获得有效扩增。对3份辣椒材料进行扩增,其中7对引物可以扩增出目标条带。综上所述,在辣椒中优势SSR重复类型的基序结构和其他品种基本相近,并初步探索了辣椒水涝胁迫应答的分子机制,开发了EST-SSR标记,为辣椒耐涝遗传育种提供了参考。     

牛气管黏膜抗菌肽成熟肽基因的克隆及序列分析

目的:获得牛气管黏膜抗菌肽(bTAP)成熟肽的基因序列,为后续的研究工作奠定基础。方法:从新屠宰的黄牛气管黏膜中提取总RNA,反转录获得cDNA,以此cDNA为模板进行PCR扩增目的片段,并将其克隆至pMD18-T载体中,经鉴定随机挑选1个阳性重组子进行测序,将测序结果与已报道的序列进行比较,并做NCBIBlast比对。结果:PCR扩增出bTAP成熟肽基因,核苷酸序列测定验证了其正确性;NCBIBlast比对表明,与bTAP成熟肽基因同源性较高的分别是牛β-防御素11、牛β-防御素12、牛β-防御素402、牛β-防御素403、绵羊β-防御素1、绵羊β-防御素2、山羊β-防御素1及山羊β-防御素2,核苷酸序列同源性分别为78.07%、78.95%、80.70%、83.33%、83.33%、80.70%、81.58%和81.58%,氨基酸序列同源性分别为68.42%、65.79%、68.42%、76.32%、71.05%、63.16%、63.16%和68.42%。结论:成功克隆了bTAP成熟肽的基因序列,NCBIBlas比对表明bTAP与防御素可能来自一个共同的祖系基因。     

冬青的离体培养与快速繁殖

1植物名称冬青(IlexchinensisSims),别名四季冬青。2材料类别顶芽和带腋芽的茎段。3培养条件芽诱导培养基:(1)MS+6-BA1.0mg·L-1(单位下同)+NAA0.05;增殖培养基:(2)MS+6-BA0.5+NAA0.05;生根培养基:(3)1/2MS(MS大量元素减半)+NAA0.4。以上培养基均添加0.6%琼脂粉,蔗糖除生根培养基为25g·L-1外,其余均为30g·L-1,pH5.8。培养温度(25±2)℃,光强约为40μmol·m-2·s-1,光照时间为12h·d-1。4生长与分化情况4.1芽的诱导10月上旬,剪取冬青生长健壮的枝条,流水冲洗30min。置于超净工作台上,用75%的乙醇处理30s,无菌水冲洗2～3次,再用0…     

花烛离体培养叶色变异株系的相关性状

以花烛(Anthurium andraeanum)间接器官发生途径中再生出的一株花叶变异植株为原始材料, 进行增殖并对得到的3个叶色变异株系的叶色相关性状进行了初步研究。结果表明: 通过愈伤组织器官发生途径和腋芽增殖途径对这一花叶苗进行增殖, 均分离到3种变异株系, 即花叶苗、黄化苗和天鹅绒绿色叶片苗; 天鹅绒绿色苗叶片中的叶绿素含量比正常离体苗的含量低; 叶片解剖结构表明, 叶绿体在叶肉细胞中的分布与其叶片表现型相同, 天鹅绒绿色叶片与正常叶片在解剖结构上无明显差异。花烛原套只具有1层细胞, 无明显的L2层分生结构, 因此叶肉的薄壁细胞完全由向各个方向分裂的原体细胞发育而来, 这种组织结构导致花叶叶片中含有叶绿体的细胞和不含有叶绿体的薄壁细胞呈不规则分布。这种花叶株系可以作为育种材料或直接作为盆栽花烛进行推广。     

花烛无菌苗液体增殖培养的影响因子

以花烛(Anthurium andraeanum Lind.)品种Sonate无菌苗为材料,研究了液体培养条件下不同植物生长调节剂、蔗糖浓度、培养方式等因子对腋芽增殖的影响,并比较了Sonate、Valentino和Julanba 3个品种间腋芽增殖的差异。结果表明:在液体振荡培养条件下,以Nitsch BA0.5mgL-1 KT1.0mgL-1 蔗糖30gL-1为Sonate品种适宜的增殖培养基;在20μmolm-2s-1弱光下培养25d后转至40μmolm-2s-1正常光照下培养,对Sonate品种的增殖效果较好,腋芽诱导数平均可达11.1个,腋芽平均长度为1.4cm。花烛腋芽增殖能力在品种间存在差异,但3个品种均可在以上培养基和光照条件下快速增殖,其中以Sonate和Valentino品种的增殖较快。     

苏芸金杆菌高毒力菌株筛选方法研究

通过对36株苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)菌株孢晶混合物的蛋白图谱和其对小菜蛾(Plutella xylostella)。致倦库蚊(culex pipens)二十八星瓢虫(Epjlachna vigintioctopunctata)三种昆虫幼虫的致死率研究,我们建立了一套快速高效的苏芸金杆菌内毒素高毒力菌株筛选程序。该程序是将蛋白电泳方法引入苏芸金杆菌菌株筛选,经过一个简单的苏芸金杆菌孢品混合物的蛋白电泳后,可以迅速辩别出对所有试虫毒力均很低的菌株,这一类菌株在苏芸金杆菌分离物中的比例可高达80％以上。除此之外,根据电泳的结果还可以预测该菌株大概的宿主范围和发现新的杀虫晶体蛋白类型。运用该方法,可以大大提高苏芸金杆菌菌株筛选的效率并降低筛选所需的费用。     

昆虫保幼激素类似物对家蚕后部丝腺谷氨酸-丙酮酸转氨酶活性的影响

1.多化性蚕种南农七号五龄中期喷布保幼激素类似物(734-Ⅱ)的剂量为0.05微克/克幼虫体重,二化性蚕种为0.08微克/克幼虫体重。将使龄期延长18—24小吋,增加茧丝量12—24%。 2.正常情况下,五龄期后部丝腺转氨酶的活性以饷食后72小时为最大,以后渐次下降,熟蚕前又稍有回升。二化性蚕种的茧层量较多化性蚕种多一倍左右,同样它的转氨酶最大活性亦较多化性蚕种多70%。 3.用734-Ⅱ号处理后12—24小时内,后部丝腺的转氨酶活性较对照区明显下降,48小时后又回升并超过对照区,以后虽渐次下降,仍明显地高于对照区,熟蚕前则又有所回升。喷布734-Ⅱ号后使二化性蚕种的茧层量增加10—16%,而转氨酶活性增加10—25%。同样,多化性蚕种的茧层量增加18-24%,而转氨酶活性增加20—40%。可以认为734-Ⅱ号促进转氨酶活性的提高,是增产茧丝的生理上的原因之一.     

马尾松毛虫性外激素的初步研究

马尾松毛虫性外激素粗提物,对雄蛾有一定强度的引诱能力。提取雌蛾激素采用的溶剂以二氯甲烷、二甲苯效果最好,诱捕率、诱捕量均较高而稳定;苯、三氯甲烷次之,乙醚+乙醇(3:1)较差。诱捕器以水盆诱捕效果最好,其次是圆筒两端漏斗进口型。应用剂量单位每个诱捕器以20FE为宜。诱捕距离初步测定为100米。 从越冬代雌蛾提取的粗提物,在冰箱中保存70和150天,到第一代和第二代成虫羽化期进行野外测定,诱捕效果不但未降低,而且还略有增加。这为粗提物的实际应用提供了有利条件。 以性外激素为诱饵的水盆型诱捕器与黑光灯结合使用,能显著提高黑光灯诱集雄蛾的效力。