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集胞藻PCC6803铜离子诱导表达平台的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
在集胞藻PCC6803中,基因敲除是研究基因功能的最直接有效的方法,但是对于某些生存必需的基因则无法通过这种方法获得突变株。为研究集胞藻PCC6803中此类基因的功能,在其基因组中构建了一个petE基因启动子(PpetE)控制的铜离子诱导表达的平台。将集胞藻PpetE装配在lacZ报告基因的上游,通过同源双交换整合到这种蓝藻的基因组中。通过调节培养基中铜离子的浓度发现,lacZ的表达能够人为控制。特别是当铜离子浓度在6-400nmoL/L范围时,LacZ活力随铜离子浓度增加呈S型增长关系。利用这个铜离子诱导表达平台,可以控制某些必需基因的表达:提供铜离子维持细胞生存;而撤去铜离子时则关闭基因的表达,可以观察其对生命活动的影响。 相似文献
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真核多肽∶N-寡糖酶(peptide∶N-glycanase或PNGase)可切除错误折叠糖蛋白上的N-寡糖链,并可与内质网关联降解(endoplasmic reticulum-associated degradation, ERAD)途径中的多种关键成分相结合.然而,对于PNGase的生理功能及其与疾病的关系尚无明确报道.本研究利用重组技术表达和纯化了包含人PNGase N末端片段的融合蛋白,并经融合蛋白免疫与亲和层析纯化家兔抗血清,制备了PNGase的特异性抗体.利用该抗体和Western 印迹技术研究了PNGase在小鼠组织中的表达.结果显示PNGase在7种小鼠组织(脑、心、肺、肝、脾、肾、睾丸)中均有不同程度的表达,其中表达量最高者为睾丸;PNGase表达水平在不同品系小鼠(C57BL/6N、BALB/cAnN和昆明小鼠)间有显著差异.在小鼠单侧隐睾模型中首次观察到,与对照侧阴囊内的正常睾丸相比,隐睾内PNGase含量明显下降,提示PNGase在睾丸生精过程中可能有重要作用. 相似文献
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