玉米赤霉烯酮降解酶毕赤酵母表达载体的构建及其表达

目的构建毕赤酵母表达载体pPIC9-ZEN-jjm,筛选高效分泌表达活性目的蛋白的菌株。方法克隆ZEN-jjm基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切连接至pPIC9中,电转化至毕赤酵母GS115。利用RDB培养基和甲醇诱导表达进行筛选。HPLC检测表达蛋白降解玉米赤霉烯酮的活性。结果测序表明ZEN-jjm成功插入pPIC9中,SDS-PAGE表明获得1株高效表达目的蛋白的重组酵母,其分子量约29 kDa。HPLC表明其能有效地降解玉米赤霉烯酮。结论玉米赤霉烯酮降解酶在毕赤酵母中获得了高效分泌表达。     

经气管镜介入多方法联合治疗支气管结核临床应用探讨

目的:探讨多方法联合介入治疗支气管结核的有效性和安全性.方法:329例支气管结核患者根据镜下不同类型采取多种方法联合介入治疗.结果:329例强化阶段2个月结束时痰菌阴转289例(87.8.%),炎性浸润、溃疡及干酪坏死消除78/80例(97.5%),肉芽组织增生消除63/70例(90%),气道瘢痕狭窄明显改善26/32(81%),管壁软化明显好转7/15(46.6%),肺不张或肺膨胀不全总有效率82/105(78.1%).6个月后痰菌全部转阴(100%),6个月后炎性浸润、溃疡及干酪坏死肉芽组织增生消除达97.9%.管壁软化好转85.2%,肺不张治愈率95.8%,疗效确切.结论:通过电子支气管镜多方法联合介入治疗支气管结核是一种有效的方法、安全、并发症少、病人易接受等优点.     

敲除Pofut1不影响胚胎干细胞向神经元分化

蛋白O-连接岩藻糖基转移酶1 (Pofut1)基因缺失可导致Notch分子无法与配体结合并启动信号传递. 为研究Pofut1基因对哺乳动物胚胎干细胞（ESC）向神经分化的影响,利用Pofut1基因敲除的胚胎干细胞与野生型胚胎干细胞,经体外培养诱导拟胚体（EB）分化为神经细胞,计数分化为神经细胞的比例,采用细胞免疫组化染色和real-time PCR等方法,分析神经细胞特异性标志分子的表达. 结果显示,Pofut1基因缺失后,对EBC生长没有明显影响,分化过程中形成的拟胚体数量明显增多,分化的神经样细胞以及神经标志物分子的表达也明显多于对照组;Notch信号缺失对小鼠胚胎干细胞生长无明显影响,但可以促进ES细胞向神经细胞分化.     

依托咪酯联合右美托咪定对高血压基底节区脑出血患者脑糖氧代谢和氧化应激的影响

摘要 目的：观察依托咪酯联合右美托咪定对高血压基底节区脑出血患者脑糖氧代谢和氧化应激的影响。方法：纳入2020年1月-2022年12月期间我院收治的90例高血压基底节区脑出血患者,采用随机数字表法将患者分为对照组和研究组,各为45例。对照组患者接受依托咪酯乳状注射液麻醉,研究组患者接受依托咪酯乳状注射液联合右美托咪定注射液麻醉。对比两组血流动力学[心率（HR）、平均动脉压（MAP）]、糖氧代谢指标[氧饱和度（SjvO₂）、脑氧摄取率（CEO₂）、脑动静脉氧差（AVDO₂）]、氧化应激指标[丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）]和不良反应。结果：麻醉诱导后5 min（T1）~手术完毕时（T4）时间点,研究组心率（HR）、平均动脉压（MAP）低于对照组（P<0.05）。T4时间点,研究组SjvO₂高于对照组,CEO₂、AVDO₂低于对照组（P<0.05）。T4时间点,研究组SOD高于对照组,MDA低于对照组（P<0.05）。两组不良反应总发生率对比未见差异（P>0.05）。结论：依托咪酯联合右美托咪定可更好维持机体血流动力学,改善脑糖氧代谢,减轻氧化应激,对高血压基底节区脑出血患者发挥出良好的麻醉效果。     

DHPLC检测胃癌微卫星不稳定性

为探讨一种快速、简便、可靠的胃癌微卫星不稳定性（MSI）检测方法,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法检测28例胃癌12个微卫星位点(D1S548、D1S552、D5S346、TP53、IGFIIR(G)8、IGFIIR(CT)5、TGFßRII(GT)3、TGFßRII(A)10、hMSH3(A)8、hMSH6(G)8、BAX(G)8和Bat26）,DHPLC柱温50℃检测Bat26位点。凝胶电泳发现MSI-H 2例（7.14%）,MSI-L胃癌15例（53.6%）,Bat26+2例均为MSI-H,Bat26改变和MSI-H表型一致（P<0.01,Fisher’s确切概率法）。DHPLC亦证实2例Bat26+胃癌,结果和凝胶电泳完全一致。结果表明,DHPLC检测Bat26位点是研究胃癌MSI-H的较好方法,有一定的临床应用价值。Abstact: To establish a fast, simple and solid method of studying microsatellite instability (MSI) in gastric cancer, a panel of 12 microsatellite sites,D1S548, D1S552, D5S346, TP53, IGFIIR(G)8, IGFIIR(CT)5, TGFßRII(GT)3, TGFßRII(A)10, hMSH3(A)8, hMSH6(G)8, BAX(G)8 and Bat26, were detected by denatured polyacrymide gel electrophoresis-silver stain in 28 gastric cancers. Bat26 was also analyzed by denatured high performance liquid chromatograph (DHPLC) at 50℃ in the DNASep Cartridge. Two MSI-H (7.14%) and 15 MSI-L cancers (53.6%) were identified in 28 gastric cancers. Bat26 was positive only in 2 MSI-H cancers. The alterations of Bat26 and MSI-H status were coincident (P<0.01). The two Bat26+ cancers were also confirmed by DHPLC. Results obtained from DHPLC and gel electrophoresis were completely consistent. Thus, DHPLC analysis of Bat26 site may be a favorable method of detecting MSI-H status in gastric cancer, and be of clinical importance.     

再生基因家族的研究

再生基因家族自1988年被发现以来,其在糖尿病、炎症创伤与肿瘤尤其在消化系统肿瘤中的作用日渐被重视。越来越多的该家族成员被发现,并已开始考虑在临床治疗中应用。这些研究开始显示再生基因家族的潜在应用价值。 Abstract:Since the first member of Reg gene was discovered in 1988,it has been verified that Reg genes play important roles in diabetes,inflammation and injury,and tumors.More members were cloned and their application in treatment was studied.With the development of related research,there is a great potential of Reg family in biomedical field.     

黄粉虫抗茵肽TmAMP3在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

昆虫抗菌肽具有广谱抗菌活性,克隆黄粉虫Tenebrio molitor抗菌肽基因,进行原核表达和活性检测,为昆虫抗菌肽推广应用奠定一定基础.根据GenBank公布的黄粉虫抗菌肽序列设计特异引物,以RT-PCR法从黄粉虫体内克隆了抗菌肽基因TmAMP3,将其亚克隆至pET-30a表达载体中,转化到大肠杆菌Escheric...     

新疆家蚕抗菌肽在毕赤酵母中表达及活性研究

目的:在毕赤酵母中表达新疆家蚕抗菌肽基因(Cecropin-XJ)并检测其活性.方法:根据作者实验室已克隆获得的新疆家蚕抗菌肽(Cecropin-XJ)基因设计引物,通过PCR方法扩增Cecropin-XJ,将PCR产物和表达载体pPIC9K用EcoR Ⅰ及Not Ⅰ双酶切,构建重组表达质粒pPIC9K-(Cecropin-XJ),酶切及测序正确后,电转化到毕赤酵母GS115,对分泌表达的重组蛋白进行活性检测.结果:PCR扩增获得192 bp Cecropin-XJ,成功构建pPIC9K-Cecropin-XJ,优化诱导条件证明在pH 6的BMMY培养液中,0.5%甲醇诱导约48h后,获得的表达产物活性较强,对多种革兰氏阴性菌和阳性菌具有抗菌活性,在100℃条件下,其活性可维持100min以上.结论:新疆家蚕抗菌肽在毕赤酵母中分泌表达,为大规模发酵生产奠定了基础.