重组β-葡萄糖醛酸苷酶键选择性的半理性改造

为了提高Escherichia coli重组表达的β-葡萄糖醛酸苷酶(PGUS-E)的键选择性,本研究以PGUS-E结构与功能关系的推测为指导,选择了可能影响PGUS-E的键选择性的R329、T369、N467位点进行定点饱和突变,利用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对键选择进行筛选,得到优势突变酶R329K、T369V。结果显示:与PGUS-E酶相比,突变酶R329K、T369V键选择性分别提高26.9%、34.3%。突变酶的酶学性质研究表明,突变酶的最适p H和温度与PGUS-E一致,但其酶催化效率下降。由此可见,R329、T369对酶催化的键选择性和酶的活性有显著影响。综上结果,本文应用饱和突变方法改善了PGUS-E的键选择性,为酶的结构和功能关系理解提供了实验依据。     

新疆3种甘草根际土壤丛枝菌根真菌群落的多样性分析

为探究新疆地区药用甘草根际土壤丛枝菌根真菌的群落结构受宿主植物种类、土壤深度和土壤理化性质的影响,该实验采集了新疆地区乌拉尔甘草、胀果甘草、光果甘草根际0～20 cm、 20～40 cm、 40～60 cm 3个土层的土壤样品,基于Illumina Miseq高通量测序平台测定AM真菌群落结构和多样性,结合土壤理化性质,分析新疆地区药用甘草根际土壤丛枝菌根真菌与土壤因子之间的关系,以明确丛枝菌根真菌在提高栽培甘草的有效成分含量等方面的作用。结果表明:(1)实验共分离到1门1纲5目5科5属34种AM真菌,球囊菌门(Glomeromycota)为绝对优势门,优势属为球囊霉属(Glomus)和类球囊霉属(Paraglomus)。(2)类球囊霉属内的各种之间呈正相关关系,球囊霉属内的各种之间也多呈正相关关系,而类球囊霉属与球囊霉属属间各种多呈负相关关系。(3)主坐标PCOA分析显示,3种甘草之间的AM真菌群落完全分开,同种甘草在不同土壤深度之间有部分重叠;相关性热图显示,球囊霉属与土壤总磷呈极显著正相关关系(P0.01),与土壤总钾(P0.001)、土壤有机质含量(P0.01)均呈极显著负相关关系;类球囊霉属与土壤总磷(P0.05)呈显著负相关关系,与土壤总钾(P0.001)、土壤总盐(P0.01)、土壤有机质含量(P0.01)均呈极显著正相关关系。研究认为,3种甘草的种间差异较为明显,2个优势属的属内处于互利共生关系,而属间处于竞争关系;土壤有机质对2个优势属具有一定影响;类球囊霉对盐的耐受性较强且多发现于胀果甘草土壤中,胀果甘草的耐盐碱能力强可能与其有关。     

同时提取光果甘草中光甘草定和甘草酸的工艺研究

本文主要对光果甘草中光甘草定、甘草酸两种重要活性成分的同时提取工艺进行了研究。通过单因素试验确定了影响提取的主要因素及适宜水平范围,通过正交试验确定了其最佳提取条件为:用含0.6%氨水的60%乙醇溶液作为提取剂,料液比为1∶20(w:v),在75℃条件下提取2 h。最佳提取条件下光甘草定的得率为0.238%±0.002%,甘草酸的得率为5.08%±0.03%。该工艺操作简单,投入一批原料,即可同时提取其中的光甘草定和甘草酸,为实现甘草资源高附加值的综合加工利用奠定了基础。     

甘草提取物对鼠肝线粒体氧化损伤的保护作用

用60%乙醇回流甘草,得粗提物(RG0),经AB-8大孔树脂纯化RG0得到甘草精提物(RG1),并对RG0和RG1主要活性成分的含量进行测定。为研究RG0和RG1对鼠肝线粒体氧化损伤的保护作用,用Vc-Fe2+诱导线粒体损伤,测定RG0和RG1对ATP酶的活性、线粒体肿胀度和蛋白质羰基含量的影响;用H2O2-Fe2+体系诱导线粒体脂质过氧化,测定RG0和RG1对丙三醛(MDA)含量的影响;用NBT法测定RG0和RG1抑制线粒体产生超氧阴离子的作用。结果显示:RG0和RG1可以显著地抑制线粒体的氧化损伤,并能防止线粒体肿胀和ATP酶活力下降,降低蛋白质羰基化水平,以及具有有效清除线粒体产生的超氧阴离子自由基的作用。因此,RG0和RG1对鼠肝线粒体的氧化损伤具有良好的保护作用,RG1的作用比RG0好。     

甘草次酸抑制骨肉瘤细胞MG63增殖的NF-κB信号通路机制*

目的: 探讨甘草次酸抑制骨肉瘤细胞MG63增殖的机制。方法: 实验应用骨肉瘤细胞MG63作为研究对象,分5组。空白组、甘草次数组(50 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L)、阳性对照组。每组6个复孔。空白组为不含有甘草次酸的DMEM的培养基,甘草次酸组分别加入50 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L的甘草次酸,阳性对照组加入白藜芦醇(40 μmol/L)。将细胞接种于培养瓶内,当细胞进入生长平台期后使用0.1%的胰酶消化并按1×10⁶ cells/ml的密度接种于96孔板中,继续培养24 h。采用甲基四氮唑蓝检测细胞的增长率,Annexin V / PI双标记流式细胞术检测骨肉瘤细胞MG63的凋亡,蛋白质印迹法检测NF-κB蛋白的表达。结果: 与空白对照组相比,甘草次酸孵育24 h后,各组的骨肉瘤细胞G63增殖率明显降低 (P＜0.05)、凋亡细胞比例明显升高(P＜0.05);甘草次酸孵育48 h后,骨肉瘤细胞G63增殖率和NF-κB蛋白的相对表达量均明显降低(P＜0.05)、凋亡细胞比例明显升高(P＜0.05)。与阳性对照组比较,甘草次酸孵育24 h后,50 μmol/L甘草次酸组的细胞增殖率显著增高、100 μmol/L和200 μmol/L甘草次酸组的骨肉瘤细胞的增殖率显著降低(P＜0.05),甘草次酸孵育48 h后,50 μmol/L组和100 μmol/L组骨肉瘤细胞的增殖率显著升高,而200 μmol/组显著降低(P＜0.05);甘草次酸孵育24 h后,50 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L组的骨肉瘤细胞的凋亡率均显著降低 (P＜0.05);而甘草次酸孵育48 h后,50 μmol/L、100 μmol/L组的骨肉瘤细胞的凋亡率也显著降低,而200 μmol/L组的凋亡率则显著升高。各剂量组间比较,200 μmol/L甘草次酸组的效果最佳,差异有显著性(P＜0.05);孵育48 h后,200 μmol/L甘草次酸组的效果无论在骨肉瘤细胞的增殖率还是凋亡比例其效果均优于阳性对照组(P＜0.05)。结论: 甘草次酸对骨肉瘤细胞G63增殖有抑制作用,其机制可能通过影响NF-κB信号通路,达到抑制骨肉瘤细胞MG63 增殖的作用。     

水溶性甘草多糖的分离纯化、结构及生物活性研究进展

甘草是广泛使用的中药材之一.甘草中含有多种活性物质,甘草多糖作为主要的活性大分子,具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗补体以及免疫调节等生物活性.本文对近年来水溶性甘草多糖的分离纯化、结构解析以及生物活性研究的最新进展进行综述.     

甘草甜素抗炎及抗肿瘤机制研究进展

甘草甜素是中药甘草的主要成分,具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤等作用,随着研究的不断深入,甘草甜素广泛地应用于银屑病、慢性肝病、艾滋病及肿瘤等疾病的治疗中。近年来,学者对其抗炎和抗肿瘤作用研究较为突出,其机制包括抑制炎症因子、抗氧化、免疫调节、抗血管生成等,为更好地指导临床应用,就目前甘草甜素抗炎和抗肿瘤机制作一综述。     

甘草查耳酮A对脑胶质瘤细胞SHG-44凋亡的影响

为了探讨甘草查耳酮A对脑胶质瘤细胞SHG-44凋亡的影响以及其机制,本研究通过CCK-8法检测脑胶质瘤细胞SHG-44细胞活力,使用FITC Annexin/PI双染流式细胞仪检测脑胶质瘤细胞SHG-44凋亡率,通过DCFDA细胞ROS检测试剂盒检测脑胶质瘤细胞SHG-44内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平。结果显示,不同浓度(5μmol/L, 10μmol/L和20μmol/L)甘草查耳酮A能明显降低脑胶质瘤细胞SHG-44细胞活力(p0.05, p0.01),能显著促进脑胶质瘤细胞SHG-44凋亡(p0.05);细胞内ROS水平在甘草查耳酮A处理组中明显高于正常脑胶质瘤细胞SHG-44组,ROS抑制剂、NAC预处理可明显抑制草查耳酮A降低的细胞活力(p0.01, p0.05),且对脑胶质瘤细胞SHG-44凋亡的促进作用(p0.01, p0.05)。本研究结果表明甘草查耳酮A能够通过上调ROS水平促进脑胶质瘤细胞SHG-44凋亡。