插入单个loxP位点的伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建

根据GenBank已发表的pEGFP－C1序列,设计并合成两对引物,PCR扩增出两端各含一loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP。克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP。基于同源重组原理, pSKLR-GFP-loxP与 PRV SH株基因组DNA共转染293T细胞,在BrdU 的筛选压力下,利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1。将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞,在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及一个loxP位点,筛选得到含单个loxP位点的重组病毒株rPRV2。PCR 扩增证实所获得的重组病毒TK缺失270bp,只有一个34bp的loxP位点,并且能在RK-13细胞上稳定传代。LD50试验表明rPrV2的毒力下降。     

利用噬菌体快速鉴定沙门氏菌的研究

用肠杆菌科7个组合噬菌体对培养不同时间的60株肠杆菌科细菌进行平板法和液体法裂解,观察其裂解效果,并与生化鉴定进行比较。结果表明:平板法裂解培养2h、6h、10h和≥18h的沙门氏菌(生化鉴定为45株)裂解率分别为91.1%、93.3%、97.8%和88.9%,其余菌株几乎不被沙门氏菌特异噬菌体裂解;液体法裂解培养10h的菌液效果较佳。对150份食品样品检测也获得相似结果。说明肠杆菌科7个组合噬菌体对培养10h的沙门氏菌有较高的敏感性和特异性,这对实现沙门氏菌实时、快速而准确的检测有重要意义。     

信息素——细菌相互交流的物质基础

信息素是细菌分泌到体外的一些物质,这些物质能被同种菌的其它个体所接受,并引起它们产生某一种特殊反应,比如一个特定的行为或生长过程,微小的量就能起作用［’］。信息素有M＄基一L－一高丝氨酸内酯（N-acyl-L-homoserinelactones,即AHLs）、丁酸内酯、氨基酸、肽链、低分子量的脂类等多种类型,本文将重点讨论AHLs信息素系统。1AHLs调控系统AHLs首先是在发光细菌中发现的,目前在许多革兰氏阴性菌中均有报道。AHLs由LuxI族蛋白诱导产生,然后通过细胞膜扩散至胞外,并在培养基中积累。如果AHLs在细胞外积累到一定的浓度,…     

半胱胺盐酸盐减缓山羊手术后细胞免疫抑制效应的实验研究

16只摄食干草+精料日粮的成年阉公山羊随机分为试验(n=8)和对照组(n=8)分别接受瘤胃、十二指肠两次瘘管安装手术.试验组自手术前至试验结束给予口服半胱胺(15 mg·kg·goat-1·d-1)处理.两组分别于手术前1天、第一次(瘤胃瘘管)手术后第8天,第二次(十二指肠瘘管)手术后第4天和第13天经颈静脉采血,测定血清白细胞介素-2(IL-2)、考的松(Cortisol)浓度和淋巴细胞转化率(SI).手术前,试验和对照组之间IL-2(0.82±0.1 vs1.03±0.22 μg/L)、Cortisol浓度(20.48±4.52 vs20.80±9.93μg/L)、淋巴细胞转化率(90.72±7.25 vs 129.22±18.59)没有显著差异(p＞0.05).手术后对照组血清IL-2浓度(p＜0.05)和外周淋巴细胞转化率(p＜0.05)严重下降,Cortisol浓度上升(p=0.08);试验组各指标变化不大.两组相比,试验组IL-2浓度高于对照80-90%(p＜0.05),淋巴细胞SI高3倍左右(p＜0.05);Cortisol浓度则呈减少趋势(p=0.11).结果表明半胱胺制剂阻止手术后山羊外周白细胞介素-2和淋巴细胞的降低,减轻手术应激对细胞免疫的抑制.     

鸡输卵管蛋白分泌部前后段的神经支配差异

将ＣＢ－ＨＲＰ分别注入母鸡输卵管蛋白分泌部的前半段和后半段,以研究其神经分布的差异,结果表明,支配前半段与后半段的神经元分布位置和数目均有一定差异。后半段接受来自胸２至腰荐１３（Ｔ２－ＬＳ１３）脊神经节的感觉神经,Ｔ１－ＬＳ１３交感于神经节、内脏神经节和肾上腺神经节的交感神经,盆神经节的副交感神经以及肠神经节的神经。前半段的感觉和交感神经的来源与后半段的基本相同,但前半段的副交感神经主要来自迷走神     

脱脂奶溶蛋白琼脂扩散试验检测AhECP*

建立了脱脂奶溶蛋白琼脂扩散试验新方法,用于检测嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ Ａｈ）Ｊ－１株两种培养基培养的去菌体上清中的胞外蛋白酶（ＥＣＰ）,同时用经典底物法进行了检测,两种方法所得结果相符。与底物法相比,脱脂奶溶蛋白琼脂扩散试验操作简便、敏感性高、重复性好。     

Magainin和cecA-mil抗菌肽基因的密码子优化及在毕赤酵母中的高效表达

选用毕赤酵母偏爱密码子 ,设计合成了新型抗菌肽基因。所合成的magainin基因和cecA mil杂合肽基因全长分别为 1 0 1bp和 60bp ,并在其N端引入kex2裂解位点 ,以保证表达抗菌肽具有天然N端。其中 ,cecA mil杂合肽基因根据cecropinAN端第 1～ 7个氨基酸残基、melittinN端第 5～ 1 2个氨基酸残基所设计合成。基因分别克隆入pPICZα A质粒 ,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα A mag和pPICZα A CM。在AOX1 (醇氧化酶 )启动子调控下 ,类似天然抗菌肽大小的magainin及cecA mil蛋白获得分泌表达 ,其表达量分别为 1 0 5mg L和 1 1 8mg L。初步抑菌活性测定 ,显示两者对金黄色葡萄球菌及E .coliDH5α有较好的抑杀活性。     

猪细小病毒VP2蛋白主要抗原表位基因真核表达载体的构建及表达

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一[1],可引起母猪流产、胚胎死亡、胎儿畸形、胎儿木乃伊化及不孕等,还可引起仔猪的皮炎和腹泻.PPV在我国污染非常严重,部分地区阳性率达90%以上[2].PPV能在大多数哺乳动物传代细胞系内长期潜伏感染,而且量少时不易检出,当细胞连续传代时可能引起细胞病变至细胞死亡,有可能给实验室带来较多麻烦.VP2蛋白是该病毒的主要结构蛋白之一,本研究构建含VP2蛋白的主要抗原表位基因的真核表达载体并获得其稳定表达的细胞株.     

热休克蛋白70促进猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0的小鼠免疫效果

为了初步探索热休克蛋白70(Hsp70)作为分子佐剂增强猪瘟病毒亚单位疫苗的免疫效果,本研究根据猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0的基因序列,设计一对特异性引物,RT-PCR扩增得到完整的E0基因,将其分别插入到原核表达质粒pColdI和含有副猪嗜血杆菌Hsp70的pColdI-Hsp70中,构建了pColdI-E0和pColdI-E0-Hsp70重组质粒,经IPTG诱导表达后,获得了E0、Hsp70和E0-Hsp70融合蛋白。将以上三种蛋白纯化后分组免疫Balb/c小鼠,通过ELISA和流式细胞术测定了小鼠针对E0蛋白的体液免疫和细胞免疫效果。结果显示:E0-Hsp70融合蛋白和E0+Hsp70混合物免疫后均能显著提高抗E0的抗体效价、CD4+和CD8+T细胞水平,并促进IFN-γ的释放。研究结果表明Hsp70能显著增强猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0在小鼠上的免疫效果,为在猪体上的进一步应用奠定了基础。     

基于金属有机骨架的生物复合物抗逆性研究进展

金属有机骨架 (Metal-organic frameworks,MOFs) 由金属离子/簇和有机配体通过自组装形成,在催化、传感、能源和生物医药等领域有十分广泛的应用。近年来,金属有机骨架和生物活性物质结合引起了许多研究者的关注。金属有机骨架具有超大孔容、高比表面积、多样性结构组成等优势,使其可作为固定载体保护生物活性物质免受外界不良微环境的影响,包括高温、高压、有机溶剂等,从而提高生物活性物质的抗逆性。文中从金属有机骨架作为保护层提高不同种类生物活性物质抗逆性的角度进行了综述,并贯穿介绍了基于金属有机骨架的生物复合物的合成策略,旨在为相关领域的研究人员提供参考,促进基于金属有机骨架的生物复合物的实际应用。