eIF4A1与TrkA相互作用后抑制TrkA的泛素化

神经生长因子（NGF）结合细胞表面受体p75NTR(p75神经营养素受体)和TrkA（酪氨酸蛋白激酶A）后介导了细胞分化、细胞生存、凋亡、增殖和侵袭等多个重要的生理病理过程. TrKA能与细胞内多个蛋白质相互作用,但是由于NGF信号通路的复杂性,现在仍有必要发现与之相互作用的蛋白质以更准确地了解NGF信号通路. 本研究中我们通过酵母双杂交的方法筛选到了一个新的与TrKA相互作用的蛋白质——真核生物翻译起始因子4A1（eIF4A1）,然后通过谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白沉降实验（GST-pull-down）和免疫共沉淀实验（Co-IP）证明了TrkA和eIF4A1的相互作用. 此外NGF能够增强TrkA和eIF4A1的相互作用. 在鉴定相互作用位点实验中,我们发现eIF4A1的氨基端结构域和TrkA的TK结构域参与了相互作用. TrkA和eIF4A1共定位在细胞膜上. NGF能够引起TrkA与泛素蛋白63位的赖氨酸连接,而eIF4A1与TrkA相互作用后能够抑制TrkA与泛素蛋白63位的赖氨酸连接. 综上,得出结论 eIF4A1通过与TrkA相互作用抑制其泛素化调控NGF信号通路.     

shRNA干扰eIF4A1基因对胶质瘤细胞体内外生物学特征的影响

胶质瘤是颅内常见的肿瘤,其中恶性脑胶质瘤成弥漫性生长,尽管给予手术、放疗或化疗等综合治疗,仍极易复发,迫切需要探索新的治疗方法.但是胶质瘤的治疗靶点匮乏,因此探索有效的靶点对其治疗具有重要的意义.本研究中首先利用中国脑胶质瘤基因组图谱计划数据库(Chinese glioma genome altas, CGGA)分析了真核生物翻译起始因子中eIF4A1与脑胶质瘤的关系.生物信息学分析显示, eIF4A与胶质瘤病理分级相关并且在胶质瘤细胞中高表达. eIF4A1的抑制剂Silvestrol明显抑制胶质瘤细胞的增殖能力.利用慢病毒感染胶质瘤细胞建立shRNA干扰eIF4A1基因的胶质瘤细胞株,进行了一系列体内外生物学特征的实验,研究结果发现, shRNA干扰eIF4A1基因后能够有效抑制胶质瘤细胞的增殖、克隆形成、细胞侵袭和迁移.因此,本实验研究证实eIF4A1是胶质瘤治疗的有效靶点,为胶质瘤的临床治疗提供可靠的理论基础.     

生物转化法生产β-苯乙醇

β-苯乙醇是一种多功能的精细化学品,在食品、日化和轻工等领域有着广泛的应用,全球每年近万吨的β苯乙醇产品基本都是采用化学方法合成,随着人们对天然添加剂的日益需求,迫切需要开发其可以替代的新型生产技术,生物转化法是获得天然β-苯乙醇的最佳途径。概述了生物转化法生产β-苯乙醇的方法,着重介绍β苯乙醇合成的代谢途径、转化的微生物种类和β苯乙醇对酵母细胞毒性问题。     

维生素D受体最新研究进展

维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)是一种核转录因子,通过与配体特异结合,调控多种基因的表达,从而调节多种生命活动的进行.本文总结了近年来VDR的研究进展,主要包括VDR的作用机制、VDR行使功能所需共激活子及共抑制子、VDR在生长分化、免疫调节和抑制肿瘤等方面的作用及VDR配体类似物在药物开发研究领域的最新进展.     

蕲蛇酶配合中药治疗慢性肢体动脉硬化闭塞症

慢性肢体动脉硬化闭塞症主要是指肢体动脉硬化性闭塞,动脉壁增厚和失去弹性,最后导致血管壁僵硬,是老年人最常见的疚病。可分为细小动脉硬化、动脉中层钙化．动脉粥样硬化。其发病率有逐渐增多的趋势,多发于52岁以下男性,多并发有高血脂、高胆固醇及高血压、糖尿病等,且多有吸烟史,可有家族史．或由于缺乏维生素、感染、中毒、微量元素平衡失调、长期精神恐惧、悲观、过度思虑、情绪急躁、好胜等不良刺激致使外周血管长期处于紧张收缩状态．导致动脉壁营养障碍、管腔增厚狭窄及硬化。症状多见肢体末端皮色苍白或紫绀、畏冷、疼痛、间歇跛行;严重者皮肤破溃致坏死,体征见皮温低。皮色苍白或紫绀、趾甲增厚如鹰咀状、足背动脉搏动减弱,伯尔格氏征阳性。     

中国人SRY基因的分离、克隆和核苷酸序列分析

睾丸决定因子基因(Testis-determining factor,TDF)位于Y染色体短臂上,它的表达产物诱导睾丸组织的发生。SRY基因(Sex-determining Region of the Y)位于Y染色体的性别决定区内,许多特征显示SRY就是TDF。我们选用与SRY基因相应的引物,用PCR技术对正常人男女各10例的基因组DNA进行扩增。将特异扩增的男性SRY基因片段重组到质粒PUC12中,得到含有中国人SRY基因片段的克隆,命名为PSY-1、PSY-2。用[~(32)p]标记重组质粒中的SRY基因片段作探针,与PCR结果进行Southern杂交,男性样品均显示特异杂交带,女性样品为阴性。用末端终止法测定克隆的SRY基因片段的全部核苷酸序列为299bp,含有SRY基因中高度保守及功能特异性区域的240bp,我们对此进行了讨论。     

蚯蚓与人类的关系

第一,改良土壤。据粗略统计,在自然条件下,每平方米土壤中约有10—10条蚯蚓,而在有机质丰富的菜园中,每平方米可达300条,有的甚至达500—600条。折合每亩为几万到十几万条。这么多蚯蚓在土壤中以落叶、杂草、秸杆、烂菜、果皮、废渣等为食物,经过消化道的机械研磨和各种酶的作用,不仅能分解碳水化合物、脂肪、蛋白质以及象纤     

石炭纪的大型造煤植物

自从古生代志留纪末期裸蕨登陆,蕨类植物便迅速繁衍。到了石炭纪,地球上大部分地区气候温暖,土壤肥沃,遍布沼泽和低地,良好的环境条件,使蕨类植物的发展进入了全盛时期,出现了许多高大的乔木类型,构成大面积的沼泽森林景观。也就是从石炭纪开始地球上就有了较大规模的造煤运动。广布于我国北方的大煤田多是这一时期形成的。石炭纪是地质史上第一个大的造煤时期。     

DLL4和Notch4在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的探讨DLL4和Notch4在膀胱尿路上皮癌中的表达及其临床意义。方法收集福建医科大学附属第一医院2008-2010年有完整临床病理资料的膀胱尿路上皮癌存档蜡块85例和27例癌旁组织,采用组织芯片免疫组织化学法检测膀胱尿路上皮癌和癌旁组织DLL4和Notch4的表达水平。对DLL4和Notch4的表达进行半定量分析,并用SPSSl3．0软件对各组免疫组织化学反应阳性率采用x。检验或Fisher精确概率法分析。结果（1）DLL4和Notch4在膀胱尿路上皮癌中呈高表达,癌旁组织中呈低表达,差异有显著性（P〈O．05）。（2）Notch4和DLL4在膀胱尿路上皮癌中的表达与患者性别、年龄、临床分期、病理分级及初复发均无显著相关性（P〉0．05）。结论DLL4和Notch4在膀胱尿路上皮癌中的高表达与膀胱尿路上皮癌血管生成密切相关,阻断DLL4-Noteh4信号通路有望抑制膀胱尿路上皮癌的发生发展。     

在毕赤酵母中表达的重组人血管内皮生长因子(rhVEGF121)为氨基端4个氨基酸缺失的异构体

为获得重组人血管内皮生长因子 ,采用重叠PCR扩增出含Kozak顺序、α因子前导肽和hVEGF12 1的融合基因 ,经DNA测序无误后 ,插入Pichiapastoris酵母载体 ,并体外构建 4拷贝表达单元质粒pAO81 5 4KαVEGF12 1。表达载体转化酵母宿主菌GS1 1 5 ,筛选出高效表达hVEGF的转化子。摇瓶培养并 1 %甲醇诱导 80h的VEGF分泌性表达量可达 30mg L。表达产物经S Sepharose离子交换层析纯化后测活表明表达产物二聚体具有良好生物活性。SDS PAGE分析、Western印迹表明表达产物具有适宜的分子量和抗原性。VEGF蛋白经氨基端氨基酸测序证实纯化后的不同糖化程度产物为同一蛋白质 ,但均为氨基端缺失了 4个氨基酸的全长为 1 1 7个氨基酸的VEGF。