APP695^K595N／M596L突变转基因小鼠的建立和病理表型动态分析

目的建立APP695^K595N／M596L（Swedish突变）转基因小鼠和评价痴呆表型的发生和发展过程。方法将APP695^K595N／M596L突变基因插入到小鼠朊蛋白（mouse prion protein）启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立APP695^K595N／M596L突变转基因C57BL／6J小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因表型,Western blotting检测APP突变基因表达。Thioflavin-S染色检测不同年龄转基因小鼠大脑病理改变。Morris水迷宫动态观察小鼠行为学改变。结果建立了人APP695^K595N／M596L转基因小鼠,Thioflavin-S染色显示转基因小鼠9月龄时在脑海马区可检测到老年斑形成,并且在11、12月龄时明显增多。Morris水迷宫结果发现与同月龄野生型小鼠相比,该转基因小鼠5月龄开始出现学习记忆能力缺陷,7、9、11月行为学结果证实转基因小鼠的学习记忆能力缺陷随年龄增加而日趋严重（P＜0．05）。结论建立了人APP695^K595N／M596L转基因小鼠,并能再现人类阿尔茨海默症的行为学及神经病理学特征,为阿尔茨海默病发病机制研究和药物研发提供了有价值的动物模型。     

肿瘤瘤苗研究进展

肿瘤瘤苗研究进展刘雪丰,张连峰,蔡有余（中国医学科学院实验动物研究所,北京）肿瘤瘤苗（ｔｕｍｏｒｖａｃｃｉｎｅｓ）是指能引起机体对肿瘤细胞的特异性免疫反应的物质。虽然肿瘤细胞的免疫原性很弱,但从本质上说肿瘤细胞属于异质细胞,其表面确实存在着特有的肿瘤...     

小小卫星DNA阳性克隆的鉴定及DNA指纹分析

提取四种近交系小鼠的肝脏ＤＮＡ,分别用ＨｉｎｆＩ和Ｈａｅ　Ⅲ酶切。用３３．１５和本课题组克隆的小鼠小卫星阳性克隆ＤＮＡ片断作探针,用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ随机引物标记,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,获得了理想的小鼠ＤＮＡ指纹图谱。初步确定阳性克隆ＤＮＡ片断Ｖ２具有较好的多态性,可作为小鼠基因组小卫星探针,用于实验动物的遗传监测、基因连锁分析和小鼠遗传图谱的研究。     

cTnT^（R141W）转基因小鼠扩张型心肌病模型的建立

目的建立cTnT^R141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT^R141W基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT^R141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT^R141W转基因小鼠的基因表型,实时PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnT^R141W转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个系的cTnT^R141W转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnT^R141W基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。病理分析显示cTnT^R141W转基因小鼠心房心室明显大于野生型,心室壁明显变薄,心肌细胞不均匀肥大,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室腔明显扩大,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数、短轴缩短率、室壁运动度明显降低。结论cTnT^R141W转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnT^R141W转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。     

黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG的纯化及抗血清的制备

目的 纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,制备兔抗金仓鼠和黑线毛足鼠血清IgG的抗血清。方法 用Hitrap Protein G亲和层析纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,经SDS-PAGE电泳鉴定纯度,标准免疫方法免疫兔子制备抗血清。结果 黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG对protein G有很高的亲合性,用Hitrap Protein G亲和层析纯化,得到高纯度黑线毛足鼠和金仓鼠IgG,利用纯化的IgG作抗原制备了高效价的抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32和1∶16。结论 证实黑线毛足鼠和金仓鼠IgG和Protein G具有很高的亲和性,Protein G亲和层析是纯化黑线毛足鼠和金仓鼠IgG有效的方法之一,制备了黑线毛足鼠和金仓鼠IgG的抗血清。     

长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

目的 纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法 采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果 7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论 建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。     

乌鳢血清免疫球蛋白IgM的分离纯化及其兔抗血清的制备

目的 分离纯化乌鳢血清免疫球蛋白,并制备其兔抗血清。方法 用Protein A亲和层析的方法纯化乌鳢血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,测定其重链、轻链的分子量,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价。结果 纯化了乌鳢血清免疫球蛋白,SDS-PAGE测定其重链和轻链的相对分子质量分别为78×10^3和27×10^3左右,免疫双扩散法测定兔抗乌鳢免疫球蛋白抗血清效价为1∶32。结论 成功纯化了乌鳢免疫球蛋白,制备了兔抗乌鳢IgM抗血清,为研究乌鳢的免疫机制、建立乌鳢的血清学检测系统奠定了基础。     

实时荧光定量PCR法检测转基因小鼠拷贝数

目的利用实时荧光定量PCR法鉴定转基因小鼠外源基因插入拷贝数。方法以TG-CARK转基因首见鼠为研究对象,选取小鼠的高度保守基因Fabpi为内参,利用绝对定量的实时荧光PCR法鉴定转基因小鼠拷贝数,并与传统的Southern blot方法的定量结果进行比较。结果实时定量PCR鉴定的转基因拷贝数与Southernblot法完全一致,三只TG-CARK首见小鼠的拷贝数分别为1,7,45。结论实时定量PCR技术具有高准确性、高稳定性、高通量和低成本的优点,是比传统杂交技术更好的鉴定小鼠转基因拷贝数的方法。     

心肌肌钙蛋白Ⅰ基因突变与心肌病的研究进展

心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌肌钙蛋白复合物的亚单位之一,与心肌肌钙蛋白T和C相互作用,与肌动蛋白-原肌球蛋白结合从而抑制肌动蛋白-肌球蛋白的收缩作用。在肥厚型、扩张型和限制型心肌病中发现30多种cTnI基因的突变,cTnI基因突变转基因小鼠也反映了心肌病的特征。本文总结了cTnI基因突变在心肌病发病机制中的研究情况。     

红色荧光和绿色荧光转基因小鼠模型的建立

目的建立红色荧光和绿色荧光转基因小鼠,为活体荧光影像系统建立重要的实验动物模型。方法把DsRed-Express和EGFP基因插入chicken-βactin强启动子下游构建转基因载体,建立红色荧光和绿色荧光转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定红色荧光和绿色荧光转基因小鼠的基因表型,活体荧光影像系统分析红色荧光和绿色荧光转基因小鼠,荧光显微镜检测红色荧光和绿色荧光转基因小鼠全身组织器官的组织形态。结果分别建立了3个系的红色荧光和3个系的绿色荧光转基因小鼠。活体荧光影像系统分析转基因小鼠分别呈现红色荧光和绿色荧光。经荧光显微镜观察,DsRed-Express转基因小鼠的红色荧光蛋白在多个组织器官中表达,尤其在胰腺、肝脏、肾脏和脾脏等器官表达量较高。EGFP转基因小鼠绿色荧光蛋白在全身各个组织器官中表达,尤其在胰腺、心脏、小肠、外周血细胞和脑组织等器官组织中表达量较高。结论DsRed-Express和EGFP基因在转基因小鼠中系统性高表达,成功建立了红色荧光和绿色荧光转基因小鼠。DsRed-Express和EGFP转基因小鼠将成为活体荧光影像系统的重要实验动物模型。