大黄鱼人工诱导雌核发育后代的微卫星标记分析

通过冷休克法诱导2组大黄鱼雌核发育,并采用6对微卫星标记引物 （C7、C13、C27、C44、D19、F27）对雌核发育家系G1、G2中24尾鱼苗及双亲进行PCR扩增,并进行微卫星标记比较分析。结果表明：冷休克诱导雌核发育二倍体获得了35.3%的孵化率和45日龄9.9%的成活率;有4对引物可扩增出清晰的亲本差异条带,其中引物C44、C27扩增结果显示G1子代中均未出现雄鱼基因,全部为雌核发育产物,C27扩增结果显示G2子代中也未出现雄鱼基因,但D19扩增结果显示G2子代中有3尾出现雄鱼基因,属正常受精个体,两家系后代的基因纯合率分别达93.8%和72.9%,平均为83.3%。研究表明雌核发育是促进基因纯合的一个有效途径,微卫星标记技术是是鱼类雌核发育鉴定和遗传分析的有效方法。     

不同采样时期渤海自由生活海洋线虫种类组成的比较

在渤海的3个典型站位B1、E5和E1,以3个不同采样时期的沉积物样品（1997年6月、1998年9-10月份和1999年4-5月份）,研究了渤海自由生活海洋线虫的种类组成变化。结果表明：自由生活海洋线虫的摄食类型比例在同一个站位3次不同采样均有变化,其中B1站和E5站3个采样时期表现为3种不同的摄食类型分布;将线虫分为3个时期所进行的年龄结构和雌雄比研究表明,在线虫群落中幼龄个体一般占到线虫群落总数的一半以上;对3个站位线虫群落的多样性研究表明,离黄河口最近的B1站,出现种类数量最少,位于渤海中部的E5站,出现种类数量较多;3个不同采样时期的比较,以1997年6月份群落中出现的种类数最多,1999年4-5月份出现的最少。对其群落结构的分析表明,同一个站位不同采样时期,优势种的类型基本相同,变化主要表现在优势种丰度大小的差异,其群落组成结构相对稳定。     

日本囊对虾Cathepsin B基因在不同卵巢发育时期的表达

采用实时定量PCR技术,以18SrRNA为内标基因,检测日本囊对虾Cathepsin B基因在mRNA水平不同卵巢发育时期的表达。结果显示,Cathepsin B在卵黄合成前期表达最高,内源性卵黄合成期和外源性卵黄合成期表达水平基本一致,而在成熟期表达水平急剧下降。其中卵黄合成前期与其它3期相比具有显著性差异(P0.05),内源性卵黄合成期和外源性卵黄合成期Cathepsin B不具有显著性差异(P0.05),而成熟期与前边三期相比具有显著性差异(P0.05)。推测Cathepsin B可能在日本囊对虾卵巢发育中发挥了作用。     

基于简化基因组测序的大黄鱼耐高温性状全基因组关联分析

利用Illumina HiSeqTM 2500测序平台, 对通过高温胁迫实验筛选得到的20尾耐高温和20尾不耐高温的大黄鱼(Larimichthys crocea)进行了简化基因组测序(SLAF-seq), 每个样本的平均测序深度达到10.26×, 共获得419211个高质量的群体单核苷酸多态性(SNP)位点 。利用TASSEL软件的混合线性模型(MLM)进行全基因组关联分析(GWAS), 共筛选到38个与大黄鱼耐高温性状显著相关的SNP位点(P<2.39E–08)。利用BLAST程序定位每个SNP位点在大黄鱼基因组中的位置, 并分析其周围的功能基因。结果在38个SNPs附近共找到26个已知的功能基因, 这些基因主要与细胞转录、代谢、免疫等功能相关。研究结果可为下一步大黄鱼耐高温分子机制解析及耐高温品种的选育提供参考。     

日本鳗鲡IFN-γ基因的鉴定、表达模式及启动子活性分析

为揭示鱼类IFN-γ的生物学功能, 研究从日本鳗鲡(Anguilla japonica)中克隆获得了IFN-γ基因, 命名为AjIFN-γ。AjIFN-γ具有脊椎动物IFN-γ的典型特征: 包括4外显子/3内含子的基因结构、C端的IFN-γ特征性氨基酸基序和1个核定位信号, 以及6个α-螺旋反向平行构成的二级结构。AjIFN-γ在日本鳗鲡所有组织中均低水平转录表达, 其中肝脏中表达量最高, 其次是皮肤和头肾。Poly I:C刺激和迟缓爱德华氏菌感染均可显著诱导AjIFN-γ在鳃、头肾、体肾和(或)脾脏中的转录表达, 表明AjIFN-γ能够参与日本鳗鲡抗菌和抗病毒的免疫过程。此外, 研究还克隆了AjIFN-γ基因的5′调控区序列共1536 bp, 并构建了一系列Aj IFN-γ 5′调控区删节突变体, 分析其启动子活性, 结果表明, 上游–240/+136区域中含有起始AjIFN-γ转录的关键启动子调控元件, –1062/–814区域存在转录的正调控元件, 而–1252/–1062区域存在转录的负调控元件。上述结果进一步丰富了鱼类IFN-γ的基础知识。     

我国沿海棱鳀属鱼类的物种鉴定与系统发育

利用DNA条形码技术对中国沿海分布的6种棱鳀属(Thryssa)鱼类样品进行了物种鉴定, 并每种取5尾用于探讨该属系统发育关系。结果显示: 棱鳀属鱼类的主要形态鉴别特征为上颌骨伸达位置和第一鳃耙的下鳃耙数量。在525 bp的目的片段上有175个变异位点, 其中简约信息位点172个, 单一信息位点3个, 无插入缺失现象, 转换数为182, 颠换数为57。A+T含量明显高于G+C含量, 并且表现出明显的反G偏倚。结合GenBank中相关的同源序列进行比较发现, 所有序列明显分为10个组群, 表明已提交的棱鳀属鱼类COI基因序列中仍存在一定的问题。从各组群间的遗传距离和氨基酸遗传差异水平可以看出, 10个组群应为不同的有效种, 但是否存在隐存种还有待于进一步确定。从NJ树上可以看出, 长颌棱鳀(T. setirostris)是最先分化出的物种, 保持着最原始的特征, 而中颌棱鳀(T. mystax)与黄吻棱鳀(T. vitrirostris)聚类到一起, 二者间存在共享单倍型。棱鳀属鱼类最早分化于中新世早期。在今后的研究中仍需要结合更多的分子标记对中颌棱鳀和黄吻棱鳀的分类地位作进一步的探讨。     

三倍体九孔鲍生物学特性的初步探讨

采用细胞松弛素B(Cytochalasin B)抑制九孔鲍受精卵第二极体的释放获得三倍体材料,进行三倍体与普通二倍体的生长对比试验,试验分为仔鲍和成鲍两个养殖阶段。观察了三倍体性比和性腺发育情况。结果表明,三倍体九孔鲍比普通二倍体九孔鲍具有显著的生长优势。投放的担轮幼虫经5个月培育,三倍体平均壳长可达2.25cm,壳长绝对生长量是普通二倍体的1.20倍;平均壳长3.25cm的个体经6个月培育后壳长为5.43cm,绝对增长量是普通二倍体的1.80倍。三倍体成鲍性比和二倍体没有显著差异,接近1:1;三倍体性腺发育程度较低,雌、雄性腺大小和体积比例均明显小于同期培育的二倍体成鲍。     

九孔鲍四倍体诱导的研究

采用二倍体鲍卵子,抑制其第一极体、抑制其第一极体和第二极体诱导四倍体,用三倍体鲍卵子与普通鲍精子受精并抑制其第一极体,以及用三倍体鲍的其它方法诱导四倍体。用倍体分析仪检测DNA相对含量以判别其倍性。实验结果,先后共培育出存活的四倍体鲍239个,个体大小为2.5～6.0cm;挑选性腺发育较好的四倍体鲍(包括雌雄),与普通鲍杂交繁育三倍体,先后共培育出10批次,培育出的苗量共计15.8万个。     

鱼类Toll样受体及其信号传导的研究进展

鱼类是脊椎动物中的一个重要类群, 在其生存与进化的过程中, 免疫系统担负着保护鱼类免受病原感染的重任, 其中Toll样受体家族等介导的先天性免疫是鱼类抗病免疫的第一道防线, 并在连接先天性免疫与获得性免疫反应中起着桥梁作用. 虽然从无脊椎动物到高等脊椎动物, Toll样受体家族内多数成员在蛋白质结构与功能上都较为保守, 但是鱼类作为最低等的脊椎动物, 在其进化过程中又形成了一些特有Toll样受体分子, 其剪接类型也更丰富; 鱼类Toll样受体家族介导的免疫识别、免疫信号传导、激活和调控方式与高等脊椎动物也不尽相同. 文章主要综述了鱼类Toll样受体的结构、种类、功能、多样性、免疫信号传导及其调控特点, 为深入了解鱼类的免疫反应奠定基础.       

血红蛋白源抗菌片段的研究进展

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