卧龙大熊猫保护及研究技术的进展

对卧龙自然保护区野生大熊猫的保护与监测进行评估,阐述了卧龙圈养大熊猫人工繁殖技术的进展,包括饲养管理、种公兽的培养、人工授精、哺育期母兽管理、人工育幼、亚成体饲养管理及疾病防治等,提出了野生大熊猫的保护、监测以及圈养大熊猫人工繁殖的研究新思路。     

杜氏盐藻外源基因稳定表达系统的构建

建立了一种单细胞海水绿藻--杜氏盐藻(Dunaliella salina Teod.)的外源基因稳定表达系统.通过电激法将携带乙肝病毒表面抗原基因(HBsAg)和氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)的质粒转入盐藻细胞内,CAT基因为筛选基因.PCR和Southern杂交结果显示,HBsAg基因已经整合到盐藻基因组中.Northern杂交结果表明,转化成功细胞内的该基因已转录成mRNA.HBsAgELISA和Western杂交检测证明,HBsAg蛋白在转化的盐藻细胞内稳定地表达.同时,PCR和Southern杂交显示,CAT基因也已整合到盐藻基因组中.且CATELISA检测证明,CAT蛋白在转化体中也已稳定地表达.进一步对转化盐藻进行无氯霉素筛选培养,60代后,HBsAg基因依然稳定地存在并表达.本实验第一次报道了外源基因在杜氏盐藻细胞内的稳定表达.     

高山被孢霉发酵生产花生四烯酸的宏观形态

采用图像处理技术对高山被孢霉(Mortierella alpina)发酵过程中的不同形态进行分析,并对其产花生四烯酸(ARA)能力进行了比较。研究发现:复合N源中蛋白胨与酵母粉比例是影响高山被孢霉宏观形态的重要因素,球形形态生长的菌体中ARA产量较分散,菌丝体中ARA产量高;在球形形态中,空心球的菌体生物量低,ARA比例低,蓬松球可以兼顾菌体高生物量、高油脂比例及高ARA比例。产ARA能力由生物量、油脂比例及油脂中ARA比例共同决定。结果表明:直径大约4 mm、成核区域面积大约为43.6%、紧密度为71.36的蓬松球形态,是高山被孢霉一种相对较佳的发酵形态,其菌体产ARA能力分别是空心球和分散丝状菌体产ARA能力的2.01和2.70倍。     

D-二聚体,高敏C反应蛋白和脑钠肽对COPD合并呼吸衰竭预后的影响

目的:观察D-二聚体,高敏C反应蛋白和脑钠肽对COPD合并呼吸衰竭预后的影响.方法:选取2009年3月至2011年3月本院呼吸科的COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者80例,随机分为观察组和对照组,各40例.对照组予以常规方法治疗,观察组在对照组的基础上予以BiPAP呼吸机行无创通气治疗.观察两组的血气分析,D-二聚体,高敏C反应蛋白(hs-CRP)和脑钠肽(BNP).结果:治疗后两组的PaO2和pH水平较治疗前明显的升高,而PaCO2,BNP,hs-CRP和D-二聚体较治疗前明显降低,观察组较对照组升高或降低更为明显(P＜0.01).结论:BiPAP呼吸机行无创通气治疗COPD合并呼吸衰竭治疗效果显著,而检测患者血清中BNP,hs-CRP和D-二聚体浓度的变化可用于预后评价.     

红参粉末治疗糖尿病视网膜病变的临床观察

目的：观察红参粉末治疗糖尿病视网膜病变的临床效果。方法：随机选取2012年1月至2012年12月在我院接受治疗的2型糖尿病合并糖尿病视网膜病变（Diabetic Retinopathy,DR）患者103例。其中30例（57眼）仅采用常规方法治疗,即对照组;其余73例（125眼）在常规治疗的基础上加用红参粉末,即观察组。治疗180天后,观察并比较两组患者的视力、眼底镜、荧光血管造影等检查结果的变化情况。结果：在观察组中,患者经红参粉末治疗后的视力与治疗前相比有所提高,差异具有统计学意义（P〈0．05）;而对照组中,患者治疗前后的视力变化无统计学意义（P〉0．05）;观察组治疗有效率为76．7％,而对照组治疗有效率为46．7％,差异有显著意义（P〈0．05）。观察组中,男性DR患者治疗有效率为68．8％、女性为92．0％;早期DR治疗有效率为85．4％、晚期为65．1％;糖尿病病程不超过10年的DR患者治疗有效率为88．9％、超过10年的为64．9％,差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：尽早的发现和及时的治疗可减少糖尿病患者视网膜病变的发生率,从而避免因视网膜病变而引起的严重的视力下降,甚至失明。红参粉末治疗糖尿病视网膜病变有显著的临床效果,特别是对早期糖尿病视网膜病变的疗效更佳,值得临床推广。     

神经生长因子抗体在小鼠膝关节炎疼痛模型中的作用研究

摘要 目的：探究神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）抗体L148M在碘乙酸（Monoiodoacetate,MIA）诱导的膝关节炎（Kee osteoarthritis,KOA）小鼠模型中的作用机制。方法：随机将8周龄C57BL/6雄性小鼠分为对照组、MIA组和L148M组。采用关节腔注射20 mg/mL MIA诱导KOA小鼠模型。手术后2周,L148M组小鼠给予腹腔注射L148M（10 mg/kg）处理。通过苏木精-伊红（HE）染色、番红O染色、OARSI评分和Micro-CT分析评估小鼠膝关节软骨及软骨下骨组织形态学变化。通过qRT-PCR检测CCR2、MCP1、MMP-1、MMP-3、MMP-13、COL10、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平。通过Western blotting检测INOS、COX-2、Collagen II和Aggrecan的蛋白表达水平。通过免疫组织化学法分析VEGFA和Ang-1的蛋白表达水平。通过Micro-CT血管造影分析软骨下骨血管形成数量。结果：HE染色结果显示,L148M组小苏软骨细胞数和关节软骨厚度均高于MIA组。番红O染色显示,L148M组小鼠基质降解小于MIA组。L148M组OARSI评分显著低于MIA组（P<0.05）。micro-CT扫描结果表明,L148M组小鼠软骨和软骨下骨结构完整,没有明显病理损伤。qRT-PCR检测结果显示,与MIA组相比,L148M组小鼠COL10、MMP1、MMP3和MMP-13表达水平均显著降低（P<0.05）。Western blotting检测结果表明,与MIA组相比,L148M组小鼠Collagen II和Aggrecan表达水平升高,INOS和COX-2表达水平降低（P<0.05）。疼痛行为学分析显示,与MIA组相比,L148M组小鼠行进距离和机械刺激反应阈值均降低（P<0.05）。micro-CT血管造影分析显示,L148M小鼠组微血管数量和体积明显低于MIA组（P<0.05）。免疫组化检测显示,L148M组小鼠VEGFA和Ang-1蛋白表达水平均显著低于MIA组（P<0.05）。结论：L148M通过抑制软骨下骨异常血管生成,缓解关节炎症疼痛;并通过抑制炎症细胞因子表达,减轻软骨和软骨下骨病理损伤。     

抗CPV-2a单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

犬细小病毒病是危害养犬业的重要传染病之一,患病犬难以治愈.单克隆抗体治疗此病效果明显,本文介绍了制备抗CPV-2a单克隆抗体的方法.用纯化的犬细小病毒(canine parvovirus,CPV) 2a型分离株免疫新西兰大白兔和Balb/c小鼠制备抗CPV-2a多克隆抗体及单克隆抗体.经亚克隆得到1H9、2B5、2B7和2C7共4株单抗,Western blotting鉴定单抗的免疫反应性;间接ELISA方法检测单抗的特异性.为了快速对犬细小病毒病作出诊断,建立了CPV-2a双抗夹心ELISA方法.兔多抗作为捕获抗体,鼠单抗作为示踪抗体,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG作为检测系统;捕获抗体和示踪抗体最佳稀释度分别为1:800和1:2 000;检测系统最佳稀释度为1:4 000.结果表明:所得4株单抗与pET-32a-VP2蛋白发生特异性反应,且与狂犬病毒(RV)、犬温热病毒(CDV)不交叉反应;建立的双抗夹心ELISA方法对病毒的最低检出量为4.375 μg/mL,与美国RB试剂盒相比,符合率为95%.单抗制备为犬细小病毒病的治疗奠定了基础;双抗夹心ELISA方法的建立为疑似粪便样本提供了简单、快速和可靠的检测手段.     

牛磺熊去氧胆酸的合成进展

牛磺熊去氧胆酸是由熊去氧胆酸的羧基和牛磺酸的氨基之间缩水而形成的结合型胆汁酸。主要介绍了目前四种牛磺熊去氧胆酸合成方法,并对四种方法的优缺点进行了全面的评价,从而为牛磺熊去氧胆酸的合理开发和利用提供思路。     

RNF149通过泛素化介导的CD9降解调控细胞增殖

选取功能未知的泛素连接酶RNF149作为研究对象．该分子同GRAIL(gene related to anergy in lymphocytes)具有较高的同源性,属于Ⅰ型跨膜蛋白．激光共聚焦显微镜的观察结果显示,RNF149是一个定位在溶酶体上的蛋白质,它与CD9在细胞内有共定位．免疫共沉淀实验证明RNF149与CD9有相互作用．RNF149通过泛素分子的第48位赖氨酸多泛素化CD9．在HeLa细胞中转染数量一定的CD9质粒和数量梯度增加的RNF149质粒24 h后,蛋白质印迹检测外源RNF149和CD9的表达,结果表明,随外源RNF149表达量梯度增高,外源CD9的表达量梯度降低．在HEK293T细胞内以shRNA敲低内源的RNF149,并检测内源CD9的变化,发现RNF149被敲低后内源CD9的量增多．上述结果提示,CD9很有可能是RNF149的底物,被RNF149通过泛素化降解．此外,RNF149被敲低的HEK293T细胞增殖受到抑制,这可能与其内源CD9的量增多有关,提示RNF149可能是一种细胞增殖的调控因子．     

中国陆地生态系统土壤氮矿化速率和硝化速率及影响因素——基于文献数据的统计分析

~(15)N同位素稀释技术是测量土壤氮总矿化速率(N_(min))和总硝化速率(N_(nit))的有效方法。为了解中国陆地生态系统土壤N_(min)和N_(nit)的空间格局及影响因素,本文基于采用~(15)N同位素稀释技术研究氮总转化速率(室内培养)的121篇文献,收集中国陆地生态系统(林地、草地、农田)N_(min)和N_(nit)数据进行分析。结果表明:1)全国土壤N_(min)和N_(nit)分别为6.03 mg N kg~(-1)d~(-1)和7.45 mg N kg~(-1)d~(-1)。北方土壤N_(min)(8.39 mg N kg~(-1)d~(-1))显著高于南方土壤(4.66 mg N kg~(-1)d~(-1));N_(nit)(8.40 mg N kg~(-1)d~(-1))高于南方土壤(6.96 mg N kg~(-1)d~(-1)),但差异性不显著(P0.05)。2)不同生态系统土壤N_(min)和N_(nit)的大小关系为:草地农田林地;农田草地林地。草地土壤N_(min)与林地、农田差异显著,显著高于林地(P=0.002)、农田(P=0.005);农田土壤N_(nit)与林地差异显著(P0.001),与草地差异不显著(P0.05)。3)北方土壤N_(min)和N_(nit)主要影响因素均为pH,与pH显著正相关;南方土壤N_(min)主要影响因素是总氮(Total Nitrogen, TN),与TN显著正相关;N_(nit)主要影响因素是铵态氮(Ammonium nitrogen, NH~+_4-N),与NH~+_4-N显著负相关。4)林地生态系统N_(min)和N_(nit)主要影响因素分别为TN和NH~+_4-N,N_(min)与TN显著正相关;N_(nit)与NH~+_4-N显著负相关;草地N_(min)和N_(nit)主要影响因素分别为土壤碳氮比(C/N)和总碳(Total Carbon, TC),N_(min)与土壤C/N显著负相关,N_(nit)与TC显著正相关;农田N_(min)和N_(nit)主要影响因素均为土壤C/N,与土壤C/N显著负相关。